□甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗西部分中心 郭紅云

氣相色譜法測定食品中甜蜜素準(zhǔn)確性因素分析

□甘肅省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗西部分中心 郭紅云

通過用氣相色譜法對食品中甜蜜素的測定方法進行研究，從樣品處理、提取振搖、反應(yīng)溫度等氣相色譜法測定過程中所受到的影響因素都進行了分析和探討，在分析檢測的過程中，只要能很好的控制好這些影響因素，就能減小測量誤差，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。

氣相色譜法；甜蜜素；準(zhǔn)確性；影響因素

甜蜜素學(xué)名環(huán)己基氨基磺酸鈉，為一種人工合成的非營養(yǎng)的新型甜味劑，甜度為蔗糖的30-50倍[1]，易溶于水，是一種高甜度、無熱值、安全衛(wèi)生，并能代替蔗糖的新型食品添加劑，具有清甜、爽口、水溶性好、對酸、堿穩(wěn)定性好、不吸潮等特點，是目前我國食品行業(yè)應(yīng)用最多的甜味劑之一。但消費者如果經(jīng)常食用甜蜜素含量超標(biāo)的飲料或其他食品，就會因攝入過量對人體的肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成危害。因此《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》[2]中規(guī)定了其使用范圍和最大使用量。

目前，國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T5009.97-2003《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》[3]規(guī)定其測定方法有氣相色譜法、比色法、薄層層析法三種，在實際工作中多以第一法氣相色譜法進行測定。在文獻報道中，對甜蜜素測定的方法研究很多，有毛細管氣相色譜法[4]、氣質(zhì)聯(lián)用法[5]、液相色譜法[6]，但就影響氣相色譜法測定食品中甜蜜素的準(zhǔn)確性因素分析研究的較少，本人通過大量實驗本文就此著重進行分析。

實驗部分

1.1 儀器,Agilent 6820氣相色譜儀，附氫火焰離子化檢測器（FID）;電子天平，賽多利斯；漩渦混合器；離心機。

1.2 試劑,正己烷；氯化鈉；50g/L亞硝酸鈉溶液；100g/L硫酸溶液；10mg/mL環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液.

1.3 色譜條件,色譜柱：長2m內(nèi)徑3mmU形不銹鋼柱，固定相Chromosorb W AW DMCS 80目～100目，涂以10%SE-30。柱溫：80℃；汽化溫度：150℃；FID檢測器溫度：160℃。載氣流速：40mL/min；氫氣30mL/ min;空氣300mL/min。

1.4 試樣處理,液體試樣：搖勻后直接稱取。含二氧化碳的試樣先加熱除去，含酒精的試樣加40g/L氫氧化鈉溶液調(diào)至堿性，于沸水浴中加熱除去，制成試樣。固體試樣：糕點、面包類粉碎制樣，果凍。罐頭等制成勻漿，涼果、蜜餞類試樣將其剪碎制成試樣，固體飲料直接稱取。

1.5 試樣制備,液體試樣：稱取10-20.0g試樣于100mL帶塞比色管，置冰浴中。固體試樣：稱取1-10.0g已剪碎的試樣于研缽中，加少許層析硅膠（或海砂）研磨至呈干粉狀，或用食品攪拌機打碎，經(jīng)漏斗倒入100mL容量瓶中，加水沖洗研缽，并將洗液一并轉(zhuǎn)移至容量瓶中。加水至刻度，不時搖動，1h后過濾，即得試樣，準(zhǔn)確吸取20mL于100mL帶塞比色管，置冰浴中。

1.6 測定方法

1.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備,分別準(zhǔn)確吸取1.00、2.00、3.00、4.00、5.00mL環(huán)已基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液于100mL帶塞比色管中，加水20mL,置冰浴中，加入5mL 50g/L亞硝酸鈉溶液，5mL 100g/L硫酸溶液，搖勻，在冰浴中放置30min，并經(jīng)常搖動，然后準(zhǔn)確加入10mL正己烷，5g氯化鈉，搖勻后置漩渦混合器上振動1min（或振搖80次），待靜止分層后吸出正己烷層于10mL帶塞離心管中進行離心分離，每毫升正己烷提取液相當(dāng)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mg環(huán)已基氨基磺酸鈉，將標(biāo)準(zhǔn)提取液分別進樣1μL于氣相色譜儀中，根據(jù)響應(yīng)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6.2 試樣測定,試樣管按1.6.1“加入5mL 50g/L亞硝酸鈉溶液······”起依法操作，然后將試樣同樣進樣1μL，測得響應(yīng)值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線圖中查出相應(yīng)含量。

