梁飛燕， 盧日剛

1.廣西-東盟食品藥品安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，廣西南寧 530021；2.廣西食品藥品檢驗(yàn)所，廣西南寧 530021)

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動(dòng)物源性食品中多獸藥殘留檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

梁飛燕1， 盧日剛2

1.廣西-東盟食品藥品安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，廣西南寧 530021；2.廣西食品藥品檢驗(yàn)所，廣西南寧 530021)

動(dòng)物源性食品中獸藥殘留已成為日益突出的問(wèn)題，因此檢測(cè)并監(jiān)控動(dòng)物源性食品中的獸藥殘留具有重要的意義。就近年來(lái)國(guó)內(nèi)外動(dòng)物源性食品中獸藥殘留檢測(cè)的前處理方法和分析技術(shù)展開(kāi)了探討和分析，為獸藥殘留檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)提供一定的參考和依據(jù)。

動(dòng)物源性食品；獸藥殘留；檢測(cè)方法

獸藥殘留是指用藥后蓄積或存留于畜禽機(jī)體或產(chǎn)品(如雞蛋、奶品、肉品等)中的原型藥物或其代謝產(chǎn)物，包括與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)的殘留。近年來(lái)我國(guó)畜牧業(yè)得到了迅猛發(fā)展，畜產(chǎn)品品種日益豐富，但由于科學(xué)知識(shí)的缺乏和經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，一些養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)在養(yǎng)殖過(guò)程中非法使用藥物，濫用抗生素和藥物添加劑，不遵守休藥期的規(guī)定，超標(biāo)使用獸藥的現(xiàn)象普遍存在，導(dǎo)致動(dòng)物源性食品中的獸藥殘留成為了日益突出的問(wèn)題，引起了公眾的普遍關(guān)注。獸藥殘留嚴(yán)重危害了人類的身體健康，表現(xiàn)為過(guò)敏反應(yīng)、三致(致癌、致畸、致突變)作用、細(xì)菌耐藥性以及激素作用等，同時(shí)獸藥殘留還可以通過(guò)環(huán)境和食物鏈的間接作用，給生態(tài)環(huán)境帶來(lái)不利影響。

目前，動(dòng)物源性食品常見(jiàn)的獸藥殘留有：抗生素類、磺胺類、呋喃類、抗球蟲藥、激素類、鎮(zhèn)靜劑、生長(zhǎng)促進(jìn)劑以及蛋白同化激素等。動(dòng)物源性食品種類繁多，樣品基質(zhì)復(fù)雜，檢測(cè)目標(biāo)物種類和組分多，理化性質(zhì)差異大，是獸藥殘留分析檢測(cè)技術(shù)面臨的重大難題。如何簡(jiǎn)化分析檢測(cè)方法，提高提取和凈化效率，提高檢測(cè)靈敏度，成為了獸藥殘留分析發(fā)展的方向。筆者就近年來(lái)國(guó)內(nèi)外動(dòng)物源性食品中獸藥殘留分析檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行了分析，對(duì)動(dòng)物源性食品中獸藥殘留的檢測(cè)方法和研究思路進(jìn)行探索。

1　樣品前處理技術(shù)

樣品中殘留水平低是獸藥殘留的特點(diǎn)，而且動(dòng)物源性食品復(fù)雜，基質(zhì)干擾大，對(duì)殘留物不易進(jìn)行分離、純化。樣品前處理技術(shù)是分析檢測(cè)的重要環(huán)節(jié)，直接影響到分析結(jié)果的各項(xiàng)指標(biāo)、成本和效率。

