□甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)西部分中心 郭紅云

氣相色譜法測定食品中甜蜜素準(zhǔn)確性因素分析

□甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)西部分中心 郭紅云

通過用氣相色譜法對(duì)食品中甜蜜素的測定方法進(jìn)行研究，從樣品處理、提取振搖、反應(yīng)溫度等氣相色譜法測定過程中所受到的影響因素都進(jìn)行了分析和探討，在分析檢測的過程中，只要能很好的控制好這些影響因素，就能減小測量誤差，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。

氣相色譜法；甜蜜素；準(zhǔn)確性；影響因素

甜蜜素學(xué)名環(huán)己基氨基磺酸鈉，為一種人工合成的非營養(yǎng)的新型甜味劑，甜度為蔗糖的30-50倍[1]，易溶于水，是一種高甜度、無熱值、安全衛(wèi)生，并能代替蔗糖的新型食品添加劑，具有清甜、爽口、水溶性好、對(duì)酸、堿穩(wěn)定性好、不吸潮等特點(diǎn)，是目前我國食品行業(yè)應(yīng)用最多的甜味劑之一。但消費(fèi)者如果經(jīng)常食用甜蜜素含量超標(biāo)的飲料或其他食品，就會(huì)因攝入過量對(duì)人體的肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成危害。因此《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》[2]中規(guī)定了其使用范圍和最大使用量。

目前，國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T5009.97-2003《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》[3]規(guī)定其測定方法有氣相色譜法、比色法、薄層層析法三種，在實(shí)際工作中多以第一法氣相色譜法進(jìn)行測定。在文獻(xiàn)報(bào)道中，對(duì)甜蜜素測定的方法研究很多，有毛細(xì)管氣相色譜法[4]、氣質(zhì)聯(lián)用法[5]、液相色譜法[6]，但就影響氣相色譜法測定食品中甜蜜素的準(zhǔn)確性因素分析研究的較少，本人通過大量實(shí)驗(yàn)本文就此著重進(jìn)行分析。

實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器,Agilent 6820氣相色譜儀，附氫火焰離子化檢測器（FID）;電子天平，賽多利斯；漩渦混合器；離心機(jī)。

1.2 試劑,正己烷；氯化鈉；50g/L亞硝酸鈉溶液；100g/L硫酸溶液；10mg/mL環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液.

1.3 色譜條件,色譜柱：長2m內(nèi)徑3mmU形不銹鋼柱，固定相Chromosorb W AW DMCS 80目～100目，涂以10%SE-30。柱溫：80℃；汽化溫度：150℃；FID檢測器溫度：160℃。載氣流速：40mL/min；氫氣30mL/ min;空氣300mL/min。

1.4 試樣處理,液體試樣：搖勻后直接稱取。含二氧化碳的試樣先加熱除去，含酒精的試樣加40g/L氫氧化鈉溶液調(diào)至堿性，于沸水浴中加熱除去，制成試樣。固體試樣：糕點(diǎn)、面包類粉碎制樣，果凍。罐頭等制成勻漿，涼果、蜜餞類試樣將其剪碎制成試樣，固體飲料直接稱取。

1.5 試樣制備,液體試樣：稱取10-20.0g試樣于100mL帶塞比色管，置冰浴中。固體試樣：稱取1-10.0g已剪碎的試樣于研缽中，加少許層析硅膠（或海砂）研磨至呈干粉狀，或用食品攪拌機(jī)打碎，經(jīng)漏斗倒入100mL容量瓶中，加水沖洗研缽，并將洗液一并轉(zhuǎn)移至容量瓶中。加水至刻度，不時(shí)搖動(dòng)，1h后過濾，即得試樣，準(zhǔn)確吸取20mL于100mL帶塞比色管，置冰浴中。

1.6 測定方法

1.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備,分別準(zhǔn)確吸取1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL環(huán)已基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于100mL帶塞比色管中，加水20mL,置冰浴中，加入5mL 50g/L亞硝酸鈉溶液，5mL 100g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30min，并經(jīng)常搖動(dòng)，然后準(zhǔn)確加入10mL正己烷，5g氯化鈉，搖勻后置漩渦混合器上振動(dòng)1min（或振搖80次），待靜止分層后吸出正己烷層于10mL帶塞離心管中進(jìn)行離心分離，每毫升正己烷提取液相當(dāng)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mg環(huán)已基氨基磺酸鈉，將標(biāo)準(zhǔn)提取液分別進(jìn)樣1μL于氣相色譜儀中，根據(jù)響應(yīng)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6.2 試樣測定,試樣管按1.6.1“加入5mL 50g/L亞硝酸鈉溶液······”起依法操作，然后將試樣同樣進(jìn)樣1μL，測得響應(yīng)值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出相應(yīng)含量。

