任冠恒，劉寧國(guó)，陳憶九，施　妍，鄒冬華，黃　平，李正東，邵　煜，鄧愷飛（1.南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，廣東廣州510515；.司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所上海市法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海00063）

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MALDI-TOF-MS對(duì)DAI大鼠腦干蛋白質(zhì)組學(xué)的分析

任冠恒1，2，劉寧國(guó)2，陳憶九2，施妍2，鄒冬華2，黃平2，李正東2，邵煜2，鄧愷飛2
（1.南方醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)系，廣東廣州510515；2.司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所上海市法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海200063）

摘要：目的應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸/電離－飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrix－assisted laser desorption/ionization timeof－flight mass spectrometry，MALDI－TOF－MS）技術(shù)建立彌漫性軸索損傷（diffuse axonal injury，DAI）診斷模型，篩選DAI相關(guān)蛋白或多肽，為尋找DAI的分子標(biāo)志物提供理論基礎(chǔ)。方法將15只雄性SD大鼠隨機(jī)分為DAI組（n=10）和對(duì)照組（n=5），采用MALDI－TOF－MS技術(shù)對(duì)兩組大鼠腦干組織的蛋白或多肽表達(dá)譜進(jìn)行檢測(cè)，運(yùn)用ClinProTools 2.2分析軟件篩選出具有差異的分子峰，應(yīng)用遺傳算法建立診斷模型。結(jié)果篩選出有差異的分子峰61個(gè)（P＜0.05），其中DAI組有9個(gè)分子峰下調(diào)，52個(gè)分子峰上調(diào)。篩選出5個(gè)分子峰建立診斷模型，交叉驗(yàn)證的特異性為96.14%、敏感性為95.98%，盲法驗(yàn)證結(jié)果的特異性為73.33%、敏感性為70.00%。結(jié)論應(yīng)用MALDI－TOF－MS技術(shù)不僅能夠建立特異性和敏感性較高的DAI診斷模型，還可以篩選差異蛋白或多肽，為DAI的法醫(yī)學(xué)鑒定奠定理論基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：法醫(yī)病理學(xué)；彌漫性軸索損傷；質(zhì)譜分析法；基質(zhì)輔助激光解吸電離；腦干；大鼠

彌漫性軸索損傷（diffuse axonal injury，DAI）是指頭部遭受鈍性外力作用后所產(chǎn)生以腦白質(zhì)軸索彌漫性損傷為主要特征的一種腦損傷[1]。在法醫(yī)學(xué)實(shí)踐中，約80%因交通事故所引起的顱腦損傷存在DAI，約1/3因顱腦損傷死亡的案例與DAI有關(guān)[2]。由于DAI以腦白質(zhì)軸索彌漫性損傷為主要特征，缺乏明確的神經(jīng)系統(tǒng)損害定位體征以及影像學(xué)改變[3]，且DAI的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，造成的后果嚴(yán)重，死亡率和致殘率均較高，尸體檢驗(yàn)僅憑宏觀及一般組織學(xué)檢查不易診斷，因而DAI不僅是臨床上診治的難點(diǎn)，也是法醫(yī)學(xué)鑒定中面臨的難題。

基質(zhì)輔助激光解吸/電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜（matrixassisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展最快的蛋白質(zhì)組學(xué)新技術(shù)之一，通過(guò)獲得生物組織中多肽和蛋白的表達(dá)譜，以差異蛋白質(zhì)組學(xué)手段篩選并識(shí)別有顯著意義的分子標(biāo)志物，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)及醫(yī)學(xué)的各個(gè)研究領(lǐng)域[4]。本研究利用MALDI-TOF-MS技術(shù)對(duì)DAI大鼠和正常大鼠腦干的蛋白質(zhì)或多肽表達(dá)譜進(jìn)行比較分析，尋找對(duì)DAI診斷具有意義的差異性分子，并依據(jù)遺傳算法建立診斷模型，為DAI的法醫(yī)學(xué)鑒定奠定理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與DAI模型制作

