楊　曉，王　喆，曾愛國(1.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安　710061；2.西安市中心醫(yī)院，西安　71000；.陜西省中醫(yī)藥研究院食品化妝品檢驗檢定中心，西安　71000)

?

葛丹藍(lán)膠囊制備工藝研究

楊曉1，2，王喆3，曾愛國1*(1.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安710061；2.西安市中心醫(yī)院，西安710003；3.陜西省中醫(yī)藥研究院食品化妝品檢驗檢定中心，西安710003)

摘要：目的確定葛丹藍(lán)膠囊提取、成型的最佳工藝。方法以干膏量、總黃酮為指標(biāo)，采用正交實驗優(yōu)化葛丹藍(lán)膠囊的最佳提取工藝；單因素考察成型工藝。結(jié)果人參粉碎以凈粉量投料；葛根、丹參、桑葉、絞股藍(lán)用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇回流提取2次，每次加12倍量溶劑，1.5 h，制成干膏粉備用；人參細(xì)粉與上述干膏粉混勻后用體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇制軟材，16目篩制粒，裝0號膠囊，即得。結(jié)論葛丹藍(lán)膠囊的制備工藝合理，為其進(jìn)一步藥效和臨床研究奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：葛丹藍(lán)膠囊；總黃酮；制備；正交實驗

葛丹藍(lán)膠囊是由葛根、丹參、桑葉、絞股藍(lán)、人參等藥材組成，具有生津止渴、疏肝解郁、滋補(bǔ)肝腎和化濁降脂的功效，用于降血糖和降血脂。

葛根為豆科植物野葛的干燥根，性涼、甘、辛，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有解肌退熱、生津止渴之功。實驗研

究發(fā)現(xiàn)，葛根素能明顯降低血脂，改善糖耐量[1]；丹參具有活血祛瘀、通經(jīng)止痛、清心除煩和涼血消癰之效，主要用于胸痹心痛、瘡瘍腫痛、熱痹疼痛等癥。研究發(fā)現(xiàn)，丹參具有明顯的降血脂作用[2]，能改善2型糖尿病患者血糖控制狀況[3]；自古以來中醫(yī)就將桑葉作為治療消渴癥(糖尿病)的中藥，廣泛應(yīng)用于臨床。桑葉總黃酮能抑制大鼠小腸雙糖酶活性，具有顯著的降血糖作用[4]，桑葉提取物還能有效地減肥并調(diào)節(jié)血脂[5]；絞股藍(lán)為葫蘆科植物絞股藍(lán)的干燥全草，實驗發(fā)現(xiàn)絞股藍(lán)皂苷能使糖尿病大鼠血糖、血脂、尿蛋白、腎質(zhì)量/體質(zhì)量等指標(biāo)明顯降低[6]，具有降血脂作用[7]；人參為五加科植物人參的干燥根及根莖，性平，味甘、微苦；歸脾、肺、心經(jīng)，具有益氣生津、止消渴的作用，人參能顯著性降低實驗性糖尿病大鼠的血糖，具有明顯的降血脂作用[8]。本課題通過研究葛丹藍(lán)膠囊的提取、成型工藝，為其進(jìn)一步藥效和臨床研究奠定基礎(chǔ)。

1儀器與試藥

1.1儀器BT125D電子分析天平(德國賽多利斯)；UV-7504紫外可見分光光度計(上海欣茂儀器有限公司)；恒溫水浴箱(北京科偉永興儀器有限責(zé)任公司)。

1.2試藥人參、葛根、丹參、桑葉和絞股藍(lán)等藥材均購于西安藻露堂藥業(yè)集團(tuán)西京醫(yī)藥有限公司；蘆丁對照品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%，上海西寶生物科技有限公司)；聚酰胺粉(西安化學(xué)試劑廠)；其他試劑均為分析純；水為蒸餾水。

