侯臨平 楊俊英

臨床研究

臨汾地區(qū)丙型肝炎病毒感染檢測(cè)結(jié)果分析

侯臨平 楊俊英

目的了解本地區(qū)普通人群中丙型肝炎病毒(HCV)感染實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)情況。方法收集2015年1月1日至12月31日來山西省臨汾市人民醫(yī)院就診的申請(qǐng)檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)的門診及住院患者標(biāo)本共21 120例，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行抗-HCV的篩查，對(duì)ELISA篩查陽性的標(biāo)本采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)法進(jìn)行丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)檢測(cè)。結(jié)果21 120例標(biāo)本中抗-HCV篩查陽性率為0.69%(146/21 120);在146例抗-HCV標(biāo)本中其中47例檢測(cè)出HCV RNA，檢出率為32.2%(47/146);檢測(cè)出HCV RNA標(biāo)本的抗-HCV的濃度試劑測(cè)量值/陽性判定值之比值(S/CO值)介于8.32～25.80(＞ 8.0)。結(jié)論在山西臨汾地區(qū)就診的普通人群中抗-HCV陽性分布比例以及HCV RNA檢出率均較低，可檢出HCV RNA的患者抗-HCV濃度相對(duì)較高。

丙型肝炎病毒;丙肝抗體;丙肝RNA

丙型肝炎病毒(HCV)是導(dǎo)致慢性肝炎的主要病原體之一，感染后臨床表現(xiàn)較為隱匿，就診率及治療率較低，易轉(zhuǎn)化為慢性肝炎。2006年全國(guó)血清流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國(guó)1～59歲人群丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)流行率為0.43%［1］。根據(jù)《丙型肝炎防治指南》(2015年更新版)［2］丙肝的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目，目前有抗體檢測(cè)、丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)定量檢測(cè)、丙肝核心抗原的檢測(cè)?，F(xiàn)將本地區(qū)2015年1月1日至12月31日檢測(cè)抗-HCV 及HCV RNA的結(jié)果分析報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源 收集2015年1月1日至12月31日在本院申請(qǐng)檢測(cè)抗-HCV的門診及住院患者標(biāo)本共21 120份，離心取血清，-70℃冰箱保存。

1.1.2 主要試劑與儀器 TECAN酶標(biāo)儀、洗板機(jī); 抗-HCV酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑由廈門英科新創(chuàng)公司生產(chǎn)，HCV RNA定量檢測(cè)試劑由湖南圣湘生物科技公司生產(chǎn)，ABI-7500實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)儀由美國(guó)ThermoFisher公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 抗-HCV檢測(cè) 嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，室內(nèi)質(zhì)控品由廈門英科新創(chuàng)公司生產(chǎn)，含量2 NCU/mL。

1.2.2 HCV RNA檢測(cè) 抗-HCV陽性的標(biāo)本采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行HCV RNA檢測(cè)，試劑盒檢測(cè)下限為25 U/mL，定量檢測(cè)的線性范圍為50～1.0×108U/mL，質(zhì)控品購自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。質(zhì)控品及樣本檢測(cè)前均于-70℃冰箱保存。RNA的提取采用磁珠法，擴(kuò)增設(shè)有內(nèi)標(biāo)，用來監(jiān)測(cè)待測(cè)樣本中是否具有PCR抑制物，避免假陰性;內(nèi)參比熒光用來校正加樣誤差和管間差異。該試劑盒與甲肝病毒、乙肝病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、梅毒螺旋體、巨細(xì)胞病毒等無交叉反應(yīng)。

2 結(jié)果

146例抗-HCV陽性患者中HCV RNA檢出組與未檢出組病毒檢測(cè)結(jié)果比較 ELISA檢測(cè)抗-HCV，21 120份標(biāo)本中篩查陽性的為146例，陽性率為0.69%;在146例抗-HCV陽性標(biāo)本中檢測(cè)出HCV RNA 47例檢出率為32.2%，其抗-HCV濃度試劑測(cè)量值/陽性判定值之比值(S/CO值)分布于8.32～25.80(＞ 8.0)，占抗-HCV陽性的32.2% (47/146)。見表1。

