祁 浩，劉新利

(齊魯工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，山東濟(jì)南 250353)

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大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和酵母表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展

祁 浩，劉新利*

(齊魯工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院，山東濟(jì)南 250353)

由于DNA重組技術(shù)和蛋白組技術(shù)的發(fā)展與成熟，外源基因表達(dá)技術(shù)備受關(guān)注。其在生物、食品、工業(yè)以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著舉足輕重的作用。以原核生物細(xì)胞及真核生物細(xì)胞作為表達(dá)系統(tǒng)，進(jìn)行目的基因序列的表達(dá)以生產(chǎn)蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制劑等是近年來(lái)發(fā)酵工業(yè)的新型領(lǐng)域。原核和真核表達(dá)系統(tǒng)是近年來(lái)研究和應(yīng)用最廣泛和最成熟的外源基因表達(dá)系統(tǒng)。對(duì)近年來(lái)關(guān)于大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和酵母表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)；酵母表達(dá)系統(tǒng)；表達(dá)載體；外源基因；宿主菌株

自20世紀(jì)七八十年代以來(lái)，由于分子生物學(xué)和蛋白組學(xué)的迅猛發(fā)展，各種外源基因表達(dá)的遺傳操作技術(shù)日趨成熟[1]。其中，大腸桿菌等原核表達(dá)系統(tǒng)具有遺傳背景研究清楚、操作簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)繁殖快、成本低、產(chǎn)量高、表達(dá)產(chǎn)物純化過(guò)程簡(jiǎn)單、產(chǎn)物穩(wěn)定性好、不易污染以及應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，是最早進(jìn)行研究的外源基因表達(dá)系統(tǒng)，同時(shí)也得到了非常廣泛的應(yīng)用，取得了巨大的科研價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益[2-3]。

酵母菌是一類單細(xì)胞真核微生物，尤其是對(duì)釀酒酵母的應(yīng)用可以追溯到幾千年以前。同時(shí)，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，酵母的生物學(xué)和遺傳學(xué)背景也已經(jīng)研究得十分清楚。由于酵母菌具有生長(zhǎng)旺盛、生長(zhǎng)周期短等特性，近年來(lái)，在外源基因表達(dá)方面得到了深入研究和廣泛應(yīng)用[4-5]。利用酵母系統(tǒng)表達(dá)外源基因時(shí)，既具有原核生物生長(zhǎng)繁殖快、遺傳操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，又具有真核生物對(duì)外源蛋白進(jìn)行翻譯后修飾加工的能力。表達(dá)外源基因常用的酵母種類有釀酒酵母和甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母[6]。隨著DNA技術(shù)的迅猛發(fā)展，利用大腸桿菌和酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)蛋白疫苗、核酸疫苗和生物酶制劑等新型領(lǐng)域，開始進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化階段，但隨之帶來(lái)一系列問題。筆者對(duì)大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和酵母表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

1　大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)

1.1大腸桿菌表達(dá)載體大腸桿菌作為原核生物，因其具有培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單、生長(zhǎng)速度快、操作簡(jiǎn)單以及不易污染等特點(diǎn)而成為原核表達(dá)系統(tǒng)中占據(jù)優(yōu)勢(shì)的菌株。表達(dá)系統(tǒng)中最重要的元件是表達(dá)載體，表達(dá)載體應(yīng)當(dāng)具有表達(dá)量高、穩(wěn)定性好、適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。表達(dá)載體主要包括啟動(dòng)子、表達(dá)閱讀框、終止子、復(fù)制起點(diǎn)以及抗性篩選標(biāo)記等重要元件[7-8]。