2方法與結(jié)果

2.1工藝路線設(shè)計根據(jù)所用原料有效成分的性質(zhì)并參考相關(guān)文獻(xiàn)[9-11]，擬確定本品工藝路線為：人參粉碎，以細(xì)粉入藥；葛根、丹參、桑葉和絞股藍(lán)用乙醇回流提取，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇，濃縮成浸膏，減壓干燥，粉碎，備用；上述干膏粉與人參細(xì)粉混勻，制粒，整粒，填充，包裝。

2.2粉碎工藝考察取人參凈藥材60 ℃低溫干燥后稱取3份，各100 g，粉碎，過100目篩，稱量，計算出粉率，結(jié)果見表1。

表1人參粉碎過程的出粉率結(jié)果

Tab.1 The yield of ginseng grinding process

實驗次數(shù)投料量/g出粉量/g出粉率/%平均值/%110095．795．796．1210096．596．5310096．296．2

結(jié)果表明，人參粉碎的平均出粉率為96.1%，表明人參粉性較好。制劑中凈粉量投料，以保證投料的準(zhǔn)確性。

2.3乙醇提取工藝通過多因素的正交實驗，優(yōu)選乙醇提取工藝的各項參數(shù)。以醇提干膏收率及總黃酮含量作為考核指標(biāo)，選擇最佳的工藝參數(shù)。

2.3.1正交實驗設(shè)計影響醇提的因素有乙醇體積分?jǐn)?shù)、乙醇用量、提取時間和提取次數(shù)，在這4個因素的基礎(chǔ)上，每個因素設(shè)計3個水平，因素與水平見表2。為了系統(tǒng)、全面地考察醇提的工藝參數(shù)，選擇L9(34)正交表進(jìn)行設(shè)計研究，結(jié)果見表3。

表2 實驗因素水平表

Tab.2 Factors and levels of the orthogonal design

水平因素A，乙醇體積分?jǐn)?shù)/%B，乙醇用量/倍C，提取時間/hD，提取次數(shù)/次160121．01270141．52380162．03

表3L9(34)正交實驗設(shè)計及結(jié)果

Tab.3 The results of the orthogonal design

實驗號ABCD評價指標(biāo)干膏收率/%總黃酮含量/g1111111．130．1632122214．410．4323133315．940．3834212315．240．5435223112．080．3426231213．510．4777313213．420．5018321313．980．4519332111．690．280干膏得率K141．4839．7938．6234．90K240．8340．4741．3441．34K339．0941．1441．4445．16k113．8313．2612．8711．63k213．6113．4913．7813．78k313．0313．7113．8115．05R0．800．450．943．42總黃酮含量K10．981．211．090．79K21．361．231．261．41K31．231．141．231．38k10．330．400．360．26k20．450．410．420．47k30．410．380．410．46R0．120．030．060．21

2.3.2實驗方法與結(jié)果按照1∶10處方量比例，取葛根55 g、丹參40 g、桑葉30 g、絞股藍(lán)30 g，共155 g，平行9份，隨機(jī)取樣編為1～9個實驗號。按照正交表L9(34)中每個實驗號要求進(jìn)行實驗，濾過，合并濾液，測定干膏收率和總黃酮含量。

(1)干浸膏得率測定量取上述備用液200 mL，置于已干燥的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，真空干燥后，稱定質(zhì)量，按照下式計算干浸膏得率，結(jié)果見表4。

(2)總黃酮含量測定蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：取蘆丁5.0 mg，精密稱定，置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，搖勻，即得，1 mL約含蘆丁50 μg。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0和5.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，依照紫外-可見分光光度法，在360 nm波長處測定吸光度值，以濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程。

樣品處理：取干膏粉0.5 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加乙醇適量，超聲提取20 min，繼續(xù)加乙醇定容至刻度，搖勻后靜置，吸取上清液2.0 mL，置于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，置于水浴上揮發(fā)除去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。先用20 mL苯洗，苯液棄去，用甲醇洗脫黃酮，定容至25 mL。依照紫外-可見分光光度法，在360 nm波長處測定吸光度值。以回歸方程為依據(jù)，計算樣品中總黃酮含量，結(jié)果見表3。

