岳　巍，王勝軒，方　園，馬興紅

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030)

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Tdo2在大鼠圍著床期子宮中的表達規(guī)律研究

岳巍，王勝軒，方園，馬興紅

(東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030)

摘要：深入研究哺乳動物胚胎著床的分子機理對提高動物繁殖率具有重要意義。本文以大鼠為動物模型，利用原位雜交技術(shù)研究了Tdo2基因在大鼠圍著床期的表達規(guī)律，探討了Tdo2基因在大鼠胚胎著床過程中可能發(fā)揮的作用。

關(guān)鍵詞：胚胎著床；Tdo2；大鼠

資助項目：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)生SIPT計劃項目(項目編號：201510224206)

胚胎著床是指在卵巢激素的影響下，胚胎與子宮建立物理及生理聯(lián)系的過程[1]。胚胎著床是胚胎在子宮中進一步發(fā)育的基礎(chǔ)。目前胚胎工程技術(shù)雖然已經(jīng)廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)中，但是通過胚胎工程技術(shù)最后得到的動物出生率低，其主要原因是胚胎著床失敗[2]。因此，深入研究哺乳動物胚胎著床的機理對提高動物繁殖率，加快動物良種繁育具有重要意義。

色氨酸是5-羥色胺生物合成的前體，5-羥色胺作為激素和神經(jīng)遞質(zhì)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)、脈管系統(tǒng)、胃腸道中發(fā)揮各種不同的作用。5-羥色胺也在雌性生殖系統(tǒng)如卵巢、子宮、胎盤以及輸卵管、卵泡液中檢測到。色氨酸的代謝是調(diào)節(jié)5-羥色胺水平的重要機制。色氨酸的代謝與哺乳動物妊娠緊密相關(guān)，參與色氨酸代謝的酶主要是TDO和IDO[3]。Tdo2參與小鼠蛻膜化過程[4]，但Tdo2在大鼠早期妊娠中的表達調(diào)節(jié)與功能還未見報道。本研究利用原位雜交技術(shù)研究了Tdo2在大鼠早期妊娠中的表達規(guī)律，發(fā)現(xiàn)其可能參與調(diào)節(jié)大鼠蛻膜化過程。

1材料與方法

1.1大鼠早期妊娠取材

下午3：00將性成熟雌性與雄性大鼠合籠，次日早晨檢查陰道涂片，將發(fā)現(xiàn)精子的當天計為妊娠第1天。分別取妊娠第1～9天大鼠子宮組織。

1.2原位雜交

根據(jù)大鼠Tdo2序列(GenBank系列號：NM_022403.2)合成引物-CCTTTCCAGTTGCTGACCTC和TGGACCACAACATCACGTCT，PCR擴增片段長428 bp。擴增產(chǎn)物克隆到PGEM-T 載體，測序驗證克隆的方向與正確性，利用Roche公司的RNA標記試劑盒標記cRNA探針，原位雜交方法按文獻進行[5]。

2結(jié)果與討論

由圖1可見，在妊娠1～6 d大鼠子宮未見Tdo2原位雜交信號。在妊娠第7天的子宮著床位點處系膜對側(cè)上皮下基質(zhì)細胞檢測到非常強的Tdo2雜交信號。隨著妊娠的進行，Tdo2表達向系膜側(cè)擴展，在妊娠第8天在整個胚胎周圍的子宮初級蛻膜區(qū)檢測到較強的Tdo2雜交信號，在次級蛻膜區(qū)有弱的信號。妊娠第9天，Tdo2雜交信號開始減弱，表達的模式與妊娠第8天類似。

大鼠早期妊娠1～3 d胚胎在輸卵管中成熟，妊娠第4天胚胎進入子宮，妊娠第5天胚胎在子宮中進一步發(fā)育，直到妊娠第6天胚胎著床。妊娠第7～9天，胚胎進一步侵入到子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞，基質(zhì)細胞發(fā)生復(fù)雜的形態(tài)及生理生化變化，變?yōu)橥懩ぜ毎@個過程稱為蛻膜化[6]。蛻膜細胞能保護胚胎免受母體免疫系統(tǒng)攻擊及提供胚胎早期發(fā)育所需的營養(yǎng)物質(zhì)[6]。Hoxa-10是蛻膜化的重要調(diào)節(jié)分子，Hoxa-10基因敲除小鼠蛻膜化失敗，小鼠不育[7]。最近的研究顯示，Hoxa-10調(diào)節(jié)子宮Tdo2的表達[8]。Tdo2在大鼠的蛻膜組織中表達，表明Tdo2可能與大鼠子宮蛻膜化密切相關(guān)。Tdo2在小鼠的蛻膜組織表達，抑制Tdo2的功能干擾蛻膜化發(fā)生[4]。這些研究表明Tdo2可能在不同物種的蛻膜化過程中具有保守的功能。

圖1　Tdo2基因在大鼠早期妊娠中的表達

D1-D9代表早期妊娠第1～9天，D6NI代表早期妊娠第6天非著床位點，D6IN代表早期妊娠第6天著床位點。星型標記胚胎位置，AM代表系膜對側(cè)，M代表系膜側(cè)。棕黑色斑點代表陽性雜交信號。

3參考文獻

[1]Wang H，Dey SK.Roadmap to embryo implantation：clues from mouse models[J].Nat Rev Genet 2006；7 (3)：185-99.

[2]Diskin MG，Murphy JJ，Sreenan JM.Embryo survival in dairy cows managed under pastoral conditions[J].Anim Reprod Sci 2006；96 (3-4)：297-311.

[3]Stone TW，Darlington LG.Endogenous kynurenines as targets for drug discovery and development[J].Nat Rev Drug Discov 2002；1 (8)：609-20.

[4]Li DD，Gao YJ，Tian XC，etal.Differential expression and regulation of Tdo2 during mouse decidualization[J].J Endocrinol 2014；220 (1)：73-83.

[5]Ma XH，Hu SJ，Yu H，etal.Differential expression of transcriptional repressor snail gene at implantation site in mouse uterus[J].Mol Reprod Dev 2006；73 (2)：133-41.

[6]Ramathal CY，Bagchi IC，Taylor RN，etal.Endometrial decidualization：of mice and men[J].Semin Reprod Med 2010；28 (1)：17-26.

[7]Lim H，Ma L，Ma WG，etal.Hoxa-10 regulates uterine stromal cell responsiveness to progesterone during implantation and decidualization in the mouse[J].Mol Endocrinol 1999；13 (6)：1005-17.

[8]Doherty LF，Kwon HE，Taylor HS.Regulation of tryptophan 2，3-dioxygenase by HOXA10 enhances embryo viability through serotonin signaling[J].Am J Physiol Endocrinol Metab 2011；300 (1)：E86-93.

作者簡介：岳巍(1995-)，女，本科。

收稿日期：2016-01-16

中圖分類號：S814.3

文獻標識碼：A

文章編號：1005-2739(2016)02-0014-02