魏山山，陳琳琳，李德順

（山東醫(yī)藥技師學(xué)院，泰安 271000）

不同產(chǎn)地桃花中黃酮含量測(cè)定及抗氧化活性研究*

魏山山，陳琳琳，李德順

（山東醫(yī)藥技師學(xué)院，泰安 271000）

文章從不同產(chǎn)地桃花中提取黃酮并研究各自抗氧化活性。經(jīng)測(cè)定可得肥城、新泰、泰安桃花峪3種不同產(chǎn)地桃花中黃酮含量分別為52.91±0.65 mg/g、43.78±0.59 mg/g、85.38±0.79 mg/g。3種不同產(chǎn)地桃花黃酮對(duì)·OH、·O2-自由基都有一定清除能力。在試驗(yàn)濃度下，肥城桃花黃酮對(duì)·OH自由基和超氧陰離子整體清除率均高于泰安桃花峪、新泰桃花多糖，具有較高的抗氧化活性。

桃花 黃酮含量 抗氧化性

桃花是薔薇科李屬落葉喬木桃樹（Prunus persica Batsch）的花[1]。文獻(xiàn)記載桃花具有很好的美容養(yǎng)顏、延緩衰老的功效?！秶?jīng)本草》中記錄：采新鮮桃花，浸酒，每日喝一些，可使容顏紅潤(rùn)，艷美如桃花。《普濟(jì)方》在介紹桃花酒的制法與功用時(shí)說：三月三采新鮮桃花，以上等白酒浸泡，49日后服，久服可除病益顏，此類功效主要是源于花中含有酚類、多糖和黃酮類等生物活性成分。這些物質(zhì)大多屬于抗氧物質(zhì)，并且能很好地?cái)U(kuò)張血管，疏通脈絡(luò)，潤(rùn)澤肌膚[1]，改善血液循環(huán)，促進(jìn)皮膚營(yíng)養(yǎng)和氧供給，使促進(jìn)人體衰老的脂褐質(zhì)素加快排泄，防止黑色素在皮膚內(nèi)慢性沉積，從而能有效地預(yù)防黃褐斑、雀斑、黑斑，達(dá)到美白祛斑的功效。

目前，有一些針對(duì)桃花黃酮抗氧化活性的研究成果，如劉杰超等人從桃花中提取總黃酮，并進(jìn)一步用Photochem抗氧化劑和自由基分析儀對(duì)各提取物的抗氧化活性進(jìn)行分析測(cè)定，顯示提取物對(duì)自由基都具有一定的清除作用[2]。

不同種[3]或不同種源地[4]，甚至不同海拔的資源[5]在抗氧化活性中存在一定的差異。泰安桃花峪、新泰桃花以其桃花的觀賞價(jià)值而聞名，而泰安肥城獨(dú)特的氣候和水土條件[6]孕育了肥城桃獨(dú)特的品質(zhì)，被譽(yù)為“群桃之冠”。該研究以新泰、肥城、泰安3個(gè)地方的桃花樣品為研究對(duì)象，測(cè)定其中黃酮含量并比較其抗氧化性之間的差異，為進(jìn)一步開發(fā)泰安地區(qū)桃花藥用和保健功能提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

桃花樣品：肥城、新泰、泰安桃花峪3個(gè)地區(qū)的桃花樣品。

試劑試藥：95%乙醇（AR）；亞硝酸鈉（AR）；硝酸鋁（AR）；氫氧化鈉（AR）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：10080-200707，純度90.5%）。

1.2 儀器設(shè)備

CP114電 子 天 平（ 感 量0.1 mg，0.01 mg）；HHW420水浴鍋；UV 2003紫外分光光度計(jì)。

1.3 桃花黃酮的提取與含量測(cè)定

取桃花花瓣放于通風(fēng)干燥處自然陰干，粉碎后稱取樣品1 g，放于具塞三角瓶中，以料液比1∶50加入60%乙醇溶液浸泡5 min，然后置于水浴鍋中在60℃下提取，不時(shí)振蕩，提取2 h后抽濾，此過程重復(fù)3次，合并提取液，減壓濃縮。以60%乙醇溶液定容至50 ml，作為供試品樣液，測(cè)定提取液中總黃酮的含量。

精密稱取蘆丁對(duì)照品，加95%乙醇，溶解配制質(zhì)量濃度為0.1 g/L的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別精密吸取對(duì)照液0.0 ml、1.00 ml、2.00 ml、3.00 ml、4.00 ml、5.00 ml、6.00 ml和0.25 ml樣液置于25 ml比色管中，加水至6 ml，分別加入5%亞硝酸鈉溶液1 ml，混勻，靜置6 min，再加10%硝酸鋁溶液1 ml，混勻，放置6 min，再加4%氫氧化鈉溶液10 ml，用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻，靜置12 min；以試劑作空白參比液，于510 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度和蘆丁含量制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.4 桃花黃酮抗氧化活性測(cè)定

