趙曾強(qiáng),韓澤剛,李會(huì)會(huì),李瀟玲,張　析,張　薇

(1.石河子大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,新疆 石河子　832000;2.新疆農(nóng)墾科學(xué)院 生物技術(shù)研究所,新疆 石河子　832000)

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GhWRKY44基因在煙草中遺傳轉(zhuǎn)化及功能分析

趙曾強(qiáng)1,2,韓澤剛1,李會(huì)會(huì)1,李瀟玲1,張析1,張薇1

(1.石河子大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,新疆 石河子832000;2.新疆農(nóng)墾科學(xué)院 生物技術(shù)研究所,新疆 石河子832000)

摘要：為了進(jìn)一步驗(yàn)證GhWRKY44(登錄號(hào):KJ801807)基因在煙草異位表達(dá)后的功能,構(gòu)建了CaMV35S啟動(dòng)子調(diào)控、Nos為終止子的棉花抗枯萎病相關(guān)基因(GhWRKY44)的過(guò)表達(dá)載體;電擊法將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌GV3101,菌液PCR篩選鑒定陽(yáng)性菌株,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草;T0轉(zhuǎn)化植株經(jīng)卡那霉素篩選、PCR檢測(cè)后,隨機(jī)從轉(zhuǎn)基因T0中選取5株進(jìn)行RT-PCR檢測(cè),均為陽(yáng)性株,說(shuō)明GhWRKY44基因不僅整合到煙草基因組中而且還能正常轉(zhuǎn)錄。對(duì)過(guò)表達(dá)GhWRKY44基因的轉(zhuǎn)基因煙草T1株系進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)分析。結(jié)果表明,在正常生長(zhǎng)情況下,PR5和NPR1的表達(dá)量在轉(zhuǎn)GhWRKY44株系中明顯增加,枯萎病菌侵染后,在轉(zhuǎn)GhWRKY44株系中,PR1a、PR2和NPR1的表達(dá)量迅速增加,明顯高于野生型株系,而PR5的表達(dá)量則低于野生型株系,說(shuō)明該目的基因能在煙草中異位表達(dá)并能激活病程相關(guān)蛋白基因的表達(dá),但其功能仍需進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞：煙草;GhWRKY44;遺傳轉(zhuǎn)化;病程相關(guān)蛋白基因

轉(zhuǎn)錄因子(Transcription factor,TF)是一類能與真核基因啟動(dòng)子區(qū)域中的順式作用元件發(fā)生特異性結(jié)合,從而保證目的基因以特定的強(qiáng)度在特定的時(shí)間與空間表達(dá)的蛋白質(zhì)分子,植物種屬中的轉(zhuǎn)錄因子基因通常以家族的形式存在[1]。在植物的抗病性中,與防衛(wèi)反應(yīng)相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子有多種,如bZIP型轉(zhuǎn)錄因子中的TGA家族、鋅指蛋白中的WRKY家族、MYB轉(zhuǎn)錄因子、AP2/EREBP型轉(zhuǎn)錄因子、NAC轉(zhuǎn)錄因子等。WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族是近年所發(fā)現(xiàn)的一類存在于高等植物中的鋅指蛋白,已從多種植物中分離出來(lái),擬南芥中已發(fā)現(xiàn)74個(gè)WRKY成員,水稻中發(fā)現(xiàn)100多個(gè),由于WRKY蛋白可以和許多植物防衛(wèi)反應(yīng)基因啟動(dòng)子中的高度保守的功能元件(W盒(T)TGAC(C/T))結(jié)合,其中大多數(shù)參與植物對(duì)病原體的防衛(wèi)反應(yīng),因此備受關(guān)注[2-6]。