近年來(lái)的研究表明，在科研和工業(yè)上被廣泛應(yīng)用的大腸桿菌表達(dá)載體主要有pGE系列、pQE系和pET系列，其中目前被廣泛應(yīng)用的高效表達(dá)載體是pET。此系統(tǒng)是在大腸桿菌中表達(dá)外源蛋白最高效、產(chǎn)量最高、成功率最高的表達(dá)載體。 它最初是利用與啟動(dòng)子配套并且能高效轉(zhuǎn)錄特定基因的外源RNA聚合酶構(gòu)建的T7RNA聚合酶/啟動(dòng)子系統(tǒng)，可以從各種基因(包括原核細(xì)胞、真核細(xì)胞)生產(chǎn)大量的目的蛋白[9]。

1.2外源基因結(jié)構(gòu)外源基因是整個(gè)表達(dá)過(guò)程最關(guān)鍵的因素，因?yàn)樗鼪Q定了通過(guò)表達(dá)系統(tǒng)是否得到目的產(chǎn)物。原核基因在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中可以直接進(jìn)行表達(dá)，而真核基因?qū)儆跀嗔鸦?，其基因組DNA中的基因區(qū)別于原核基因，是不連續(xù)的，其中含有內(nèi)含子序列，轉(zhuǎn)錄出的前體mRNA不能被大腸桿菌進(jìn)行剪切，從而形成有功能的mRNA，不能完成正常的蛋白翻譯功能，因此無(wú)法在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中直接進(jìn)行表達(dá)[10]。大腸桿菌不能識(shí)別真核基因轉(zhuǎn)錄和翻譯元件，所以必須提供大腸桿菌識(shí)別的轉(zhuǎn)錄及翻譯元件，以保證真核基因的表達(dá)。例如，真核基因的前導(dǎo)肽不能被大腸桿菌識(shí)別，因此在設(shè)計(jì)真核基因時(shí)應(yīng)去除前導(dǎo)肽序列，必要時(shí)換以原核的信號(hào)肽序列。此外，許多蛋白質(zhì)都是以無(wú)活性的前體蛋白的形式表達(dá)，必須通過(guò)翻譯后的加工修飾才能成為真正有活性的功能蛋白，因此在設(shè)計(jì)外源基因序列時(shí)應(yīng)從活性蛋白質(zhì)編碼序列開始[11]。

1.3表達(dá)宿主作為外源基因的表達(dá)宿主，對(duì)其表達(dá)活性和表達(dá)量會(huì)產(chǎn)生很大的影響。每個(gè)宿主細(xì)胞都可以被看成一個(gè)微觀的小型工廠，按照細(xì)胞固有的程序完成一系列活動(dòng)。菌株內(nèi)源的蛋白酶過(guò)多，可能會(huì)造成目的基因產(chǎn)物表達(dá)的不穩(wěn)定性，所以理想的宿主菌株往往是蛋白酶缺陷型的菌株。其中，最經(jīng)典的蛋白酶缺陷型菌株就是BL21系列菌株。BL21(DE3)是其中研究最成熟的菌株，添加了T7聚合酶基因，是為T7表達(dá)系統(tǒng)而設(shè)計(jì)的[12-13]。

1.4影響外源基因表達(dá)的關(guān)鍵因素不同的目的基因具有不同的結(jié)構(gòu)多樣性，并且與大腸桿菌基因有明顯的差異性，因此不同外源基因的表達(dá)效率往往存在很大的差異。載體(啟動(dòng)子)和宿主菌的選擇、密碼子的選用、mRNA的穩(wěn)定性、培養(yǎng)條件的控制和表達(dá)產(chǎn)物的后加工處理等因素都是影響大腸桿菌表達(dá)外源蛋白的關(guān)鍵因素。

表達(dá)載體是整個(gè)表達(dá)系統(tǒng)中最關(guān)鍵的元件。在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中有很多的載體可以表達(dá)外源基因，這些載體通常具有以下共同的特征：高拷貝數(shù)、產(chǎn)量高、應(yīng)用范圍廣、表達(dá)產(chǎn)物易純化以及在菌體內(nèi)穩(wěn)定性好。研究表明，大腸桿菌表達(dá)外源基因適用的載體包括融合表達(dá)載體、分泌型表達(dá)載體和共表達(dá)載體等[14]。