1.1固-液萃取法固-液萃取，也叫浸取，用溶劑分離固體混合物中的組分，是獸藥殘留分析傳統(tǒng)的前處理方法。該法使用的萃取溶劑對(duì)目標(biāo)化合物要有很好的溶解能力。如張雪嬌等[1]直接采用了10%三氯乙酸-乙腈(V/V=20∶80)作為萃取溶劑，經(jīng)過(guò)重復(fù)提取、濃縮過(guò)濾后測(cè)定了動(dòng)物源性食品中42種獸藥殘留。國(guó)內(nèi)外也有相關(guān)文獻(xiàn)[2-5]報(bào)道了通過(guò)采用乙腈或酸化乙腈等溶劑提取樣品中目標(biāo)物后，通過(guò)正己烷脫脂凈化后濃縮再測(cè)定的方法。固-液萃取法操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，但凈化效果相對(duì)較差，基質(zhì)效應(yīng)影響大，不能滿足部分化合物的方法回收率定量檢驗(yàn)的要求。由于該法對(duì)有機(jī)溶劑消耗量大，污染嚴(yán)重，已逐漸被一些新的前處理方法所取代。

1.2固相萃取法固相萃取(Solid Phase Extraction,簡(jiǎn)稱SPE)是利用選擇性吸附與選擇性洗脫的液相色譜法分離原理。較常用的方法是使液體樣品溶液通過(guò)吸附劑，保留其中被測(cè)物質(zhì)，再選用適當(dāng)強(qiáng)度溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量溶劑迅速洗脫被測(cè)物質(zhì)，從而達(dá)到快速分離凈化與濃縮的目的。也可選擇性吸附干擾雜質(zhì)，而讓被測(cè)物質(zhì)流出；或同時(shí)吸附雜質(zhì)和被測(cè)物質(zhì)，再使用合適的溶劑選擇性洗脫被測(cè)物質(zhì)。與傳統(tǒng)的液液萃取法相比較, SPE可以提高分析物的回收率，更有效地將分析物與干擾組分分離，減少樣品預(yù)處理過(guò)程，操作簡(jiǎn)單、省時(shí)、省力。固相萃取技術(shù)已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于獸藥殘留的定量分析中。常用的固相萃取小柱有：非極性柱(C18、HLB)、陽(yáng)離子柱、中等極性柱(氨基固相萃取、弗羅里硅土)。劉輝等[6]試驗(yàn)了上述小柱，發(fā)現(xiàn)氨基柱對(duì)喹諾酮類和磺胺類獸藥有很好的吸附能力和凈化效果。李曉麗等[7]采用高分子印記固相萃取結(jié)合液相色譜質(zhì)譜法測(cè)定了水產(chǎn)品中孔雀石綠、結(jié)晶紫、亮綠及其代謝物，通過(guò)與中性氧化鋁、陽(yáng)離子交換柱(MCX)比較發(fā)現(xiàn)，采用分子印記聚合物(MISPE)能特異選擇性地吸附孔雀石綠、結(jié)晶紫、亮綠及其代謝物，樣品凈化徹底，干擾物質(zhì)少，目標(biāo)物在儀器上的響應(yīng)靈敏。曹慧等[8]采用了HLB、多壁碳納米管固相萃取技術(shù)考察了蜂蜜中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類等獸藥殘留，發(fā)現(xiàn)多壁碳納米管固相萃取吸附性能好、凈化效果理想且價(jià)格低廉。Kaufmann A等[9]采用了ABN(50 μm，0.2 g)為吸附劑，同時(shí)檢測(cè)了牛奶和畜肉中喹諾酮類、磺胺類、四環(huán)素類等多種獸藥的殘留。鄭婷璐等[10]在測(cè)定黑魚中磺胺類殘留時(shí)發(fā)現(xiàn)，石墨烯對(duì)磺胺類的吸附能力較C18、多壁碳納米管填料強(qiáng)。