(3)正交實驗結(jié)果由表3直觀分析可知，以干膏收率為考察指標(biāo)時，A1>A2>A3，B3>B2>B1，C3>C2>C1，D3>D2>D1， A、B、C、D各因素影響依次為D>C>A>B，最佳工藝為A1B3C3D3；以總黃酮含量為考察指標(biāo)時，A2>A3>A1，B2>B1>B3，C2>C3>C1，D2>D3>D1，A、B、C、D各因素影響依次為D>A>C>B，最佳工藝為A2B2C2D2。

方差分析結(jié)果見表4。由表4可知，以干膏收率為考察指標(biāo)時，D因素影響最顯著(P<0.05)，A、B、C因素影響較小，無顯著性差異；以總黃酮含量為考察指標(biāo)時，D和A因素影響顯著(P<0.05)，B和C因素影響較小，無顯著性差異。

表4 正交實驗方差分析

Tab.4 Variance analysis of the orthogonal design

類別方差來源離差平方和自由度FP干膏得率A1．018023．352>0．05B(誤差)0．303821．000C1．706825．619>0．05D17．9260259．014<0．05總黃酮含量A0．0254219．013<0．05B(誤差)0．001321．000C0．005123．818>0．05D0．0825261．650<0．05

注：F0.05(2.2)=19.0。

綜合直觀分析和方差分析，A和D 2個因素對總黃酮含量有顯著性影響，以總黃酮含量為考察指標(biāo)優(yōu)選的A2D2較以干膏收率為考察指標(biāo)優(yōu)選的A1D3，提取的總黃酮含量更多，但提出的干膏更少，意味著A2D2單位體積干膏中總黃酮的含量更高，有利于服用量的減少；B和C因素對2個指標(biāo)均無顯著性影響，且B因素對兩指標(biāo)的影響最小，因此選擇B1與B2進(jìn)行比較，B2的總黃酮含量只比B1略高，但B1減少了溶劑的加入，有利于降低成本；對于C因素，以總黃酮含量為考察指標(biāo)優(yōu)選的C2較以干膏收率為考察指標(biāo)優(yōu)選的C3，提取出的總黃酮含量更多，且C2較C3提取時間短，更能節(jié)省能耗。由于本工藝的目的是盡可能多地提取藥材中的有效成分，同時縮小制劑體積、減少服用量，并盡可能的降低能耗。故乙醇提取部分最優(yōu)工藝條件為A2B1C2D2，即用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇回流提取2次，每次加入12倍量乙醇回流1.5 h。

(4)驗證實驗 按照1∶10處方量比例，取葛根55 g、丹參40 g、桑葉30 g、絞股藍(lán)30 g，共155 g，平行3份，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%的乙醇回流提取2次，每次加入12倍量溶劑，回流提取1.5 h，濾過，合并濾液，測定干膏收率及總黃酮含量，結(jié)果見表5。

表5驗證實驗結(jié)果

Tab.5 The results of the verification test

實驗號藥材量/g干膏得率/%平均得率/%總黃酮含量/g平均含量/g115514．3214．180．5720．564215514．010．568315514．210．552

驗證結(jié)果表明，乙醇提取平均干膏收率為14.18%，總黃酮平均含量為0.564 g，其中總黃酮含量比正交實驗中最高值略高，說明工藝基本可行，故確定最佳工藝為:加體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇,回流提取2次，每次加入12倍量溶劑，各回流提取1.5 h。

2.4成型工藝考察

2.4.1潤濕劑考察取混合好的細(xì)粉(干膏粉與人參細(xì)粉)3份，每份200 g。用等體積不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇分別制粒，將顆粒成型的難易及干顆粒的硬度等進(jìn)行比較，結(jié)果見表6。

表6乙醇體積分?jǐn)?shù)對制粒的影響

Tab.6 The effect of the ethanol volume fraction on granulation

乙醇體積分?jǐn)?shù)/%外觀情況75制粒較困難，濕顆粒易粘結(jié);干顆粒硬度大85制粒容易，顆粒成型性好;干顆粒硬度適中95制粒容易，干顆粒硬度適中;細(xì)粉比例較大