在擬南芥中,Li等[7-8]以過(guò)表達(dá)AtWRKY70株系和被敲除AtWRKY70基因的突變體為材料,利用病原菌(白菜黑斑病毒和煙草白粉病毒)侵染植物材料。結(jié)果表明,過(guò)表達(dá)的AtWRKY70的轉(zhuǎn)化植株提高了SA介導(dǎo)的煙草白粉病毒的抗性,同時(shí)降低了JA介導(dǎo)的白菜黑斑病毒抗性;與此相反,缺失AtWRKY70 基因的突變株降低了植物對(duì)SA介導(dǎo)的煙草白粉病毒抗性。因此,AtWRKY70可能是平衡植物水楊酸、茉莉酸防衛(wèi)信號(hào)途徑的一個(gè)重要因子;Yu等[9]對(duì)棉花GhWRKY15進(jìn)行表達(dá)特異性分析表明,分別用立枯絲核菌和枯萎病菌處理棉苗后,GhWRKY15表達(dá)量呈現(xiàn)先增加后降低趨勢(shì),但枯萎病菌處理后在3 d表達(dá)量最高,立枯絲核菌處理后在5 d表達(dá)量最高,且過(guò)表達(dá)GhWRKY15轉(zhuǎn)基因煙草植株可以增強(qiáng)對(duì)真菌的抗性。Shi等[10]研究發(fā)現(xiàn),培養(yǎng)7 d的棉花幼苗分別用外源激素SA和MeJA處理,其表達(dá)量分別在6,12 h達(dá)到最高,過(guò)表達(dá)GhWRKY39-1轉(zhuǎn)基因煙草植株可以增強(qiáng)對(duì)細(xì)菌和真菌的抗性。Zhang等[11]克隆了GbWRKY1,研究表明,作為病原菌誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)錄因子GbWRKY1在植物防御反應(yīng)中起著重要的作用。Guo等[12]克隆出長(zhǎng)度為1 705 bp的GhWRKY3,序列編碼氨基酸507個(gè),有2個(gè)典型的WRKY結(jié)構(gòu)域和2個(gè)鋅指結(jié)構(gòu),亞細(xì)胞定位分析表明,GhWRKY3定位于細(xì)胞核,半定量RT-PCR分析表明,GhWRKY3受多種植物激素的誘導(dǎo),包括水楊酸(SA)、甲基茉莉酸(MeJA)、脫落酸(ABA)、赤霉素(氣)和乙烯(ET)。

目前,在WRKY基因的研究中,有關(guān)棉花抗病相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子基因報(bào)道不多,與抗枯萎病相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子基因報(bào)道甚少。本研究構(gòu)建GhWRKY44基因的植物過(guò)表達(dá)載體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化煙草,初步研究基因的功能,對(duì)培育棉花抗枯萎病新品種具有一定的科研價(jià)值。

1材料和方法

1.1試驗(yàn)材料

遺傳轉(zhuǎn)化所用煙草為SR1(Nicotianatabacumpv.,SR1),根癌農(nóng)桿菌為GV3101,植物基礎(chǔ)表達(dá)載體pPZP35S,以上材料均由作物遺傳育種實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2煙草遺傳轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基

無(wú)菌苗培養(yǎng)基:8 g/L瓊脂粉+15 g/L蔗糖+1/2MS(pH值5.8~6.0)。共培養(yǎng)基:8 g/L瓊脂粉+30 g/L蔗糖+MS(pH值5.8~6.0)。選擇培養(yǎng)基:MS+2 mg/L 6-BA+0.3 mg/L IAA(吲哚-3-乙酸)+500 mg/L Cef(頭孢霉素)+80 mg/L Kan(卡那霉素)+30 g/L蔗糖+2.5 g/L Phytagel(pH值5.8~6.0)。生根培養(yǎng)基:1/2MS+0.3 mg/L IAA+400 mg/L Cef+50 mg/L Kan+15 g/L蔗糖+2.5 g/L Phytagel。T0煙草種子篩選培養(yǎng)基：1/2MS+50 mg/L Kan+15 g/L蔗糖+2.5 g/L Phytagel。以上培養(yǎng)基pH值5.8~6.0。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草遺傳轉(zhuǎn)化根據(jù)GhWRKY44基因開放閱讀框序列設(shè)計(jì)5′端分別含有XbaⅠ與SacⅠ酶切位點(diǎn)引物F1、R1(表1)。將已構(gòu)建好的植物基礎(chǔ)表達(dá)載體pPZP35S-GhWRKY44,通過(guò)電擊法轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌GV3101,菌液PCR篩選鑒定陽(yáng)性菌株。煙草無(wú)菌苗的幼嫩、健壯葉片切成約1 cm×1 cm的葉盤,浸于農(nóng)桿菌菌株GV3101(含有pPZP35S-GhWRKY44重組表達(dá)載體)菌液中15 min左右;取出葉盤用無(wú)菌濾紙吸干殘余的菌液,將葉盤轉(zhuǎn)入上面鋪有一層無(wú)菌濾紙的共培養(yǎng)基上;28 ℃暗培養(yǎng)2~3 d后再將葉盤轉(zhuǎn)入到選擇培養(yǎng)基中;繼代2~3次,待抗性芽長(zhǎng)至約2 cm時(shí),用剪刀將其剪下插入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根;待抗性苗長(zhǎng)至6~8 cm時(shí)馴化移栽。