1.4.1融合表達(dá)載體。表達(dá)載體可以插入目的基因之外的輔助基因序列，并且與目的基因構(gòu)成融合蛋白基因序列進(jìn)行表達(dá)，可以提高外源蛋白的活性和產(chǎn)量，并且可以簡(jiǎn)化下游純化的操作等。融合蛋白基因與外源基因結(jié)合，可以利用融合信號(hào)肽將融合蛋白分泌到細(xì)胞周質(zhì)或胞外表達(dá)，有利于形成二硫鍵以及避免胞質(zhì)蛋白酶的水解，同時(shí)有利于目的蛋白的分離和純化[15]。研究表明，成功的融合表達(dá)載體包括GST(谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶)系統(tǒng)、半乳糖苷酶系統(tǒng)、麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)系統(tǒng)、蛋白A系統(tǒng)、純化標(biāo)簽融合系統(tǒng)等[16]。

1.4.2分泌型表達(dá)載體。外源蛋白在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)容易被宿主體內(nèi)的蛋白酶降解，同時(shí)為了外源蛋白質(zhì)能夠分泌到宿主體外進(jìn)行正確折疊修飾和便于提純，所以被表達(dá)的外源蛋白需要分泌到宿主體外，因此分泌型載體是實(shí)現(xiàn)此步驟的關(guān)鍵因素，表達(dá)分泌蛋白防止宿主菌對(duì)外源蛋白的降解，同時(shí)減輕宿主細(xì)胞代謝負(fù)荷及對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行胞外正確折疊修飾，使其具有真正的生物學(xué)活性[17]。分泌型載體具有以下優(yōu)點(diǎn)：一些在胞內(nèi)被蛋白酶降解的蛋白質(zhì)在細(xì)胞周質(zhì)中很穩(wěn)定；一些在胞內(nèi)無(wú)活性的蛋白質(zhì)分泌后便具有活性，分泌可能使蛋白能夠正確折疊；產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沒有氨基酸末端甲硫氨酸，因?yàn)榍懈钗稽c(diǎn)在信號(hào)肽與編碼序列之間，甲硫氨酸會(huì)影響許多蛋白質(zhì)的活性[18-19]。

1.4.3共表達(dá)載體。絕大多數(shù)真核基因表達(dá)的產(chǎn)物若要表現(xiàn)出相應(yīng)的生物活性都必須以多聚復(fù)合體的形式組合，因此構(gòu)建共表達(dá)載體來(lái)表達(dá)這類外源基因是表達(dá)產(chǎn)物有無(wú)活性的最關(guān)鍵一步，同時(shí)新生蛋白質(zhì)在后期的折疊和分泌過(guò)程中共表達(dá)策略也起到至關(guān)重要的作用。有研究人員構(gòu)建了可與pET載體共表達(dá)的載體pOKD，用于表達(dá)異源二聚體外源基因，這種載體可以與大多數(shù)大腸桿菌表達(dá)載體共存于細(xì)胞中[20]。Marco 等[21]設(shè)計(jì)了共同表達(dá)分子伴侶的3載體系統(tǒng)，其中2種載體分別攜帶不同的分子伴侶，另外1種載體攜帶目的基因，分子伴侶與目的基因被分別獨(dú)立誘導(dǎo)。例如，從嗜冷菌中分離的一類分子伴侶Cpn60和Cpn10共同表達(dá)后可以使大腸桿菌在4 ℃低溫下生長(zhǎng)，這樣的環(huán)境有利于蛋白的正確折疊，有利于提高表達(dá)產(chǎn)物的活性和產(chǎn)量[22]。