15只健康雄性SD大鼠（上海市杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供），體質(zhì)量200~220g，隨機(jī)分成DAI組（n=10）和對(duì)照組（n=5），用于蛋白或多肽表達(dá)譜的質(zhì)譜檢測(cè)；25只健康雄性SD大鼠（上海市杰思捷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供），體質(zhì)量200~220g，隨機(jī)分成DAI組（n=15）和對(duì)照組（n=10），用于盲法驗(yàn)證。

DAI組參照Marmarou等[5]的方法制作腦損傷動(dòng)物模型。用1%苯巴比妥鈉溶液以50mg/kg腹腔注射麻醉，生效后去除大鼠頭頂部毛發(fā)，碘伏常規(guī)消毒，在相當(dāng)于人字縫和矢狀縫處作正中切口，分離頭皮、骨膜，暴露顱骨，將直徑20 mm、厚3 mm的圓形不銹鋼墊片粘于頭頂正中，將大鼠俯臥固定于已知彈性系數(shù)的海綿床上，500g砝碼從1m高度由PE管內(nèi)自由落體垂直打擊墊片上，立即移開(kāi)大鼠以免二次損傷，縫合大鼠頭皮，術(shù)后動(dòng)物常規(guī)進(jìn)食進(jìn)水。對(duì)照組大鼠麻醉后僅行頭皮切開(kāi)手術(shù)，不進(jìn)行打擊，縫合頭皮后常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2染色及質(zhì)譜檢測(cè)

1.2.1切片制備和染色

損傷24 h后，大鼠用1%苯巴比妥溶液麻醉，經(jīng)心穿刺放血致死，解剖獲得腦組織，用鋁箔松軟包裹，在-20℃冷凍30 s后，立即轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存至冰凍切片。

切片時(shí)，提取大鼠腦干組織，作矢狀面切開(kāi)，將腦干組織矢狀面朝上用OCT冰凍切片包埋劑固封根部，并固定于CM 1950低溫恒溫器（德國(guó)Leica公司）的切割平臺(tái)上，連續(xù)切片后進(jìn)行HE染色和銀染。供MALDI-TOF-MS檢測(cè)的切片自然快速地融裱在導(dǎo)電玻片上，然后將導(dǎo)電玻片轉(zhuǎn)入真空干燥器，抽氣以去除切片中的水分。然后分別用70%、90%、100%的乙醇溶液各浸洗玻片30s，以除去鹽類(lèi)和小分子脂質(zhì)等干擾成分，再將玻片轉(zhuǎn)入真空干燥器干燥。

1.2.2基質(zhì)覆蓋

稱(chēng)取適量SA基質(zhì)，以V（乙腈）∶V（水）=6∶4為溶劑，配制成質(zhì)量濃度為10mg/mL的基質(zhì)溶液（含0.2%三氟乙酸）。用ImagePrep自動(dòng)基質(zhì)噴霧裝置（德國(guó)Bruker公司）將基質(zhì)溶液均勻噴于組織切片上。

1.2.3質(zhì)譜檢測(cè)

用掃描儀掃描融裱有組織切片的靶盤(pán)圖片，將其導(dǎo)入成像軟件FlexImaging 3.0（德國(guó)Bruker公司）中，手動(dòng)定義激光的掃描區(qū)域。將制備好的樣品靶通過(guò)AutoFlexⅢMALDI-TOF質(zhì)譜儀（德國(guó)Bruker公司）檢測(cè)口放入質(zhì)譜儀內(nèi)部托盤(pán)并固定。啟動(dòng)激光系統(tǒng)提供脈沖激光，打擊樣品靶點(diǎn)，通過(guò)FlexControl 3.0軟件（德國(guó)Bruker公司）設(shè)置儀器參數(shù)，采用正離子模式和線性模式，激光頻率200 Hz，能量范圍44%，在質(zhì)荷比1 000~20 000范圍內(nèi)掃描和采集數(shù)據(jù)。采用ClinProTools 2.2軟件（德國(guó)Bruker公司）對(duì)質(zhì)譜圖進(jìn)行平滑、對(duì)齊、歸一化等處理。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

利用ClinProTools 2.2軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。把差異分子峰通過(guò)遺傳算法進(jìn)行優(yōu)化選擇，建立診斷模型，采用盲法對(duì)未知的25個(gè)樣本進(jìn)行驗(yàn)證。