1.3.2轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株的PCR及RT-PCR鑒定對(duì)T0轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行PCR鑒定,依據(jù)CaMV35S啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)上游引F2,下游引物R1。采用CTAB法[13]提取轉(zhuǎn)基因煙草與野生型煙草基因組DNA,以基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,轉(zhuǎn)GhWRKY44基因植株的擴(kuò)增片段預(yù)計(jì)1 700 bp左右,PCR擴(kuò)增條件:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s,57 ℃退火30 s,72 ℃延伸60 s,30個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。隨機(jī)選取初步為陽(yáng)性的T0轉(zhuǎn)基因植株利用CTAB法[14]提取轉(zhuǎn)基因煙草和野生型煙草葉片的總RNA,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,以cDNA為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增片段預(yù)計(jì)約1 200 bp,引物為F1和R1,PCR擴(kuò)增體系:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s,55 ℃退火30 s,72 ℃延伸60 s,30個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

將獲得的T0煙草種子表面消毒后平鋪于含有50 mg/L卡那霉素的固體1/2MS培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選,轉(zhuǎn)基因株正常生長(zhǎng),葉片為綠色,非轉(zhuǎn)基因株發(fā)芽后即停止生長(zhǎng)，葉片白色,將篩選出來(lái)的陽(yáng)性植株移栽到培養(yǎng)土中,保濕培養(yǎng)3~5 d后常規(guī)管理?xiàng)l件下培養(yǎng)。

CTAB法[13]提取T1轉(zhuǎn)基因煙草和野生型煙草葉片總RNA,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,以cDNA為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。引物與PCR擴(kuò)增體系同T0RT-PCR擴(kuò)增。

1.3.3T1轉(zhuǎn)基因煙草和野生型煙草枯萎病菌處理將保存于甘油中的枯萎病菌接種到已滅菌的查氏培養(yǎng)液中,28 ℃振蕩培養(yǎng)4 d,配制成濃度為7×106/mL的孢子懸浮液。待煙草幼苗長(zhǎng)至5片葉子時(shí),選取生長(zhǎng)一致的煙草浸泡于孢子懸浮液中45 min后轉(zhuǎn)入霍格蘭營(yíng)養(yǎng)液中,在侵染后的0,1,3,6,12,24 h分別采集野生型株系和轉(zhuǎn)基因型株系的根部組織,液氮速凍后保存于-80 ℃冰箱中。

1.3.4T1轉(zhuǎn)基因煙草和野生型煙草中抗性基因的表達(dá)特性分析CTAB法[14]提取枯萎病菌處理下轉(zhuǎn)基因煙草和野生型煙草根部總RNA,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,利用qRT-PCR技術(shù),以NtActin為內(nèi)參基因分析NtPR1a(X12485)、NtPR2(M60460)、NtPR5(AF154636)、NtNPR1(DQ837218)在正常生長(zhǎng)情況下和病原菌處理下的表達(dá)模式。內(nèi)參引物(F3、R2),NtPR1a(F4、R3)、NtPR2(F5、R4)、NtPR5(F6、R5)、NtNPR1(F7、R6),以上引物見表1。

