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        不同處理方法對(duì)小麥葉片生理指標(biāo)測(cè)定值的影響

        2016-03-22 21:23:25張軍
        新農(nóng)業(yè) 2016年2期
        關(guān)鍵詞:鮮樣生理指標(biāo)液氮

        摘 要:采用鮮樣與冷凍樣、磷酸緩沖液與液氮研磨等不同方法處理乳熟期小麥葉片,分光光度計(jì)法測(cè)定葉片保護(hù)酶活性等指標(biāo)。結(jié)果表明:鮮樣、液氮研磨下保護(hù)酶活性最高,MDA含量最低;液氮冷凍后的可溶性蛋白含量整體低于鮮樣所測(cè)值。鮮樣液氮研磨所測(cè)生理值更接近葉片本身的實(shí)際生理情況。

        關(guān)鍵詞:鮮樣;冷凍樣;磷酸緩沖液;液氮;生理指標(biāo)

        逆境脅迫后,植物葉片會(huì)迅速感應(yīng),生理生化代謝會(huì)發(fā)生一系列變化。有關(guān)逆境脅迫后小麥葉片生理生化研究已有大量文獻(xiàn)報(bào)道。在保護(hù)酶等指標(biāo)測(cè)定方法上,大多采用鮮樣加磷酸緩沖液冰浴研磨,或液氮冷凍處理后放置-86℃冰箱后再磷酸緩沖液冰浴研磨,用分光光度計(jì)進(jìn)行比色。筆者在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),對(duì)于苗期幼葉研磨較容易,而對(duì)于生長(zhǎng)中后期的葉片很難充分研磨。另外也鮮見(jiàn)有關(guān)不同處理方法對(duì)小麥葉片生理生化測(cè)定值影響的報(bào)道。為此,以小麥乳熟期旗葉為材料,采用鮮樣與冷凍樣、磷酸緩沖液與液氮研磨等不同處理,對(duì)葉片SOD活性等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定,以期為植物葉片生理指標(biāo)準(zhǔn)確測(cè)定提供參考。

        1 材料與方法

        1.1 材料與培養(yǎng)

        試驗(yàn)于2013~2014年在西北農(nóng)林科技大學(xué)進(jìn)行。選用小偃22為供試材料,2013年10月7日播種,日常管理參照大田。小麥開(kāi)花期對(duì)同一天開(kāi)花、旗葉大小相對(duì)均勻的麥穗掛牌標(biāo)記,花后14天(小麥進(jìn)入籽粒乳熟期)取掛牌標(biāo)記的所有旗葉,放入冰盒后迅速帶回實(shí)驗(yàn)室。自來(lái)水沖洗,冰上將混合樣分成4份備用。

        1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

        采用4種不同方式進(jìn)行研磨。鮮樣、磷酸緩沖液研磨,鮮樣、液氮研磨,液氮處理、磷酸緩沖液研磨,液氮處理、液氮研磨。其中,液氮處理為將葉片在液氮中冷凍10分鐘后轉(zhuǎn)入-86℃冰箱冷凍2小時(shí),液氮研磨為充分研磨后再加等量磷酸緩沖液,其余步驟均相同。

        1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

        SOD活性測(cè)定采用氮藍(lán)四唑法,POD活性測(cè)定采用愈創(chuàng)木酚法,CAT活性采用過(guò)氧化氫法,可溶性蛋白含量測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)G-250法,MDA含量測(cè)定采取硫代巴比妥酸。以上生理指標(biāo)測(cè)定方法參考姜麗娜等方法。每個(gè)指標(biāo)6次重復(fù)。

        1.4 數(shù)據(jù)處理

        Excel2003整理數(shù)據(jù),SAS8.1軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 不同處理方法對(duì)小麥葉片保護(hù)酶活性的影響

        由圖1可得,不同處理方法下小麥葉片保護(hù)酶活性呈相同變化趨勢(shì)。其中,均為A1B2處理下SOD、POD和CAT活性最高,依次為502.79單位/克、137.02單位/克和52.87單位/克,其次為A2B2,A1B1處理下3種酶活性最低??梢?jiàn)液氮處理有助于葉片維持較高地保護(hù)酶活性。

        2.2 不同處理方法對(duì)小麥葉片可溶性蛋白和MDA含量的影響

        由圖2可得,不同處理方法下小麥葉片可溶性蛋白和MDA含量呈不同變化趨勢(shì)。其中,可溶性蛋白在A1B1處理下最高,A2B1處理下最低;而葉片MDA含量在A2B1處理下最高,A1B2處理下最低;處理間差異不顯著。

        3 討論與結(jié)論

        液氮因其本身可提供較低的溫度常用來(lái)作為保存材料的介質(zhì)。近年來(lái)涉及液氮保存的生物材料有原生質(zhì)體、愈傷組織和種子等。在超低溫環(huán)境下,植物細(xì)胞內(nèi)自由水被迅速固化,酶促反應(yīng)停止,新陳代謝被抑制,植物材料處于生理停頓狀態(tài),這最大限度地保證了復(fù)蘇后細(xì)胞的生活力。因此本研究利用液氮處理材料是可行的。

        本研究中,A1B2處理下葉片3種保護(hù)酶活性最高。這可能是液氮冷凍下研磨更徹底、提取更充分,更加接近葉片本身的實(shí)際生理情況所致。另外,A1B2處理下MDA含量最低,也佐證了試驗(yàn)結(jié)果的可靠性。而液氮冷凍后的可溶性蛋白含量整體低于鮮樣所測(cè)值,可見(jiàn)液氮冷凍后可溶性蛋白也會(huì)發(fā)生部分分解。因此,當(dāng)樣品較少時(shí),鮮樣液氮研磨所測(cè)生理值相對(duì)更準(zhǔn)確些。液氮冷凍時(shí)間及保存時(shí)間對(duì)葉片生理測(cè)定值的影響,則有待于進(jìn)一步研究。

        基金項(xiàng)目:商洛學(xué)院科學(xué)與技術(shù)研究基金項(xiàng)目(15SKY009)。

        作者簡(jiǎn)介:張軍(1987-),男,碩士研究生,主要從事小麥抗逆生理研究。

        (責(zé)任編輯 亓 國(guó))

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