1.7 結(jié)果計算：

式中：X—試樣中甜蜜素的含量（g/kg）;m1—試樣提取液中甜蜜素的含量（mg/mL）；m—試樣質(zhì)量（g）；10—正己烷加入量（mL）；V—進樣體積（μL）。

提高檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性影響因素討論

2.1.1 樣品處理對檢測結(jié)果的影響,飲料、果汁等液體試樣搖勻后（含二氧化碳或酒精的按樣品處理方法處理后）直接稱量，對結(jié)果無影響。對蜜餞、糕點等固體試樣，分別采取用食品攪拌機打碎處理和研磨方法處理，對兩種處理方法進行了回收率比較，實驗結(jié)果表明，對蜜餞、糕點等固體試樣用食品攪拌機打碎處理時，回收率更高，實驗結(jié)果準(zhǔn)確性好。實驗數(shù)據(jù)見表1。

表1 樣品處理對檢測結(jié)果的影響Table 1 Effect of sample treatment on test results

2.1.2 振搖程度對測定結(jié)果的影響 取同一試樣，按1.6.1方法進行衍生，加入正己烷提取液后，分別采用手動振搖80次和不同振搖頻次漩渦混合器上振搖1min,實驗結(jié)果表明，采用手動振搖80次或者在漩渦混合器上以3000r/min振動1min提取甜蜜素完全。數(shù)據(jù)見表2。

表2 振搖程度對檢測結(jié)果的影響Table 2 Effect of the degree of shaking on the test results

2.1.3 反應(yīng)溫度時間對測定結(jié)果的影響,取同一試樣，分別在0℃冰水混合浴、8-10℃水浴和室溫（25℃）下進行反應(yīng)后加入提取液正己烷，實驗結(jié)果表明，溫度對測定結(jié)果無影響，但在溫度較高時亞硝酸鈉在硫酸中會分解釋放出棕色氮氧化物氣體，并有刺激性氣味，所以，仍然建議在低溫下進行反應(yīng)和提取。數(shù)據(jù)見表3。

表3 反應(yīng)溫度對檢測結(jié)果的影響Table 3 Effect of reaction temperature on test results

2.1.4 反應(yīng)試劑貯存時間對測定結(jié)果的影響 取同一試樣，分別加入現(xiàn)配和貯存不同時間的反應(yīng)試劑亞硝酸鈉和硫酸，按1.6.1方法進行反應(yīng)和提取，實驗結(jié)果表明，試劑配置兩個月內(nèi)，對檢測結(jié)果無影響。數(shù)據(jù)見表4。

表4 反應(yīng)試劑貯存時間對檢測結(jié)果的影響Table 4 Effect of storage time on test results

2.1.5 提取液存放時間與存放溫度對測定結(jié)果的影響,取同一試樣提取液，分別在不同溫度下，存放不同時間后進樣進行測定，并同剛提取后進行測定的結(jié)果進行比較（回收率=放置后測定值/剛提取后測定值×100），實驗結(jié)果表明，提取液隨存放時間的延長，回收率逐漸降低，誤差逐漸增大；提取液存放溫度的越高，回收率越低，誤差越大；并且于0℃條件下存放提取液，回收率下降最慢，穩(wěn)定性最好，因此，在檢測樣品較多的情況下，同時大批量前處理試樣時，將提取液存放在0℃冰箱內(nèi)，并于24h內(nèi)分別檢測完畢，能保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。 實驗數(shù)據(jù)見表4。

表5 提取液存放時間與存放溫度對測定結(jié)果的影響Table 5 Effect of storage time and storage temperature on the determination results

本人通過用國家標(biāo)準(zhǔn)氣相色譜法對食品中甜蜜素的測定方法研究，從樣品處理、提取振搖、反應(yīng)溫度等氣相色譜法測定過程中所受到的影響因素都進行了分析和探討，在分析檢測的過程中，只要能很好的控制好這些影響因素，就能減小測量誤差，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。

[1]梁曉涵.氣相色譜法測定食品中甜蜜素及影響因素分析[J].海南師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）,2013,26(3):287-290

[2]GB 2760-2014,食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].

[3]GB/T5009.97-2003,《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測定》[S].

[4]宋瑞霞,謝翔燕.毛細管氣相色譜法測定食品中的甜蜜素[J].食品研究與開發(fā),2008,29(1):128-130

[5]湛嘉,俞雪鈞.復(fù)雜基質(zhì)的食品中的甜蜜素的檢測方法[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報,2005,12(14):4

[6]衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗所.食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)使用手冊[S].