2結(jié)　果

2.1 HE染色和銀染結(jié)果

HE染色：DAI組腦干組織結(jié)構(gòu)疏松，廣泛性淤血、水腫，神經(jīng)元變性水腫，腦實(shí)質(zhì)內(nèi)偶見(jiàn)灶性出血（圖1A）；對(duì)照組未見(jiàn)異常。

銀染：DAI組可見(jiàn)腦干神經(jīng)軸索不規(guī)則增粗、腫脹、斷裂及收縮球形成，排列稀疏（圖1B）；對(duì)照組未見(jiàn)異常。

2.2 MALDI－TOF－MS檢測(cè)結(jié)果

DAI組和對(duì)照組的平均質(zhì)譜圖見(jiàn)圖2，質(zhì)荷比（m/z）在1 000～20 000范圍內(nèi)，DAI組與對(duì)照組有差異的分子峰為61個(gè)（P＜0.05，表1），與對(duì)照組相比，DAI組有9個(gè)分子峰下調(diào)，52個(gè)分子峰上調(diào)。利用遺傳算法對(duì)61個(gè)差異分子峰進(jìn)行模型運(yùn)算，篩選出兩組中符合條件的5個(gè)差異分子峰，質(zhì)荷比分別為1279.52、1951.16、3164.80、12342.10及14125.01，其中1279.52、3 164.80、12 342.10及14 125.01差異分子峰在DAI組中高表達(dá)，而1951.16差異分子峰在DAI組中低表達(dá)，建立診斷模型（表2），交叉驗(yàn)證的特異性為96.14%，敏感性為95.98%。

2.3診斷模型盲法驗(yàn)證

運(yùn)用遺傳算法建立模型后，調(diào)入未經(jīng)模型識(shí)別的15例大鼠DAI腦干樣本和10例正常腦干樣本的數(shù)據(jù)，利用建成的模型對(duì)其進(jìn)行分類(lèi)，分類(lèi)結(jié)果顯示，診斷DAI的敏感性為73.33%（11/15），特異性為70.00% （7/10）。