3 討論

表1 146例抗-HCV陽性患者HCV RNA定量檢測(cè)結(jié)果

丙肝呈全球性流行，不同性別、年齡、種族人群均對(duì)HCV易感。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球HCV的感染率約為2.8%，約1.85億人感染HCV，每年因HCV感染導(dǎo)致死亡的病例約35萬例。全國(guó)各地抗-HCV陽性率有一定差異，以長(zhǎng)江為界，北方高于南方(0.53%比0.29%)［2］。

HCV感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)包括抗免疫學(xué)方法測(cè)抗原和抗體，以及用分子生物學(xué)的方法對(duì)HCV RNA進(jìn)行定量、基因分型檢測(cè)等。在大多數(shù)基層醫(yī)院，主要采用ELISA檢測(cè)抗-HCV，用于HCV感染的診斷、健康人群體檢和血液篩查;當(dāng)抗-HCV篩查結(jié)果陽性時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步采用重組免疫印跡試驗(yàn)(RIBA)來確認(rèn)，當(dāng)RIBA結(jié)果不確定時(shí)，可以采用PCR方法檢測(cè)HCV RNA;若實(shí)驗(yàn)室條件有限，不能開展RIBA的檢測(cè)時(shí)，對(duì)于初篩陽性的標(biāo)本，可直接用PCR檢測(cè)HCV RNA來確認(rèn)。

用ELISA檢測(cè)抗-HCV經(jīng)常存在一定的假陽性及假陰性。存在假陽性的原因可能是:① 類風(fēng)濕因子(RF)的干擾:在抗-HCV測(cè)定中，如血清或血漿標(biāo)本中存在RF，則其可與固相上的免疫球蛋白G (IgG)和酶標(biāo)的IgG結(jié)合，而出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。② 高免疫球蛋白血癥:抗-HCV的測(cè)定，目前國(guó)內(nèi)外大部分試劑盒均采用間接法，最后一步加入的是酶標(biāo)抗人IgG。血清標(biāo)本中高濃度的非特異IgG，可能會(huì)致其非特異地吸附于固相表面，從而與后加的酶標(biāo)抗人IgG結(jié)合，造成假陽性結(jié)果。③ 標(biāo)本中存在的某些成分的干擾造成假陽性［3］。而血液透析和免疫功能缺陷或合并HIV感染者可出現(xiàn)假陰性，另外當(dāng)患者處于急性感染窗口期時(shí)也可出現(xiàn)抗-HCV陰性。本次實(shí)驗(yàn)抗-HCV的測(cè)定采用廈門英科新創(chuàng)的試劑，有研究報(bào)道其S/CO值≥8.6時(shí)，95%以上可能為真陽性［4］。本次實(shí)驗(yàn)中普通人群中抗-HCV陽性率為0.69%，與指南中報(bào)道的0.53%接近。

為了解抗-HCV陽性時(shí)HCV RNA的檢出情況，本次對(duì)抗-HCV篩查陽性的146例標(biāo)本進(jìn)行了HCV RNA的定量檢測(cè)。HCV RNA定量檢測(cè)適用于HCV現(xiàn)癥感染的確認(rèn)、抗病毒治療前基線病毒載量分析以及抗病毒治療過程中及治療結(jié)束后的應(yīng)答評(píng)估。由于RIBA檢測(cè)費(fèi)用較高，對(duì)于抗-HCV陽性標(biāo)本，大多數(shù)臨床醫(yī)師會(huì)采取檢測(cè)HCV RNA來加以確認(rèn)，陽性結(jié)果可提示現(xiàn)癥活動(dòng)性感染;單次的HCV RNA陽性可確定HCV感染，但單次的陰性并不能完全排除HCV感染，應(yīng)重復(fù)檢查。

