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絨山羊液態(tài)精液稀釋技術(shù)

劉興偉，陳寧

(遼寧省畜牧科學研究院，遼寧 遼陽 111000)

液態(tài)精液是指以液體形態(tài)存在未經(jīng)冷凍的精液[1]。絨山羊液態(tài)精液稀釋技術(shù)是絨山羊人工授精技術(shù)中重要的環(huán)節(jié)，主要包括稀釋液的選擇和配制，稀釋操作注意事項、稀釋比例的確定等內(nèi)容。

1精液稀釋液的選擇和配制

精液稀釋液是精子直接接觸的外部環(huán)境，稀釋液的成份組成直接影響精子的結(jié)構(gòu)完整、活力、存活時間及輸精受胎效果。按稀釋液的成份和特點，液態(tài)精液稀釋液可以分為簡單稀釋液和復雜稀釋液。簡單稀釋液如0.9%的生理鹽水、5%的葡萄糖溶液、2.9%的檸檬酸鈉溶液等，成份比較單一。

這類稀釋液只給精子提供一個等滲的外部環(huán)境，在稀釋精液時起到擴充精液體積，便于輸精的作用，并不能給精子提供抗低溫和保護精子細胞膜的作用，稀釋倍數(shù)高時還會對精子造成不利應激。因此，簡單稀釋液用于精液稀釋時一般稀釋比例不超過1∶2，精液稀釋后立即輸精。復雜稀釋液成份比簡單稀釋液多，往往在3種以上，主要添加單雙糖類，酸、堿、鹽、細胞膜保護劑、抗菌素等，具有等滲、抗緩沖、抗低溫、抑菌等多重作用，在用于精液稀釋時，可以進行比例較高的稀釋，但通常稀釋不超過50倍[2]。

表1為幾種常用的液態(tài)精液稀釋液常用配方及使用說明

配方代號配 方使用說明10.9%生理鹽水稀釋倍數(shù)為2倍以內(nèi),稀釋后立即輸精。25%葡萄糖溶液稀釋倍數(shù)為2倍以內(nèi),稀釋后立即輸精。32.9%檸檬酸鈉溶液稀釋倍數(shù)為2倍以內(nèi),稀釋后立即輸精。4葡萄糖3g,檸檬酸鈉1.4g,加蒸餾水至100mL。將上述液煮沸后冷卻至37℃,再取上述液80mL,加卵黃20mL,青霉素1×105IU,攪拌均勻。根據(jù)原精質(zhì)量、配種數(shù)量及輸精要求確定稀釋倍數(shù),稀釋倍數(shù)控制在50倍以內(nèi)為宜;稀釋后在0℃~5℃條件下保存,48h內(nèi)使用。5乳糖5.5g,葡萄糖3g,檸檬酸鈉1.4g,三基0.12g,加蒸餾水至100mL。將上述液煮沸后冷卻至37℃,再取其液80mL,加卵黃20mL,青霉素1×105IU,鏈霉素1×105IU,攪拌均勻。根據(jù)原精質(zhì)量、配種數(shù)量及輸精要求確定稀釋倍數(shù),稀釋倍數(shù)控制在50倍以內(nèi)為宜;稀釋后在0℃~5℃條件下保存,48h內(nèi)使用。

2液態(tài)精液稀釋比例的確定

液態(tài)精液的稀釋比例是指1個單位體積的原精與添加稀釋液的體積之比。態(tài)精液稀釋時采用多大比例，取決于原精的精子密度、活力、每次輸精時規(guī)定的有效精子數(shù)量、輸精時輸入的每份精液的體積等因素。

2.1添加稀釋液體積公式推算

共分如下4個步驟。

第2步：根據(jù)原精量、原精密度、稀釋后的精子活力計算出稀釋后精液的有效精子總數(shù)量，即K1=原精量×原精密度×稀釋后精子活力=e×p×l

2.2精液稀釋比例公式推算

精液稀釋比例表述為原精體積與稀釋液體積之比，

2.3稀釋比例計算

2.3.1公式中數(shù)值的確定

當采集精液并稀釋后，原精精子密度p、稀釋后的精子活力l為固定數(shù)值，pl數(shù)值表示的是單位體積的有效精子數(shù)，pl數(shù)值越大，稀釋比例越大，反之越小。每次輸入稀釋后的精液體積V0越大，則稀釋倍數(shù)越高，反之越低；每次輸精輸入的有效精子數(shù)量k越大，則稀釋倍數(shù)越低，反之則越高。因此，只要在上式中代入pl最大值、V0最大值、k最小值，就可求得精液稀釋的最大比例。

原精精子密度p、稀釋后的精子活力l存在如下關(guān)系：原精密度增大，死精子增多，活力下降，當原精密度達到3.49×109時，原精活力降至60%，活力達到標準規(guī)定的下限值。單位體積的有效精子數(shù)pl=(3.49×109)×60%=2.094×109，正常情況下pl數(shù)值為(2.5×109)×60%～(1.5×109)×70%即1.5×109～1.75×109。因此，數(shù)pl=2.094×109可以視為最大值。在本標準7.5款中規(guī)定“每次輸精量0.25～0.5mL，有效精子數(shù)不低于2×107個”，可見，V0最大值為0.5mL，k最小值為2×107個(為計算方便，簡寫為0.2億，下同)。

2.3.2將上述數(shù)值代入稀釋比例公式

據(jù)此，表1的配方4和配方5使用說明中規(guī)定“稀釋倍數(shù)控制在50倍以內(nèi)為宜”。

上述公式中：

e-原精精液量，單位為mL；

V-稀釋后的精液總體積，單位為mL；

V1-加入的稀釋液體積，單位為mL；

p-原精精子密度，單位為1×108/mL；

V0-每次輸入稀釋后的精液體積，單位為mL，為設定值；

K0-出稀釋后單位體積的有效精子數(shù)，單位為1×108/mL；

K1-原精稀釋后總有效精子數(shù)，單位為1×108/mL；

k-每次輸精輸入的有效精子數(shù)量，單位為1×108，為設定值；

l-稀釋后的精子活力，單位為%；

X-精液稀釋比例。

3精液稀釋時注意事項[3]

3.1應使用專用稀釋液產(chǎn)品或自制稀釋液。

稀釋精液在精液處置室進行，室內(nèi)溫度控制在25 ℃～30 ℃。

3.2精液采集后20 min內(nèi)用稀釋液等溫稀釋。

3.3稀釋過程中避免振蕩、陽光直射、接觸水及其它化學物質(zhì)。

3.4在稀釋時，將稀釋液加入精液中，而不是將精液加入稀釋液中。

3.5在做較大倍數(shù)的稀釋時，先將精液做低倍稀釋，然后在此基礎上再進行稀釋。

3.6精液稀釋時，要將稀釋液沿溶器內(nèi)壁緩緩注入精液中，注入精液后緩慢攪動，使之混合均勻。

4參考文獻

[1]李長彬.牛液態(tài)精液處理的方法[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問，2013年(5)：50.

[2]張世偉，宋先忱，朱延旭，等.絨山羊飼養(yǎng)300問[M].長春：吉林大學出版社，2005：91.

[3]權(quán)凱，等.牛羊人工授精技術(shù)圖解[M].北京：金盾出版社，2010：51.

作者簡介：劉興偉(1965-)，男，高級畜牧師。

收稿日期：2015-10-14

中圖分類號：S826.3

文獻標識碼：B

文章編號：1005-2739(2016)02-0029-03