表1　引物序列

qRT-PCR反應(yīng)體系及程序參見TaKaRa公司SYBR?PremixExTaqTM(Tli RNaseH Plus)說(shuō)明書,試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù),采用2-ΔΔCt法計(jì)算基因相對(duì)表達(dá)量。

2結(jié)果與分析

2.1植物表達(dá)載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化及鑒定

采用電擊法將重組表達(dá)載體pPZP35S-GhWRKY44導(dǎo)入農(nóng)桿菌GV3101,對(duì)轉(zhuǎn)入重組表達(dá)載體的菌液進(jìn)行PCR篩選與驗(yàn)證,pPZP35S-GhWRKY44可擴(kuò)增出約1 200 bp的目的條帶GV3101(圖1)。

M.DL2000;1.陰性對(duì)照;2.GhWRKY44基因農(nóng)桿菌菌液PCR產(chǎn)物。

2.2煙草遺傳轉(zhuǎn)化與陽(yáng)性植株檢測(cè)

煙草遺傳轉(zhuǎn)化大致經(jīng)過(guò)5個(gè)過(guò)程:煙草葉盤-愈傷誘導(dǎo)-抗性芽分化-誘導(dǎo)生根-再生植株移栽(圖2)。轉(zhuǎn)GhWRKY44的煙草經(jīng)卡那霉素篩選后共得抗性苗22株,訓(xùn)化、移栽后成活14株;提取轉(zhuǎn)GhWRKY44煙草抗性苗的基因組DNA,以野生型煙草為陰性對(duì)照進(jìn)行PCR鑒定。檢測(cè)結(jié)果表明,轉(zhuǎn)GhWRKY44基因的煙草中有10株擴(kuò)增出預(yù)期大小的目的條帶約1 700 bp,初步證明GhWRKY44基因已整合到煙草基因組中(圖3)。 從初步篩選得到的陽(yáng)性株中隨機(jī)選出5株提取RNA,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA后,利用RT-PCR進(jìn)一步檢測(cè),5株轉(zhuǎn)GhWRKY44基因的煙草均擴(kuò)增出預(yù)期大小目的條帶約1 200 bp(圖4),說(shuō)明GhWRKY44基因不僅整合到煙草基因組中而且還能正常轉(zhuǎn)錄。

A.共培養(yǎng)(煙草葉盤);B、C.選擇培養(yǎng)(B.愈傷誘導(dǎo),

M.DL2000;1.質(zhì)粒對(duì)照;2.野生型對(duì)照;

M.DL2000;6.野生型對(duì)照；L1、L3、

2.3抗病相關(guān)基因的表達(dá)分析

轉(zhuǎn)基因煙草T1目的基因的表達(dá)檢測(cè):選取L6株系的T0種子進(jìn)行卡那霉素篩選,獲得T1抗性植株,提取T1轉(zhuǎn)GhWRKY44煙草葉片的總RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA進(jìn)行RT-PCR分析(圖5),轉(zhuǎn)GhWRKY44株系獲得15株陽(yáng)性株。

轉(zhuǎn)GhWRKY44煙草中抗病相關(guān)基因的表達(dá):選取T1轉(zhuǎn)GhWRKY44的轉(zhuǎn)基因株系OE1,以野生型為對(duì)照,進(jìn)行qRT-PCR分析,由圖6可以看出,在正常生長(zhǎng)情況下(枯萎菌未處理),過(guò)量表達(dá)GhWRKY44可以增加PR5和NPR1的表達(dá)量,其中NPR1的表達(dá)量在轉(zhuǎn)基因株系中增加約8倍。由圖7可以看出，枯萎病菌侵染野生型和轉(zhuǎn)基因株系后，轉(zhuǎn)基因株系中PR1a表達(dá)量均高于野生型,處理后24 h表達(dá)量達(dá)到最高,轉(zhuǎn)基因株系5個(gè)處理時(shí)間點(diǎn)的平均相對(duì)表達(dá)量約為野生型的60倍;PR2(圖8)表達(dá)量在病原菌處理后呈逐漸增加的趨勢(shì),處理后12~24 h,其表達(dá)量達(dá)到最大,約為處理前的6倍;而PR5(圖9)的表達(dá)量在處理后均低于處理前,且在多個(gè)處理時(shí)間點(diǎn)轉(zhuǎn)基因株系明顯低于野生型株系。NPR1(圖10)的表達(dá)量隨病原菌處理時(shí)間的推移,呈先降低再增加再降低的變化趨勢(shì),處理后6 h表達(dá)量最高。