1.7 結(jié)果計(jì)算：

式中：X—試樣中甜蜜素的含量（g/kg）;m1—試樣提取液中甜蜜素的含量（mg/mL）；m—試樣質(zhì)量（g）；10—正己烷加入量（mL）；V—進(jìn)樣體積（μL）。

提高檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性影響因素討論

2.1.1 樣品處理對(duì)檢測結(jié)果的影響,飲料、果汁等液體試樣搖勻后（含二氧化碳或酒精的按樣品處理方法處理后）直接稱量，對(duì)結(jié)果無影響。對(duì)蜜餞、糕點(diǎn)等固體試樣，分別采取用食品攪拌機(jī)打碎處理和研磨方法處理，對(duì)兩種處理方法進(jìn)行了回收率比較，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)蜜餞、糕點(diǎn)等固體試樣用食品攪拌機(jī)打碎處理時(shí)，回收率更高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性好。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1。

表1 樣品處理對(duì)檢測結(jié)果的影響Table 1 Effect of sample treatment on test results

2.1.2 振搖程度對(duì)測定結(jié)果的影響 取同一試樣，按1.6.1方法進(jìn)行衍生，加入正己烷提取液后，分別采用手動(dòng)振搖80次和不同振搖頻次漩渦混合器上振搖1min,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用手動(dòng)振搖80次或者在漩渦混合器上以3000r/min振動(dòng)1min提取甜蜜素完全。數(shù)據(jù)見表2。

表2 振搖程度對(duì)檢測結(jié)果的影響Table 2 Effect of the degree of shaking on the test results

2.1.3 反應(yīng)溫度時(shí)間對(duì)測定結(jié)果的影響,取同一試樣，分別在0℃冰水混合浴、8-10℃水浴和室溫（25℃）下進(jìn)行反應(yīng)后加入提取液正己烷，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，溫度對(duì)測定結(jié)果無影響，但在溫度較高時(shí)亞硝酸鈉在硫酸中會(huì)分解釋放出棕色氮氧化物氣體，并有刺激性氣味，所以，仍然建議在低溫下進(jìn)行反應(yīng)和提取。數(shù)據(jù)見表3。

表3 反應(yīng)溫度對(duì)檢測結(jié)果的影響Table 3 Effect of reaction temperature on test results

2.1.4 反應(yīng)試劑貯存時(shí)間對(duì)測定結(jié)果的影響 取同一試樣，分別加入現(xiàn)配和貯存不同時(shí)間的反應(yīng)試劑亞硝酸鈉和硫酸，按1.6.1方法進(jìn)行反應(yīng)和提取，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，試劑配置兩個(gè)月內(nèi)，對(duì)檢測結(jié)果無影響。數(shù)據(jù)見表4。

表4 反應(yīng)試劑貯存時(shí)間對(duì)檢測結(jié)果的影響Table 4 Effect of storage time on test results

2.1.5 提取液存放時(shí)間與存放溫度對(duì)測定結(jié)果的影響,取同一試樣提取液，分別在不同溫度下，存放不同時(shí)間后進(jìn)樣進(jìn)行測定，并同剛提取后進(jìn)行測定的結(jié)果進(jìn)行比較（回收率=放置后測定值/剛提取后測定值×100），實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，提取液隨存放時(shí)間的延長，回收率逐漸降低，誤差逐漸增大；提取液存放溫度的越高，回收率越低，誤差越大；并且于0℃條件下存放提取液，回收率下降最慢，穩(wěn)定性最好，因此，在檢測樣品較多的情況下，同時(shí)大批量前處理試樣時(shí)，將提取液存放在0℃冰箱內(nèi)，并于24h內(nèi)分別檢測完畢，能保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表4。

表5 提取液存放時(shí)間與存放溫度對(duì)測定結(jié)果的影響Table 5 Effect of storage time and storage temperature on the determination results

本人通過用國家標(biāo)準(zhǔn)氣相色譜法對(duì)食品中甜蜜素的測定方法研究，從樣品處理、提取振搖、反應(yīng)溫度等氣相色譜法測定過程中所受到的影響因素都進(jìn)行了分析和探討，在分析檢測的過程中，只要能很好的控制好這些影響因素，就能減小測量誤差，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。

[1]梁曉涵.氣相色譜法測定食品中甜蜜素及影響因素分析[J].海南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）,2013,26(3):287-290

[2]GB 2760-2014,食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].

[3]GB/T5009.97-2003,《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》[S].

[4]宋瑞霞,謝翔燕.毛細(xì)管氣相色譜法測定食品中的甜蜜素[J].食品研究與開發(fā),2008,29(1):128-130

[5]湛嘉,俞雪鈞.復(fù)雜基質(zhì)的食品中的甜蜜素的檢測方法[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,12(14):4

[6]衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所.食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)使用手冊(cè)[S].