李界秋，李楊秀，吳凡

（廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院 南寧市 530005）

火龍果潰瘍病菌病的室內(nèi)藥劑篩選

李界秋，李楊秀，吳凡

（廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院 南寧市 530005）

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定8種殺菌劑對(duì)火龍果潰瘍病菌?。∟eoscytalidium dimidiatum）的抑制作用，結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、苯甲·丙環(huán)唑、克菌·戊唑醇、吡唑醚菌酯和甲基硫菌靈對(duì)火龍果潰瘍病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果好，EC50值分別為0.1557 mg/L、0.3020 mg/L、0.5205 mg/L、0.8660 mg/L、2.1786 mg/L和2.7372 mg/L。離體接種試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示，甲基硫菌靈2.50μg/mL、吡唑醚菌酯1.00μg/mL、咪鮮胺0.25μg/mL、苯醚甲環(huán)唑0.25μg/mL、苯甲·丙環(huán)唑0.25μg/mL和克菌·戊唑醇0.25μg/mL的離體接種防治效果好，分別達(dá)到96.84%、95.06%、93.47%、91.00%、86.56%和83.10%。本研究結(jié)果為火龍果潰瘍病田間藥效防治提供了科學(xué)依據(jù)。

火龍果潰瘍病；新暗色柱節(jié)孢菌；殺菌劑；毒力測(cè)定；防治效果

火龍果潰瘍病是發(fā)生最普遍、為害最嚴(yán)重的火龍果病害之一，由新暗色柱節(jié)孢菌引起，主要為害火龍果的肉質(zhì)莖和果實(shí)，嚴(yán)重時(shí)造成肉質(zhì)莖和果實(shí)腐爛[1-3]。隨著火龍果種植面積的不斷擴(kuò)大，火龍果潰瘍病日漸猖獗，廣西防城港市高發(fā)病區(qū)潰瘍病率達(dá)50%左右[3]，對(duì)火龍果生產(chǎn)造成了嚴(yán)重的影響。目前火龍果潰瘍防治仍以化學(xué)防治為主，因此，篩選高效低毒的殺菌劑，對(duì)火龍果生產(chǎn)具有重要意義。陸志翔等曾對(duì)廣西火龍果潰瘍病病原菌進(jìn)行過(guò)鑒定[3]；魏雅麗和王會(huì)會(huì)等對(duì)海南省火龍果潰瘍病菌進(jìn)行了分離鑒定和室內(nèi)殺菌劑初步篩選[4-5]；易潤(rùn)華等研究表明菌絲生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)受溫度、pH影響大[1]，但有關(guān)該菌室內(nèi)毒力測(cè)定的試驗(yàn)還很少，且尚未有通過(guò)離體接種法篩選藥劑的報(bào)道和室內(nèi)藥劑篩選的報(bào)道。苯甲·丙環(huán)唑（difenoconazole·propiconazole）和苯醚甲環(huán)唑（difenoconazole）是廣譜、高效、內(nèi)吸輸導(dǎo)性強(qiáng)的三唑類殺菌劑，已應(yīng)用于防治各種真菌性病害[6]。嘧菌酯（azoxystrobin）和吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）是一類高效、殺菌譜廣的甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，可用于防治一些果樹(shù)病害[7]。咪鮮胺（prochloraz）為高效、廣譜、低毒的咪唑類殺菌劑，具有內(nèi)吸傳導(dǎo)、預(yù)防保護(hù)治療等多重作用，主要用于防治由子囊菌和半知菌引起的多種農(nóng)作物病害[8-9]。 克菌·戊唑醇（captan. tebuconazole）由克菌丹和戊唑醇復(fù)配組合的低毒環(huán)保殺菌劑，具有保護(hù)、治療的雙重功效，對(duì)桃褐腐病菌具有較強(qiáng)毒力[10]。甲基硫菌靈（hiophanatemethyl）是一種老牌的廣譜性內(nèi)吸低毒殺菌劑，具有預(yù)防和治療作用，對(duì)多種作物真菌性病害效果好[10-11]。溴·腈（bromothalonil·myclobutani）是針對(duì)炭疽菌產(chǎn)生抗藥性而研制的新型復(fù)配殺菌劑，主要成分是溴菌清和腈菌唑，具有內(nèi)吸、預(yù)防和治療作用。本研究選擇這些良好的殺菌劑開(kāi)展對(duì)火龍果潰瘍病病菌的毒力測(cè)定和室內(nèi)離體接種試驗(yàn)，以期篩選出具有較好作用的藥劑，為田間開(kāi)展火龍果潰瘍病化學(xué)防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