表1 DAI組的61個(gè)差異分子峰　?。ā纒）

表1 DAI組的61個(gè)差異分子峰　　（±s）

蛋白平均強(qiáng)度峰序號(hào)質(zhì)荷比蛋白平均強(qiáng)度DAI組（n=10）2　 1139.44 6.36±1.20 4.88±1.28 　 27　 4321.52 0.89±0.19 1.30±0.25 　 49　 8726.48 0.29±0.11 0.35±0.10 3　 1173.83 13.04±5.88 4.59±0.94　 28　 4466.07 0.85±0.19 1.30±0.28　 50　 8950.94 0.54±0.33 1.33±0.84 4　 1207.74 10.48±2.82 6.26±1.65　 29　 4714.93 0.95±0.22 1.37±0.27　 51　 9215.99 0.45±0.20 0.81±0.26 5　 1279.52 4.52±1.14 5.71±1.64　 30　 4860.72 0.77±0.18 1.05±0.22　 52　 9981.82 0.77±0.54 2.97±2.16 6　 1403.07 6.84±2.40 3.59±0.59　 32　 5162.89 0.70±0.18 1.03±0.22　 53　 10190.69 0.14±0.04 0.31±0.14 7　 1439.28 10.58±4.05 4.23±1.31　 33　 5301.62 0.64±0.18 1.03±0.25　 54　 10654.19 0.09±0.03 0.19±0.09 9　 1665.85 6.79±2.14 2.99±0.43　 34　 5405.23 0.56±0.14 0.87±0.20　 55　 10800.17 0.10±0.03 0.18±0.07 10　 1895.88 3.93±0.86 2.22±0.36　 35　 5498.59 0.73±0.29 0.92±0.29　 56　 11329.33 0.09±0.03 0.17±0.08 11　 1951.16 3.53±0.54 2.56±0.42　 36　 5641.28 1.11±0.50 1.90±0.90　 57　 11982.05 0.12±0.07 0.26±0.12 12　 2207.12 2.61±0.34 2.28±0.33　 37　 5920.17 0.47±0.13 0.69±0.16　 58　 12141.33 0.13±0.07 0.61±0.62 15　 2595.50 1.77±0.25 1.90±0.29　 38　 6081.35 0.43±0.11 0.78±0.22　 59　 12342.10 0.08±0.04 0.19±0.08 17　 2825.79 1.63±0.24 1.88±0.29　 39　 6165.51 0.54±0.15 0.80±0.19　 60　 12955.49 0.08±0.02 0.18±0.11 18　 2956.53 1.54±0.23 1.65±0.23　 40　 6542.84 0.36±0.09 0.61±0.14　 61　 14125.01 5.47±3.43 9.85±4.38 19　 3019.77 1.48±0.22 1.69±0.26　 41　 6729.13 0.39±0.11 0.59±0.18　 62　 15182.57 0.11±0.05 0.52±0.63 20　 3164.80 1.45±0.22 1.72±0.27　 42　 7075.78 2.56±1.20 3.95±1.33　 63　 15845.77 0.08±0.03 0.22±0.19 21　 3374.07 1.24±0.20 1.50±0.26　 43　 7597.74 0.29±0.07 0.55±0.15　 64　 16257.16 0.07±0.03 0.16±0.07 22　 3533.02 1.21±0.22 1.53±0.29　 44　 7862.45 0.26±0.09 0.39±0.10　 65　 17156.10 0.09±0.04 0.16±0.09 23　 3670.93 1.14±0.23 1.44±0.27　 45　 8059.30 0.23±0.07 0.37±0.10　 67　 18393.34 0.36±0.24 0.63±0.32 24　 3829.29 1.12±0.26 1.54±0.31　 46　 8245.28 0.19±0.05 0.33±0.09　 68　 19510.04 0.05±0.02 0.11±0.06 25　 3936.63 0.95±0.19 1.27±0.26　 47　 8352.88 0.20±0.06 0.33±0.09 26　 4209.38 0.86±0.17 1.19±0.24　 48　 8578.80 0.45±0.19 0.78±0.54蛋白平均強(qiáng)度對(duì)照組（n=5）DAI組（n=10）峰序號(hào)質(zhì)荷比　對(duì)照組（n=5）DAI組（n=10）峰序號(hào)　質(zhì)荷比　對(duì)照組（n=5）

表2遺傳算法優(yōu)化選擇篩選出符合條件的5個(gè)差異分子峰　?。╪=15）

3討　論

作為頭部遭受鈍性外力作用的重要后果之一，DAI近年來(lái)日益得到法醫(yī)病理學(xué)界的重視。目前研究認(rèn)為，DAI發(fā)生機(jī)制及病理改變?yōu)槟X組織各部位間遭受不均一變速及旋轉(zhuǎn)作用后產(chǎn)生的剪切應(yīng)力作用，使腦組織在受壓及回位過(guò)程中產(chǎn)生相對(duì)運(yùn)動(dòng)，導(dǎo)致神經(jīng)軸索發(fā)生廣泛的變形、斷裂并出現(xiàn)特征性軸索收縮球[6]。軸索收縮球是診斷DAI的可靠依據(jù)，目前普遍認(rèn)為，軸索收縮球的形成至少需要12～24h[7]。本研究在大鼠DAI損傷后24h利用銀染法觀察到收縮球。

分子標(biāo)志物的發(fā)展和應(yīng)用已有一百多年的歷史。目前，最廣泛用于診斷DAI的分子標(biāo)志物是β－淀粉樣前體蛋白（β－amyloid precursor protein，β－APP）、核轉(zhuǎn)錄因子（nuclear factor，NF）、Homer1、S100BB、髓磷脂堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）[8－12]等。生物分子標(biāo)志物的檢測(cè)常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）等方法[13]，但關(guān)于DAI早期診斷的問(wèn)題至今尚未解決，原因是這些分子標(biāo)志物的敏感性和特異性均較低。近年來(lái)，蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展給分子標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)帶來(lái)了新的機(jī)遇，該技術(shù)能夠從整體分析組織的蛋白表達(dá)譜，有望發(fā)現(xiàn)一組相關(guān)的蛋白質(zhì)或多肽代替單一分子標(biāo)志物以達(dá)到早期診斷的目的[14]。