研究表明，大腸桿菌表達(dá)外源基因的技術(shù)越來(lái)越成熟，為今后的科學(xué)研究和大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)提供了極大的可能性和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，但是目前仍然有關(guān)鍵問題需要解決，因?yàn)檫€有一部分與外源蛋白表達(dá)相關(guān)的調(diào)控通路未知，有些與大腸桿菌代謝途徑對(duì)外源基因表達(dá)影響的因素沒有解決。

2　酵母表達(dá)系統(tǒng)

酵母是低等的單細(xì)胞真核生物，遺傳背景清楚，既具有原核生物細(xì)胞生長(zhǎng)迅速、容易培養(yǎng)、遺傳操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)[23]，又具有真核生物表達(dá)外源蛋白時(shí)對(duì)蛋白質(zhì)的翻譯后加工和修飾等功能。因此相對(duì)于大腸桿菌等原核表達(dá)系統(tǒng)，酵母表達(dá)出的蛋白是結(jié)構(gòu)更加復(fù)雜、具有生物學(xué)活性且酵母表達(dá)系統(tǒng)比其他真核表達(dá)系統(tǒng)遺傳背景清楚、遺傳操作簡(jiǎn)便、生長(zhǎng)周期短，成本低。因此，酵母表達(dá)系統(tǒng)在表達(dá)外源蛋白方面有著明顯的優(yōu)勢(shì)[24-25]。

目前工業(yè)生產(chǎn)中最重要的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)是酵母表達(dá)系統(tǒng)，通過(guò)表達(dá)分泌途徑可以將目的蛋白分泌到細(xì)胞外，提取純化過(guò)程技術(shù)成熟簡(jiǎn)便，為其大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)，并且在發(fā)酵生產(chǎn)中安全性較高。酵母表達(dá)系統(tǒng)既具有遺傳操作簡(jiǎn)單和生長(zhǎng)周期快等特點(diǎn)，又具有真核細(xì)胞的翻譯后修飾加工的優(yōu)勢(shì)，在工業(yè)生產(chǎn)中可以大規(guī)模生產(chǎn)，因此具有極大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值[26]。酵母表達(dá)系統(tǒng)最常用的宿主菌株有釀酒酵母、畢赤酵母和裂殖酵母。

經(jīng)過(guò)多年的研究，大腸桿菌等原核生物表達(dá)系統(tǒng)得到了長(zhǎng)足的發(fā)展，由于其安全性較差，因此在生物醫(yī)藥領(lǐng)域仍然具有很大的局限性。考慮到醫(yī)藥蛋白的安全性與某些蛋白的特殊性，真核生物表達(dá)系統(tǒng)具有明顯的優(yōu)勢(shì)[27-28]，如酵母表達(dá)菌株。以酵母表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)醫(yī)藥蛋白的宿主菌主要有釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、多形漢遜酵母(Hansenulapolymorpha)、畢赤酵母(Pichiapastoris)和耶羅維亞酵母(Yarrowialipolytica)，其中以釀酒酵母的應(yīng)用最為廣泛[29]。

2.1酵母系統(tǒng)表達(dá)載體酵母細(xì)胞體內(nèi)本身不帶有質(zhì)粒，外源基因若要進(jìn)入酵母體內(nèi)，只能利用整合型穿梭質(zhì)粒作為載體攜帶外源基因先在大腸桿菌中復(fù)制擴(kuò)增，然后導(dǎo)入酵母細(xì)胞中，再攜帶外源基因的表達(dá)載體與酵母細(xì)胞染色體基因組整合，進(jìn)而表達(dá)外源基因[30]。在畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)中主要應(yīng)用2種載體，分別為誘導(dǎo)型表達(dá)載體和組成型表達(dá)載體。組成型表達(dá)載體以磷酸甘油醛脫氫酶啟動(dòng)子為外源蛋白表達(dá)啟動(dòng)子，不需要誘導(dǎo)，而誘導(dǎo)型表達(dá)載體以醇氧化酶基因啟動(dòng)子啟動(dòng)外源基因的表達(dá)，外源基因只能在甲醇的誘導(dǎo)下才能進(jìn)行轉(zhuǎn)錄。在釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)中，常用的表達(dá)質(zhì)粒是在這個(gè)表達(dá)載體中，目的蛋白的表達(dá)受到半乳糖激酶啟動(dòng)子的控制，宿主菌表達(dá)半乳糖激酶用來(lái)分解半乳糖獲得能量，獲取能量的同時(shí)啟動(dòng)半乳糖激酶啟動(dòng)子下游基因的轉(zhuǎn)錄，外源基因以此得到表達(dá)[31-32]。