1.4.1 羥自由基（·OH）的清除能力測(cè)定

參照Fenton反應(yīng)的方法建立·OH自由基產(chǎn)生體系模型，先加入9 mmol/L FeSO41.00 ml，9 mmol/L水楊酸-乙醇1.00 ml，混勻，再分別加入待測(cè)溶液各0.5 ml、1 ml、1.5 ml、2 ml，并用去離子水將反應(yīng)體系補(bǔ)至10 ml。最后加8.8 mmol/L H2O21.00 ml啟動(dòng)反應(yīng)，在37℃水浴中加熱30 min，以蒸餾水為參比，在510 nm處測(cè)其吸光度，平行測(cè)定3次。

清除率（%）=[A對(duì)照-（A樣品-A0）/A對(duì)照]×100

式中：A對(duì)照為不加樣品的吸光度；A樣品為加樣品的吸光度；A0為不加H2O2的吸光度。

1.4.2 超氧自由基（·O2-）的清除能力測(cè)定

取0.05 mol/L，pH7.4， 含1 mmol/L Na2EDTA Tris-HCl緩沖液2 950μL加入到石英比色皿中，再加約60mmol/L連苯三酚溶液50μL，顛覆式迅速混合，開始計(jì)時(shí)，每隔30秒讀數(shù)1次A值（325 nm），至300秒（5 min）時(shí)為止。取xμL待測(cè)溶液加入到大石英比色皿中，再加（2 950-x）μL Tris-HCl緩沖液，再加50μL連苯三酚溶液，迅速混合，開始計(jì)時(shí)，每隔30秒讀數(shù)1次（A值，325 nm），至300秒時(shí)為止。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

清除率＝（ΔA0-ΔA樣）/ΔA0×100，ΔA0＝A325 nm，300 s - A325 nm，30 s，ΔA樣＝A325 nm，300 s -A325 nm，30 s

2 結(jié)果與分析

2.1 3種桃花黃酮的含量

回歸方程為Conc.=1.7948×ABS-0.0022，R=0.9998，式中：Conc.-0.25 ml提取液中黃酮質(zhì)量，mg；ABS-吸光度；R-相關(guān)系數(shù)。結(jié)果表明：在0.0～0.6 mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）計(jì)算肥城、新泰、泰安桃花峪桃花的黃酮含量分別為52.91±0.65 mg/g、43.78±0.59 mg/g、85.38±0.79 mg/g。

2.2 3種桃花黃酮溶液的抗氧化活性

桃花黃酮溶液對(duì)羥自由基（·OH）的清除能力如圖2所示，桃花黃酮溶液對(duì)超氧自由基（·O2-）的清除能力如圖3所示。不同樣品的黃酮溶液都具有一定的清除·OH和·O2

-的能力，就總體清除效果而言，肥城桃花黃酮提取液對(duì)·OH和·O2-的能力都較強(qiáng)，新泰桃花黃酮提取液對(duì)·OH的清除率較強(qiáng)而對(duì)·O2-的清除率相對(duì)較弱，而泰安桃花對(duì)·O2-的清除率較強(qiáng)而對(duì)·OH的清除率相對(duì)較弱，說明不同樣品的黃酮溶液對(duì)·OH和·O2-的清除作用有一定的選擇性。

圖2 桃花黃酮溶液對(duì)羥自由基（·OH）的清除效果比較

圖3 桃花黃酮溶液的對(duì)超氧自由基（·O2-）的清除效果比較

3 結(jié)論

經(jīng)測(cè)定，肥城、新泰、泰安桃花峪3種不同產(chǎn)桃花中黃酮含量分別為52.91±0.65 mg/g、43.78±0.59 mg/g、85.38±0.79 mg/g。3種桃花黃酮溶液對(duì)羥自由基和超氧陰離子的都有一定清除能力，肥城桃花黃酮溶液對(duì)羥自由基和超氧陰離子的清除綜合能力高于其余2種，抗氧化活性更好。

[1] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì)．中國植物志．北京：科學(xué)出版社，1983

[2] 劉杰超，張春嶺，呂真真，等．桃花中總酚和總黃酮的提取及抗氧化活性研究．食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2013，6：1 750～1 756

[3] 武靜文，袁藝，王文文，等．不同種竹筍及筍殼提取物抗氧化活性的研究．激光生物學(xué)報(bào)，2011，2

[4] 馬超，嚴(yán)寒靜，糖醇萍，等．不同種源地何首烏抗氧化作用的比較研究．廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，6

[5] 梁建萍，牛遠(yuǎn)，謝敬斯，等．不同海波華北落葉松針葉三種抗氧化酶活性與光合色素含量．應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2007，7

[6] 康桂玲，楊秋榮，曹積飛，等．山東肥城桃優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)與地質(zhì)環(huán)境的關(guān)系．河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，12（12）

泰安市大學(xué)生科技創(chuàng)新行動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目（2014D124）