結(jié)果表明，用體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇制粒，顆粒成型好，硬度適中，大小均勻，質(zhì)量較好，故確定以體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇為潤濕劑。

2.4.2干顆粒流動性的測定顆粒流動性的大小會直接影響到膠囊填充機(jī)分裝時裝量差異的大小。相對而言，流動性大時裝量差異會小，反之則大。顆粒流動性可用休止角來表示，休止角越大，流動性就越差。采用固定漏斗法，對休止角進(jìn)行測定，以堆高度與底面半徑的函數(shù)值來表示。通過實驗測定，干顆粒平均休止角為37.0°，表明干顆粒的流動性良好。

2.4.3膠囊裝量確定根據(jù)處方工藝條件篩選的有關(guān)數(shù)據(jù)，計算膠囊裝量。配方中人參細(xì)粉200 g；提取部分：醇提藥材量為1 550 g，干膏得率14.18%，干膏量約219.79 g，共得總量約為420 g，共制成膠囊1 000粒，每粒應(yīng)裝0.420 g，考慮到粉碎、過篩、制粒、膠囊填充工序的損耗，故本品規(guī)格定為每粒裝0.4 g。

2.4.4空心膠囊型號的選擇根據(jù)制備的膠囊內(nèi)容物(即藥物顆粒)堆密度與膠囊的容積來確定。堆密度的測定采用體積質(zhì)量比法進(jìn)行。結(jié)果表明，干顆粒堆密度為0.603 1 g·mL-1，裝量為0.4 g/粒，因此確定空心膠囊容積V為0.663 mL，0號膠囊容積為0.67 mL，能滿足填充要求，再結(jié)合多次試裝結(jié)果，因此選擇0號膠囊，每粒膠囊裝0.4 g。

3結(jié)論

根據(jù)以上研究結(jié)果確定本品的生產(chǎn)工藝為：

(1)葛根、丹參、桑葉、絞股藍(lán)和人參5味藥材，經(jīng)凈制、檢驗合格后供制劑使用。

(2)取人參藥材，60 ℃干燥后粉碎，過100目篩，收取200 g細(xì)粉，用5 kGy劑量的60Co輻照滅菌后備用。

(3)將葛根、丹參、桑葉和絞股藍(lán)加12倍量體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇，回流提取2次，每次1.5 h，提取液濾過，合并濾液(藥渣棄)，濾液回收乙醇(-0.065～-0.075 MPa，65 ℃)，并濃縮至相對密度為1.30～1.35(60 ℃測)的浸膏，減壓干燥(-0.085 MPa，65 ℃)，所得干膏粉碎成細(xì)粉，過80目篩，備用。

(4)將上述干膏粉與人參細(xì)粉混勻，用體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇制軟材，16目篩制粒，55～60 ℃干燥，14目篩整粒，裝入0號膠囊，拋光，檢驗，包裝，即得成品(每粒裝0.4 g)。

4討論

人參在方中為名貴藥材且其成粉性好，以細(xì)粉入藥，既可兼作賦形劑，避免膠囊劑內(nèi)容物吸潮、結(jié)塊現(xiàn)象的出現(xiàn)，又可較多地保留其有效成分，提高其成品的穩(wěn)定性，對工藝有利，并可減少大量輔料的使用。因此，本工藝中人參采用直接打粉入藥的方法。葛根、丹參、桑葉主要含有黃酮類成分，絞股藍(lán)主要含有皂苷等成分，黃酮類與皂苷類成分均易溶于乙醇，因此選用乙醇對其進(jìn)行提取。乙醇提取時受乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取次數(shù)、提取時間、乙醇用量等因素的影響，因此對醇提工藝進(jìn)行優(yōu)化。醇提的最優(yōu)工藝是：葛根等四味藥材加12倍量體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇回流提取2次，每次1.5 h。葛丹藍(lán)膠囊采用制粒后填充膠囊，因此對制粒過程中的潤濕劑、顆粒的流動性以及填充量等進(jìn)行考察，從而對制劑成型進(jìn)行優(yōu)化。