M.DL2000;1.野生型對(duì)照；L1~L15.轉(zhuǎn)基因植株RT-PCR擴(kuò)增結(jié)果。

WT.野生型株系;OE1.轉(zhuǎn)GhWRKY44株系。圖7-10同。

圖7　枯萎病菌處理后PR1a在

圖8　枯萎病菌處理后PR2在野生型株系與

圖9　枯萎病菌處理后PR5在野生型株系與

圖10　枯萎病菌處理后NPR1在野生型株系

3討論

為了探究GhWRKY44在枯萎菌抗性反應(yīng)中的作用,本研究通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)GhWRKY44的煙草,利用qRT-PCR技術(shù)進(jìn)行抗病相關(guān)基因表達(dá)模式分析。結(jié)果表明,在正常生長(zhǎng)情況下PR5和NPR1的表達(dá)量在轉(zhuǎn)GhWRKY44株系中明顯增加;在模式植物擬南芥中對(duì)WRKY轉(zhuǎn)錄因子研究表明,該類基因以正調(diào)控或負(fù)調(diào)控的作用參與復(fù)雜的抗病信號(hào)途徑[15];在過(guò)表達(dá)AtWRKY41的擬南芥株系中發(fā)現(xiàn),植株對(duì)假單胞菌(Pseudomonassyringae)的抗性增加,但對(duì)軟腐病菌(Erwiniacarotovora)的抵抗力下降[16],AtWRKY33可正調(diào)控番茄灰霉病菌(Botrytiscinerea)的抗性[17]。研究表明,WRKY類轉(zhuǎn)錄因子可以特異性地識(shí)別和結(jié)合W-box,而PR基因的啟動(dòng)子區(qū)域含有保守的W-box順式作用元件,能被WRKY轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)表達(dá)[9,18-19],Shi等[10]研究發(fā)現(xiàn),在正常生長(zhǎng)條件下,過(guò)表達(dá)GhWRKY39-1煙草株系中,NPR1、PR1c、PR2、PR4的表達(dá)量均低于野生型株系。正常生長(zhǎng)條件下,過(guò)表達(dá)GhWRKY40煙草株系中,PR1a、PR4在野生型株系和轉(zhuǎn)基因型株系中表達(dá)量很低,PR2在轉(zhuǎn)基因型株系中表達(dá)量高于野生型株系[20];對(duì)于不同株系的野生型煙草PR1a和PR2的表達(dá)量在一個(gè)很低的水平,而對(duì)于轉(zhuǎn)SlWRKY2的煙草中的表達(dá)量明顯高于野生型[21]。上述研究結(jié)果與本研究結(jié)果并不完全一致,也進(jìn)一步說(shuō)明不同的WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因?qū)Σ煌琍R基因調(diào)控作用不同。