載體轉(zhuǎn)化到酵母宿主中的方式包括原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法、電轉(zhuǎn)化法、聚乙二醇法和氯化鋰轉(zhuǎn)化法。轉(zhuǎn)化效率較高的是原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法和氯化鋰法，原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化法易形成高拷貝數(shù)，但是操作步驟十分繁瑣，操作過(guò)程中極易受到污染。電轉(zhuǎn)化法操作簡(jiǎn)便，轉(zhuǎn)化效率高且不易污染，目前已被廣泛應(yīng)用[33]。

2.2目的基因表達(dá)框的改造提高目的蛋白在酵母表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)量，目的基因啟動(dòng)子的改造或替換是非常關(guān)鍵的一步。在釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)中最常用的高效表達(dá)啟動(dòng)子主要是TEF1和TDH3。近年來(lái)研究表明，主要通過(guò)隨機(jī)合成寡核苷酸技術(shù)和易錯(cuò)PCR技術(shù)對(duì)啟動(dòng)子進(jìn)行突變，來(lái)達(dá)到符合研究的啟動(dòng)子。同時(shí)，在畢赤酵母中通過(guò)隨機(jī)突變，三磷酸甘油醛GAP啟動(dòng)子的活性同樣得到了提高[34]。

誘導(dǎo)型啟動(dòng)子是另一種重要的酵母表達(dá)外源基因的啟動(dòng)子。GAL1和GAL10是2種最常用的酵母誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。但是，這2個(gè)啟動(dòng)子的誘導(dǎo)物都是半乳糖，半乳糖作為碳源被酵母消耗，從而導(dǎo)致對(duì)基因表達(dá)的控制變得復(fù)雜，加之半乳糖的價(jià)格較高，因此在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中未得到廣泛應(yīng)用[35]。AOX1是畢赤酵母中最常用的誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。AOX1啟動(dòng)子以甲醇為誘導(dǎo)物，因此在工業(yè)生產(chǎn)中安全性得不到保障。研究表明通過(guò)對(duì)啟動(dòng)子進(jìn)行改造，可以提高其轉(zhuǎn)錄效率并且可以替換甲醇作為誘導(dǎo)物[36]。

在酵母表達(dá)系統(tǒng)中，除了啟動(dòng)子因素外，影響外源蛋白表達(dá)的重要因素還包括密碼子偏好性和質(zhì)?？截悢?shù)?？梢詫?duì)外源基因的密碼子進(jìn)行優(yōu)化，使其更加適合宿主菌的密碼子的偏好性，并通過(guò)改變4種堿基的比例可以有效提高外源蛋白的表達(dá)效率，提高產(chǎn)量。同時(shí)，高拷貝的質(zhì)粒有利于蛋白表達(dá)量的提高，但是蛋白表達(dá)過(guò)量會(huì)加重宿主菌的代謝負(fù)擔(dān)，造成表達(dá)系統(tǒng)的穩(wěn)定性下降。通常情況下，將表達(dá)載體重組在宿主的基因組上，有利于外源基因的穩(wěn)定性[37]。