本文在以往研究的基礎(chǔ)上，對葛丹藍(lán)膠囊的醇提工藝和成型工藝進(jìn)行優(yōu)化，以確定最佳制備工藝。結(jié)果表明，葛丹藍(lán)膠囊制備工藝合理，為其進(jìn)一步藥效和臨床研究奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]玉從容，呂俊華，王丹.葛根素對胰島素抵抗綜合征大鼠血壓、血脂及糖耐量的影響[J].山東中醫(yī)雜志，2005，24(6):367-369.

[2]何淑虹.丹參對花生四烯酸及血脂調(diào)節(jié)的大鼠實驗研究[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2005，15(12):749-750.

[3]唐國驥，許玲. 復(fù)方丹參對2型糖尿病患者血糖及紅細(xì)胞變形性的影響[J].山東醫(yī)藥，1999，39(10):25-26.

[4]原愛紅，黃哲，馬駿，等.桑葉黃酮的提取及其降糖作用的研究[J].中草藥，2004， 35(11):1242-1243.

[5]耿成燕，姜麗平，宮德正，等.殼聚糖、桑葉與決明子提取物對大鼠體脂、血脂與血糖的影響[J].中國臨床康復(fù)，2005，9(39):112-114.

[6]郎志芳，董琦，韓繼成，等.絞股藍(lán)皂甙對糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激影響的研究[J]. 牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2005，26(4):5-8.

[7]林轉(zhuǎn)娣.絞股藍(lán)總甙片調(diào)節(jié)血脂的療效觀察[J]. 廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001， 19(3):200-201.

[8]徐承水.人參降血脂作用的實驗研究[J].長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2000，16(3):45-46.

[9]崔九成，宋小妹，張培芳，等.葛根總黃酮提取工藝研究[J]. 西北藥學(xué)雜志，1999，14(5):202.

[10]郭增軍，蘇紀(jì)蘭，王開，等.丹參提取工藝的實驗研究[J].西北藥學(xué)雜志，2002， 17(2):62-63.

[11]張阿慧，安彩賢，侯鴻軍，等.正交實驗優(yōu)選絞股藍(lán)總皂苷的提取方法[J].西北藥學(xué)雜志，2001，16(6):252-253.

·藥物分析·

Study on the preparation of Gedanlan Capsules

YANG Xiao1，2，WANG Zhe3，ZENG Aiguo1*(1.School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；2.Xi′an Central Hospital，Xi′an 710003，China；3. Food and Cosmestic Examine Center，Shaanxi Provincial Acadamy of Traditional Chinese Medicine，Xi′an 710003，China)

Abstract:Objective To optimize the extraction and preparation process of Gedanlan Capsules. Method An orthogonal experimental design was used to optimize the parameters of the extraction process on the basis of the dry extract yield and flavonoid contents，and the single factor experiment was used to optimize the parameters of the preparation process. Results Ginseng was crushed and the resulting powder was used. Pueraria lobata radix，Salvia miltiorrhiza，Lolium mori and Gynostemma pentaphyllum were extracted for two times with 70% ethanol，the ratio of solvent to material was 12，the extraction time was 1.5 h，and the resulting extraction liquid was condensed into a dry paste for use. The ginseng powder and the dry paste powder were mixed with 85% ethanol for soft material，and the granule was prepared by 16 mesh sieve and filled into the No. 0 capsule for Gedanlan Capsules. Conclusion The preparation of Gedanlan Capsules is feasible.

Key words:Gedanlan Capsules；flavonoids；preparation；orthogonal design

(收稿日期：2015-06-23)

*通信作者：曾愛國，男，博士，副教授

作者簡介：楊曉，女，在讀碩士研究生

中圖分類號：R944

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)02-0142-04

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.02.010