MALDI－TOF－MS是蛋白質(zhì)研究技術(shù)常用方法之一[15]，對(duì)損傷區(qū)直接掃描，利用質(zhì)譜快速、敏感的分辨能力完成對(duì)損傷區(qū)蛋白質(zhì)譜的整體收集，利用計(jì)算機(jī)技術(shù)的強(qiáng)大數(shù)據(jù)分析能力比較損傷區(qū)組織與正常組織間蛋白表達(dá)差異，具有高通量、高靈敏度和高精度的特點(diǎn)[16]。

本研究利用MALDI－TOF－MS技術(shù)，聯(lián)合應(yīng)用ClinProTools 2.2分析軟件，通過(guò)對(duì)DAI大鼠和正常大鼠腦干組織的蛋白和多肽指紋圖譜進(jìn)行分析，篩選出具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異分子峰61個(gè)（P＜0.05，表1），與對(duì)照組相比，DAI組中有9個(gè)分子峰出現(xiàn)低表達(dá)，52個(gè)分子峰高表達(dá)。DAI的發(fā)生發(fā)展導(dǎo)致了這些蛋白或多肽的上調(diào)和下調(diào)，DAI的發(fā)生發(fā)展除了外力直接引起原發(fā)性軸索損傷外，損傷數(shù)小時(shí)后還可引起繼發(fā)性軸索損傷，這與細(xì)胞鈣超載有著直接的關(guān)系[17]。這些蛋白或多肽的表達(dá)增多可能通過(guò)調(diào)節(jié)鈣釋放，參與損傷和修復(fù)的過(guò)程。而蛋白或多肽的表達(dá)下調(diào)可能與DAI后體內(nèi)蛋白質(zhì)或多肽降解有關(guān)。這些蛋白或多肽的上調(diào)和下調(diào)對(duì)于了解DAI的機(jī)制有一定意義，而且篩選出的61個(gè)差異分子有可能成為DAI的潛在標(biāo)志物。Li等[18]報(bào)道MBP是腦白質(zhì)中含量最豐富的蛋白之一，MBP的N末端降解產(chǎn)物在腦損傷發(fā)生2h后迅速增加，1～2d達(dá)到高峰，其相對(duì)分子質(zhì)量分別為8 000和10 000，從表1中可以找到兩個(gè)m/z分別為8059.30和10190.69的分子峰，且這兩個(gè)分子峰均表達(dá)上調(diào)，很可能為MBP的N末端降解產(chǎn)物。這兩個(gè)分子峰雖然沒(méi)有選入最終的診斷模型，但這兩個(gè)峰顯示出了顯著的差異性和特異性，可以作為DAI的重要分子標(biāo)志物。

采用遺傳算法對(duì)兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行組合優(yōu)化，篩選多個(gè)差異分子峰建立DAI的診斷模型，該診斷模型具有較高的敏感性和特異性。遺傳算法建立的診斷模型，與當(dāng)前蛋白質(zhì)組學(xué)研究所提出的利用幾種蛋白質(zhì)聯(lián)合進(jìn)行診斷的原理相一致。

本研究說(shuō)明，利用MALDI－TOF－MS在組織病理學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)方面的新技術(shù)，以差異蛋白質(zhì)組學(xué)手段對(duì)比研究DAI前后蛋白質(zhì)或多肽表達(dá)譜的變化，能同時(shí)快速地篩選出多種差異分子，不僅可以發(fā)現(xiàn)一些上調(diào)或下調(diào)的蛋白質(zhì)或多肽，而且對(duì)進(jìn)一步了解這些蛋白質(zhì)或多肽的互相作用及其與外周環(huán)境的關(guān)系，從而為深入探討DAI的發(fā)生機(jī)制提供依據(jù)。因此，MALDI－TOF－MS技術(shù)對(duì)于拓展傳統(tǒng)病理形態(tài)學(xué)研究領(lǐng)域，豐富法醫(yī)病理學(xué)研究方法必將有很大幫助。