新暗色柱節(jié)孢菌［Neoscytalidium dimidiatum（Penz.）Crous＆Slippers］，病原菌采自南寧市青秀區(qū)南陽(yáng)鎮(zhèn)花雨湖火龍果種植基地，經(jīng)分離、純化、鑒定及致病性測(cè)定后供試。

1.2 供試藥劑及濃度設(shè)置

450 g/L咪鮮胺EW（江門市大光明農(nóng)化有限公司生產(chǎn)）；400 g/L克菌·戊唑醇SC（江蘇省農(nóng)墾生物化學(xué)有限公司生產(chǎn)）；50%苯甲·丙環(huán)唑EC（深圳諾普信農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)）；10%苯醚甲環(huán)唑WG［百農(nóng)思達(dá)（北京）農(nóng)用化學(xué)品有限公司生產(chǎn)］；250 g/L吡唑醚菌酯EC（河北天勝化工集團(tuán)有限公司生產(chǎn)）；28%溴·腈WC（德克森作物有限公司生產(chǎn)）；25%嘧菌酯SC（河北石家莊深泰化工有限公司生產(chǎn)）；50%甲基硫菌靈SC（成都科利隆生化有限公司生產(chǎn)）。

1.2.1 藥劑毒力測(cè)定的濃度

在預(yù)備試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定各種藥劑的濃度。咪鮮胺、克菌·戊唑醇、苯甲·丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑的有效使用濃度梯度均為1.00 μg/mL、0.50 μg/mL、0.25 μg/mL、0.10 μg/mL和0.05 μg/mL，吡唑醚菌酯為4.00 μg/mL、2.00 μg/mL、1.00 μg/mL、0.50 μg/mL和0.25 μg/mL，溴·腈為280.00 μg/mL、140.00 μg/mL、70.00 μg/mL、35.00 μg/mL和17.50 μg/mL，嘧菌酯為200.00 μg/mL、100.00 μg/ mL、50.00 μg/mL、25.00 μg/mL和10.00 μg/mL，甲基硫菌靈為10.00 μg/mL、5.00 μg/mL、2.50 μg/ mL、1.00 μg/mL和0.50 μg/mL。

1.2.2 藥劑離體接種試驗(yàn)的濃度

咪鮮胺、克菌·戊唑醇、苯甲·丙環(huán)唑和苯醚甲環(huán)唑的有效使用濃度均為0.25 μg/mL，吡唑醚菌酯為1.00 μg/mL，溴·腈為70.00 μg/mL，嘧菌酯為50.00 μg/mL，甲基硫菌靈為2.50 μg/mL。

1.3 供試培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）。

1.4 毒力測(cè)定試驗(yàn)方法

參照菌絲生長(zhǎng)抑制測(cè)定法[12]，火龍果潰瘍病病菌菌絲在直徑9 cm培養(yǎng)皿中長(zhǎng)至約7 cm時(shí)，打取菌落邊緣新鮮菌碟（直徑5 cm），分別移接種到含有各藥劑不同濃度的PDA平板上，以不含藥劑的作對(duì)照，在28℃下培養(yǎng)， 當(dāng)空白對(duì)照菌絲長(zhǎng)至7 cm以上時(shí)采用交叉“+”法測(cè)量菌落直徑，每處理重復(fù)3次，試驗(yàn)重復(fù)2次。采用DPS統(tǒng)計(jì)軟件中機(jī)率值分析法計(jì)算藥劑對(duì)火龍果潰瘍病病菌菌絲生長(zhǎng)的有效抑制濃度（EC50）、毒力回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

1.5 離體接種試驗(yàn)方法

1.5.1 菌種準(zhǔn)備

火龍果潰瘍病病菌在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)4 d，用無(wú)菌水洗脫節(jié)孢子成孢子懸浮液，節(jié)孢子濃度調(diào)至105個(gè)/mL[3]。

1.5.2 離體接種試驗(yàn)