1.3基體固相分散技術(shù)基體固相分散萃取(MSPD，matrix solid-phase dispersion)是美國(guó)Louisiana州立大學(xué)的Barker教授在1989年提出并給予理論解釋的一種快速樣品處理技術(shù)，其原理是將涂漬有C18等多種聚合物的擔(dān)體固相萃取材料與樣品一起研磨，得到半干狀態(tài)的混合物并將其作為填料裝柱，然后用不同的溶劑淋洗柱子，將各種待測(cè)物洗脫下來(lái)。其優(yōu)點(diǎn)是濃縮了傳統(tǒng)的樣品前處理中的樣品勻化、組織細(xì)胞裂解、提取、凈化等過(guò)程，不需要進(jìn)行組織勻漿、沉淀、離心、pH調(diào)節(jié)和樣品轉(zhuǎn)移等操作步驟，避免了樣品的損失。王煉等[11]采用了C18作為填料，對(duì)禽畜肉和牛奶中β-內(nèi)酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等20種獸藥進(jìn)行了檢測(cè)，得到了滿意的結(jié)果。盡管MSPD技術(shù)目前不是主流的前處理方法，但是秦峰[12]認(rèn)為，隨著MSPD技術(shù)與高專屬性、高靈敏度儀器的結(jié)合，會(huì)出現(xiàn)更多與MSPD技術(shù)配套的商品化前處理耗材，將會(huì)使分析過(guò)程更加快速和簡(jiǎn)化，MSPD技術(shù)將能成為在線分析的一種有效技術(shù)。

1.4QuEChERS方法QuEChERS方法(Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe)是近年來(lái)國(guó)際上最新發(fā)展起來(lái)的一種用于農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)的快速樣品前處理技術(shù)，由美國(guó)農(nóng)業(yè)部Anastassiades教授等于2003年開(kāi)發(fā)，其原理與固相萃取(SPE)相似，都是利用吸附劑填料與基質(zhì)中的雜質(zhì)相互作用，吸附雜質(zhì)從而達(dá)到除雜凈化的目的。由于QuEChERS方法具有其獨(dú)特的性能和快速、簡(jiǎn)易、價(jià)廉的優(yōu)點(diǎn)[13]，其應(yīng)用范圍不僅局限于食品中農(nóng)藥殘留的分析，已逐漸被應(yīng)用到獸藥殘留的分析檢測(cè)中。QuEChERS方法包括3個(gè)步驟：用有機(jī)溶劑提取目標(biāo)化合物，加入脫水劑以促進(jìn)有機(jī)相和水相的分離，取部分有機(jī)相與凈化劑混合進(jìn)行凈化。國(guó)內(nèi)外報(bào)道的獸藥殘留的相關(guān)文獻(xiàn)中，乙腈或酸化乙腈為常用的提取溶劑，如Zhang Y Q等[14]采用了1%的乙酸乙腈作為提取溶劑，測(cè)定了牛奶中磺胺類、四環(huán)素類、喹諾酮類、鎮(zhèn)靜劑、硝基咪唑類等獸藥，在此基礎(chǔ)上，使用Na2EDTA-Mallvaine溶液更利于提取被絡(luò)合的四環(huán)素類和喹諾酮類。MgSO4、Na2SO4、NaCl為常用的脫水劑，宓捷波等[15]在對(duì)奶粉中磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類等22種獸藥進(jìn)行研究時(shí)采用了無(wú)水硫酸鈉作為脫水劑。凈化劑的選擇是QuEChERS方法的重中之重，常用的凈化吸附劑有中性氧化鋁、氨基、C18、PSA等，不同的吸附劑凈化吸附能力不同。王偉等[16]、Zhang Y Q等[17]采用了氨基吸附劑分別測(cè)定了蜂蜜和牛奶中多種獸藥殘留。曹亞飛等[18]、羅輝泰等[19]則采用了C18吸附劑對(duì)奶酪和禽畜肉中多獸藥殘留進(jìn)行了研究。李娜等[20]在測(cè)定動(dòng)物源性食品中4類29種禁限用獸藥時(shí)，同時(shí)采用了C18、氨基吸附劑進(jìn)行凈化。

2　檢測(cè)方法

2.1高效液相色譜法高效液相色譜法(HPLC)具有靈敏、快速、分辨率高、重復(fù)性好的特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于物質(zhì)的分離分析和純化。在獸藥殘留分析中，高效液相色譜法也得到了很好的應(yīng)用。趙亞華等[21]采用了HPLC-UV檢測(cè)器同時(shí)分離和測(cè)定了動(dòng)物源性食品中22種獸藥。周碧青等[22]采用HPLC-UVD檢測(cè)器快速測(cè)定了蜂王漿中四環(huán)素類抗生素的殘留。