從研究的結(jié)果可看出，抗-HCV陽性時(shí)HCV陽性檢出率為32.2%，能檢測(cè)到HCV RNA的標(biāo)本其抗-HCV濃度略高(S/CO值為8.32～25.80);而濃度較低(S/CO值為4.68～7.79)的標(biāo)本未檢測(cè)到HCV RNA。說明對(duì)于現(xiàn)癥感染來說，血清抗-HCV濃度越高，HCV RNA檢出的可能性越大?？赡苡捎诶龜?shù)較少，本次試驗(yàn)未出現(xiàn)抗-HCV濃度值較高但未檢測(cè)出HCV RNA的情況。

有文獻(xiàn)［5］報(bào)道，在血液透析患者中，抗-HCV陽性率為8.69%;且HCV RNA陽性率為58.97%，顯著高于普通人群，可能因血液透析患者免疫功能低下，病毒復(fù)制比較活躍導(dǎo)致。

在抗-HCV濃度較低的陽性標(biāo)本中未檢測(cè)出HCV RNA，其原因可能為:試劑盒的靈敏度低;患者處于直接抗病毒藥物治療期間，HCV RNA迅速降低甚至低于檢測(cè)下限;抗-HCV為假陽性，非現(xiàn)癥感染。因此，當(dāng)抗-HCV陽性時(shí)，需要采用RIBA 或PCR加以確認(rèn)。

綜上所述，檢測(cè)HCV感染時(shí)，實(shí)驗(yàn)室最常用的指標(biāo)抗-HCV以及HCV RNA之間存在一定的相關(guān)性，對(duì)于抗-HCV陽性的患者，其抗-HCV濃度越高，檢出HCV RNA的可能性越大，提示HCV現(xiàn)癥感染; 但HCV RNA檢出率較低，因此在診斷HCV感染時(shí)，應(yīng)采用RIBA或PCR并結(jié)合臨床做出準(zhǔn)確的判斷。

1 陳圓生,李黎,崔富強(qiáng)，等.中國(guó)丙型肝炎血清流行病學(xué)研究.中華流行病學(xué)雜志，2011，32:888-891.

2 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).丙型肝炎防治指南(2015年更新版).中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志(電子版)，2015，9:590-607.

3 張瑞，李金明.丙型肝炎病毒感染臨床檢測(cè)程序的建立及結(jié)果報(bào)告與解釋.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，33:990-992.

4 任芙蓉，龔曉燕，李京京，等.獻(xiàn)血員丙型肝炎病毒抗體酶免疫法檢測(cè)試劑的測(cè)量值與其真陽性的相關(guān)性.中華肝臟病雜志，2005，13:255-258.

5 門昆，魏殿軍.天津市某三甲醫(yī)院維持性血液透析患者血源性病毒感染情況分析.實(shí)用檢驗(yàn)醫(yī)師雜志，2013，5:40-42，64.

(本文編輯:李銀平)

Analysis of the laboratory test results about Hepatitis C virus (HCV) in Linfen region

HOU Lin-ping, YANG Jun-ying. Department of Clinical Laboratory, Linfen People's Hospital, Linfen 041000, Shanxi, China

ObjectiveTo know the condition of HCV test results among the general population in Linfen region .Methods21 120 cases were collected that outpatient and inpatient need to test the hepatitis c virus antibody (anti-HCV) from January 1 to December 31, 2015 in Linfen people's hospital, Shanxi Province, with screening the anti-HCV by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) , and the hepatitis C virus nucleic acid (HCV RNA) was detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (PCR) for anti-HCV positive specimens.ResultsThere were 146 (0.69%) anti-HCV positive among 21 120 cases , there were 47 cases that HCV RNA could be detected among the 146, detection rate was 32.2% . The concentration of the anti-HCV (S/CO value) was between 8.32～25.80 (＞ 8.0) among HCV RNA positive specimens .ConclusionAnti-HCV positive distribution proportion in the general population and HCV RNA detection rate were low in Linfen region, the concentration of the anti-HCV (S/CO value) was relatively higher in the patients with HCV RNA positive .

Hepatitis C virus . Hepatitis C antibody . Hepatitis C virus nucleic acid

041000 山西臨汾，臨汾市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科

侯臨平，729167644@qq.com

10.3969/j.issn.1674-7151.2016.04.009

2016-09-30)