2.3宿主菌的改造對(duì)酵母宿主的改造是另一種重要的途徑。很多外源蛋白在酵母中能進(jìn)行高效表達(dá)，但是它們需要分泌到細(xì)胞外才有意義。因此，若要提高目的蛋白的產(chǎn)量，可以通過(guò)改造酵母的分泌途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)。外源蛋白的表達(dá)和分泌過(guò)程主要包括轉(zhuǎn)錄、翻譯、翻譯后修飾加工、蛋白折疊、糖基化、包裝、和分泌等步驟[38]。蛋白經(jīng)翻譯后首先會(huì)被轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，此過(guò)程中起到最關(guān)鍵作用的是信號(hào)肽與前導(dǎo)肽。由人工合成的α-交配因子的前導(dǎo)肽與酵母本身的前導(dǎo)肽在引導(dǎo)胰島素分泌的過(guò)程中具有類似的活性。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，最重要的就是蛋白的準(zhǔn)確折疊，蛋白進(jìn)入分泌途徑還是降解途徑由此來(lái)決定，若肽段錯(cuò)誤折疊會(huì)加重內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)的代謝負(fù)擔(dān)，引起未折疊蛋白反應(yīng)[39]。過(guò)量表達(dá)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中蛋白質(zhì)折疊因子和還原酶，可以有效改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)環(huán)境，促進(jìn)蛋白質(zhì)的折疊，從而提高蛋白質(zhì)的分泌量。分泌過(guò)程的最后一步是目的蛋白從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)運(yùn)輸?shù)礁郀柣w，然后再次運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞壁的囊泡中，2個(gè)關(guān)鍵蛋白Sly1P、Sec1P的過(guò)量表達(dá)可以有效促進(jìn)目的蛋白的分泌[40]。因此，對(duì)酵母宿主菌的改造不會(huì)只是局限于單個(gè)基因的缺失或過(guò)量表達(dá)，而是對(duì)一系列關(guān)鍵基因的共同改造，以此來(lái)提高目的蛋白的表達(dá)量。

3　展望

經(jīng)過(guò)近些年的不斷研究，現(xiàn)代分子生物學(xué)和DNA技術(shù)已經(jīng)得到了很大發(fā)展，發(fā)酵技術(shù)也日益成熟，微生物發(fā)酵產(chǎn)業(yè)進(jìn)入了飛速發(fā)展階段，由此開創(chuàng)了分子生物學(xué)和發(fā)酵領(lǐng)域巨大的科研和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，在食品醫(yī)藥和保健品等領(lǐng)域都創(chuàng)造了巨大的價(jià)值。利用這些越來(lái)越成熟的科學(xué)技術(shù)，科學(xué)工作者構(gòu)建了一系列的真核表達(dá)體系以及原核表達(dá)體系，構(gòu)建了一系列高效的表達(dá)載體以及與其搭配的宿主菌，但是在各宿主菌中仍然存在一些問題。

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Research Progress of Expression Systems ofEscherichiacoliand Yeast

QI Hao, LIU Xin-li*

(Qilu University of Technology, Jinan, Shandong 250353)

Due to the rapid development of recombinant DNA technology and proteomic technology, exogenous gene expression technology has received much attention. It plays increasingly important role in the field of biological, foodstuff, industry and medical science. In recent years, the use of prokaryotic and eukaryotic expression systems for exogenous gene amplification and expression to produce proteins vaccines, nucleic acid vaccine and enzyme preparations, etc. is the emerging fields of fermentation industry. Prokaryotic expression and eukaryotic expression systems were commonly used to express exogenous gene. The research progress of yeast andE.coliexpression systems in recent years were reviewed.

E.coliexpression system; Yeast expression system; Expression vectors; Exogenous gene; Host bacteria

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31370110)；“泰山學(xué)者”建設(shè)工程專項(xiàng)。

祁浩(1990- )，男，山東淄博人，碩士研究生，研究方向：生物制藥工程。*通訊作者，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事微生物代謝活性物質(zhì)研究。

2016-04-23

Q 93

A

0517-6611(2016)17-004-03