2.2液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS)是以液相色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜做為檢測(cè)系統(tǒng)，經(jīng)純化后的樣品在液相色譜的質(zhì)譜部分經(jīng)過(guò)分離和離子化，經(jīng)由檢測(cè)器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)結(jié)合了色譜和質(zhì)譜的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)復(fù)雜樣品具有高分離能力、高選擇性、高靈敏度以及能夠提供相對(duì)分子量和結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點(diǎn)，因此成為當(dāng)前獸藥殘留等痕量分析的重要手段。唐小蘭等[23]、陳京都等[24]分別采用了HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)對(duì)水產(chǎn)品中獸藥殘留進(jìn)行了檢測(cè)與研究。孟娟等[25-26]則采用了UPLC-MS聯(lián)用技術(shù)同時(shí)測(cè)定了牛奶中7種四環(huán)素類和14種喹諾酮類藥物殘留，以及豬肉食品中8種β-受體激動(dòng)劑殘留。

2.3液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法與普通的串聯(lián)四極桿質(zhì)譜比較，液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜法(LC-Q-TOF-MS)具有質(zhì)譜掃描速度快、高質(zhì)量準(zhǔn)確度、高質(zhì)量分辨率等特點(diǎn)，同時(shí)還能獲得化合物特征碎片離子的精確質(zhì)量信息，并通過(guò)軟件分析出未知化合物可能的分子結(jié)構(gòu)，可以快速地篩查和鑒定目標(biāo)物和未知物。李詩(shī)言等[27]采用了HPLC-Q-TOF-MS篩查了中華鱉中42種獸藥殘留。李曉雯等[28]建立了豬肉中22種磺胺類獸藥殘留的HPLC-Q-TOF-MS方法。王珮等[29]利用HPLC-Q-TOF-MS技術(shù)對(duì)水產(chǎn)品中7類45種獸藥的同時(shí)檢測(cè)方法進(jìn)行了探究。朱萬(wàn)燕等[30]采用了UPLC-Q-TOF-MS方法快速檢測(cè)了豬肉中6類33種獸藥殘留。高馥蝶等[31]利用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)建立了牛奶中42種農(nóng)藥和獸藥殘留的快速檢測(cè)方法。

3　展望

在當(dāng)前日益重視食品安全和環(huán)境保護(hù)的發(fā)展趨勢(shì)下，開(kāi)發(fā)快速、高效、高靈敏度、高選擇性、高準(zhǔn)確度的檢測(cè)多殘留技術(shù)已成為主流。新技術(shù)的不斷應(yīng)用、優(yōu)化，將廣泛地應(yīng)用于獸藥殘留的分析檢測(cè)，以便從根本上防控獸藥殘留，最大限度地保障動(dòng)物源性食品的安全，保證養(yǎng)殖業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展，保護(hù)環(huán)境，促進(jìn)人類健康和社會(huì)穩(wěn)定。

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Research Progress on Detection Methods of Many Veterinary Drug Residues in Animal Derived Foods

LIANG Fei-yan1, LU Ri-gang2

1. Guangxi-Asean Center for Food and Drug Safety Control, Nanning, Guangxi 530021; 2. Guangxi Institute for Food & Drug Control, Nanning,Guangxi 530021)

Many veterinary drug residues in animal derived foods have become increasingly prominent problems, so detecting and monitoring veterinary drug residues in animal derived foods are of important significance. In this paper, the pretreatment methods and analysis techniques of veterinary drug residue detection in animal derived foods in recent years were discussed and analyzed to provide certain

and basis for the development of detection methods of veterinary drug residues.

Animal derived foods; Veterinary drug residues; Detection methods

梁飛燕(1983- )，女，廣西南寧人，主管藥師，碩士，從事食品、保健食品、藥品的檢驗(yàn)檢測(cè)與研究。

2016-07-31

S 851.34+7

A

0517-6611(2016)26-0050-02