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（本文編輯：黃平）

書(shū)訊

《視覺(jué)功能檢查及客觀評(píng)定的法醫(yī)學(xué)原則與方法》由司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)研究所王萌、夏文濤與中國(guó)政法大學(xué)證據(jù)科學(xué)研究院王旭共同主編。本書(shū)側(cè)重于眼外傷鑒定中視覺(jué)功能障礙評(píng)定這一公認(rèn)的難點(diǎn)問(wèn)題，圍繞“十二·五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目目標(biāo)與任務(wù)，重點(diǎn)探討了視覺(jué)功能障礙的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)方法與結(jié)果評(píng)價(jià)原則，強(qiáng)調(diào)檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)的規(guī)范性、一致性，有助于司法鑒定相關(guān)實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)與質(zhì)量控制活動(dòng)，對(duì)視覺(jué)功能障礙的法醫(yī)臨床學(xué)鑒定具有重要的指導(dǎo)意義。

全書(shū)共分七章，涵蓋了視力、視野等視覺(jué)功能心理物理學(xué)檢查、眼球結(jié)構(gòu)的一般檢查與特殊輔助檢查、偽盲、偽裝視力降低與夸大視野缺損的心理物理學(xué)及其視覺(jué)電生理檢查，還包括了目前在法醫(yī)臨床學(xué)鑒定實(shí)踐中尚未廣泛應(yīng)用的微視野技術(shù)、多焦視覺(jué)電生理技術(shù)等內(nèi)容。在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)技術(shù)介紹的同時(shí)，重點(diǎn)闡述了基本原理與作者所在研究團(tuán)隊(duì)的研究成果，可供讀者在鑒定與研究中借鑒、參考。

該書(shū)定價(jià)52元，包裝郵寄費(fèi)8元，共計(jì)60元。有意購(gòu)書(shū)者請(qǐng)與本編輯部聯(lián)系。

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Proteomic Analysis of Rat Brain Stem with DAI by MALDI-TOF-MS

REN Guan-heng1,2, LIU Ning-guo2, CHEN Yi-jiu2, SHI Yan2, ZOU Dong-hua2, HUANG Ping2, LI Zhengdong2, SHAO Yu2, DENG Kai-fei2
（1. Department of Forensic Science, School of Basic Medicine Science, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China; 2. Shanghai Key Laboratory of Forensic Medicine, Institute of Forensic Science, Ministry of Justice, P.R.China, Shanghai 200063, China）

Abstract：Objective To establish a diagnostic model for diffuse axonal injury（DAI）by matrix－assisted laser desorption/ionization time－of－flight mass spectrometry（MALDI－TOF－MS）. To screen the proteins or peptides associated with DAI for providing the biomarkers with theoretic foundation. Methods Fifteen male Sprague－Dawley rats were randomly divided into DAI group（n=10）and control group（n=5）. The protein or peptide expression profiles of rat brain stem were detected by MALDI－TOF－MS. ClinProTools 2.2 software was used to find specific peaks, and a diagnostic model was established by the genetic algorithm. Results There were significant differences in 61 peaks of DAI group（P＜0.05）, 9 peaks were down－regulated and 52 up－regulated. The diagnostic model was established based on 5 different peaks. The specificity and sensitivity of cross validation was 96.14% and 95.98%; while the specificity and sensitivity of blind validation showed was 73.33% and 70.00%, respectively. Conclusion A specific and sensitive diagnostic model of DAI can be established by MALDI－TOF－MS to provide a potential value for determining DAI in forensic practice.

Key words：forensic pathology; diffuse axonal injury; mass spectrometry; matrix－assisted laser desorption－ionization; brain stem; rats

收稿日期：（2015-12-17）

通信作者：劉寧國(guó)，男，研究員，主任法醫(yī)師，主要從事法醫(yī)病理學(xué)研究；E－mail：liuningguo@foxmail.com 陳憶九，男，研究員，博士研究生導(dǎo)師，主要從事法醫(yī)病理學(xué)研究；E－mail：chenyj@ssfid.cn

作者簡(jiǎn)介：任冠恒（1990—），女，碩士研究生，主要從事法醫(yī)病理學(xué)研究；E－mail：rgh_0101@163.com

基金項(xiàng)目：中央級(jí)科研院所科研專(zhuān)項(xiàng)（GY2013Z－3、GY2015G－2）

文章編號(hào)：1004－5619（2016）01－0013－05

中圖分類(lèi)號(hào)：DF795.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

doi：10.3969/j.issn.1004－5619.2016.01.003