為了進(jìn)一步探究GhWRKY44的功能,利用qRT-PCR分析枯萎病菌處理后野生型株系和轉(zhuǎn)GhWRKY44株系中抗病相關(guān)基因的表達(dá)模式。結(jié)果發(fā)現(xiàn),枯萎病菌侵染后,過(guò)表達(dá)GhWRKY44的轉(zhuǎn)基因煙草中PR1a、PR2和NPR1的表達(dá)量明顯高于野生型株系,而PR5的表達(dá)量在轉(zhuǎn)基因型株系中,多個(gè)處理時(shí)間點(diǎn)均低于野生型株系。前人研究表明,對(duì)轉(zhuǎn)GhWRKY15或GhWRKY39或GhWRKY40基因的煙草分別用TMV病毒或煙草炭疽病菌或青枯病菌或棉立枯病菌處理后,轉(zhuǎn)基因植株均能提高對(duì)病原菌的抗性,通過(guò)qRT-PCR分析表明,在轉(zhuǎn)GhWRKY15 株系中,TMV病毒處理后,過(guò)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因煙草中PR1、PR2(β-1,3-葡聚糖)、PR4和PR5(逆滲透蛋白)與野生型煙草相比表達(dá)量升高,煙草炭疽病菌處理后,過(guò)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因煙草中PR1、PR2(β-1,3-葡聚糖)和PR4與野生型煙草相比表達(dá)量升高,但PR5(逆滲透蛋白)的表達(dá)量低于野生型;轉(zhuǎn)GhWRKY39煙草中,當(dāng)青枯病菌處理后PR1a、PR1c、PR2的表達(dá)量高于野生型,PR4表達(dá)量低于野生型,NPR1變化不明顯。當(dāng)棉立枯病菌處理后,PR1a、PR1c、PR2和PR4表達(dá)量高于野生型,NPR1表達(dá)量低于野生型;青枯病菌處理轉(zhuǎn)GhWRKY40煙草株系后,PR1a、PR2和PR4表達(dá)量低于野生型[9-10,19]。結(jié)合本研究結(jié)果表明,WRKY轉(zhuǎn)錄因子通過(guò)調(diào)控PR基因參與了植物對(duì)病原菌的抵抗,但其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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Genetic Transformation and Functional Analysis ofGhWRKY44 Gene in Tobacco

ZHAO Zengqiang1,2,HAN Zegang1,LI Huihui1,LI Xiaoling1,ZHANG Xi1,ZHANG Wei1

(1.Agricultural College of Shihezi University,Shihezi832000,China;2.Biotechnology Research Institue,Xinjiang Academy of Agricultural and Reclamation Science,Shihezi832000,China)

Abstract：By CaMV35S promoter and Nos as the terminator,the overexpression vector of GhWRKY44 gene and verified the function of GhWRKY44 (Accession number:KJ801807) gene in tobacco ectopic expression were constucted.Overexpression vector was introduced into Agrobacterium GV3101 by electroporation method,positive bacteria strain was identified by screening PCR and positive colony was transferred into tobacco by Agrobacterium-mediated.After T0of transformed plants are detected by kanamycin,PCR detection,5 strains were detected by RT-PCR technique randomly selected from T0of transformed plants and 5 strains were positive.The results showed that not only GhWRKY44 gene was transferred into the tobacco genome but also the normal transcripted.T1lines of transgenic tobacco were analysed by using Real-time quantitative PCR (qRT-PCR) technique.The result showed that the wild type and transgenic GhWRKY44 tobacco were not inoculated with Fusarium oxysporum,the expression of PR5 and NPR1 expression obviously increased in transgenic GhWRKY44 plant.Wild type and transgenic plant after were infected by Fusarium oxysporum,the expression of PR1a,PR2 and NPR1 significantly increased in transgenic lines,but the expression of PR5 was higher in wild type than transgenic lines.The gene could be expressed in the tobacco and could activate parts of PRs′expression.But the function of GhWRKY44 still needs further exploration.

Key words:Tobacco;GhWRKY44;Genetic transformation;Pathogenesis-related gene

doi:10.7668/hbnxb.2016.01.019

中圖分類號(hào)：S572.03

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-7091(2016)01-0117-06

通訊作者：張薇(1969-),女,江蘇鎮(zhèn)江人,教授,博士,主要從事棉花分子育種研究。

作者簡(jiǎn)介：趙曾強(qiáng)(1985-),男,甘肅靜寧人,助理研究員,碩士,主要從事棉花分子育種研究。

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然基金項(xiàng)目(31260358);農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)(2011ZX08005-005)

收稿日期：2015-11-09