剪取老熟程度一致的火龍果新梢枝條約25cm，先用75%酒精進(jìn)行表面消毒，再用相應(yīng)藥劑離體接種試驗(yàn)濃度的藥液噴霧2次（間隔1 d），第2次噴霧1 d后接種。2016年7月13日用滅菌的解剖針在火龍果枝條上刺傷表皮組織，然后用移液器接種5 μL菌液在傷口處，每個(gè)處理接種3根枝條，每枝條接種3個(gè)點(diǎn)，接種點(diǎn)之間相距約5 cm。接種后將枝條置于常溫（28～32℃）的保濕盒中觀察記錄，以噴清水后接種菌液作對(duì)照1（CK1），噴清水后接無(wú)菌水作對(duì)照2（CK2），每種處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。2016年8月29日采用交叉“+”法測(cè)量病斑直徑。參照農(nóng)藥生物活性測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算防治效果[13]。

防治效果（%）= ［（對(duì)照病斑擴(kuò)展面積總和-處理病斑擴(kuò)展面積總和）/對(duì)照病斑擴(kuò)展面積總和］×100

2 結(jié)果與分析

2.1 供試藥劑對(duì)火龍果潰瘍病菌EC50值比較

從表1可以看出，供試藥劑中苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、苯甲·丙環(huán)唑克菌·戊唑醇、吡唑醚菌酯和甲基硫菌靈對(duì)火龍果潰瘍病病菌菌絲生長(zhǎng)有好的抑制效果，對(duì)火龍果潰瘍病病菌的EC50值分別為0.155 7、0.302 0、0.520 5、2.178 6和2.737 2 mg/L。嘧菌酯和溴·腈對(duì)火龍果潰瘍病病菌菌絲生長(zhǎng)抑制作用弱，EC50值分別為33.807 8和224.166 1 mg/L。測(cè)定8種農(nóng)藥毒力回歸方程的相關(guān)系數(shù)均大于0.9，而r 0.05值等于0.878，說(shuō)明相關(guān)系數(shù)差異顯著。

表2 藥劑對(duì)火龍果潰瘍病病菌的離體接種試驗(yàn)效果

2.2 火龍果潰瘍病離體接種試驗(yàn)效果

從表2和圖1可以看出火龍果潰瘍病病菌離體接種試驗(yàn)結(jié)果。甲基硫菌靈2.50 μ g/mL、吡唑醚菌酯1.00 μ g/mL、咪鮮胺0.25 μ g/mL、苯醚甲環(huán)唑0.25 μ g/mL、苯甲·丙環(huán)唑0.25 μg/mL、克菌·戊唑醇0.25 μg/ mL、溴·腈70.00 μg/mL、嘧菌酯50.00 μg/mL和對(duì)照1（CK1）處理后產(chǎn)生病斑平均直徑依次為1.0 mm、1.6 mm、2.0 mm、2.3 mm、2.7 mm、3.3 mm、3.7 mm、5.6 mm、7.3 mm和9.0 mm，對(duì)照2（CK2）組織被刺傷后產(chǎn)生的傷口愈合斑；甲基硫菌靈2.50 μg/ mL、吡唑醚菌酯1.00 μg/mL、咪鮮胺0.25 μg/mL、苯醚甲環(huán)唑0.25 μg/mL、苯甲·丙環(huán)唑0.25 μg/mL和克菌·戊唑醇0.25 μg/mL的防治效果好，分別達(dá)到96.84%、95.06%、93.47%、91.00%、86.56%和83.10%，嘧菌酯50.00 μg/mL防治效果最差，只有34.21%。

圖1 1：CK1(噴清水接菌液) 2：嘧菌酯 3：溴·腈4：克菌·戊唑醇 5：苯甲·丙環(huán)唑 6：苯醚甲環(huán)唑7：咪鮮胺 8：吡唑醚菌酯 9：甲基硫菌靈 10：CK2（噴清水接無(wú)菌水）

3 討論與結(jié)論

本研究中，三唑類殺菌劑中苯醚甲環(huán)唑?qū)瘕埞麧儾〔【z生長(zhǎng)抑制作用的 EC50值為0.155 7 mg/L，與武玉國(guó)等研究對(duì)黃瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)抑制EC50值0.154 mg/L基本一致，抑制作用強(qiáng)[14]，離體接種的防效達(dá)91.00%。甲氧基丙烯酸酯類中吡唑醚菌酯對(duì)火龍果潰瘍病病菌菌絲生長(zhǎng)有較好的抑制效果較好，EC50值為2.178 6 mg/L，比王會(huì)會(huì)等的研究結(jié)果EC50值1.029 1 mg/L[5]，以及段俊飛等研究吡唑醚菌酯對(duì)蘋果斑點(diǎn)落葉病菌和輪紋病病菌菌絲生長(zhǎng)的EC50值0.176 3和0.033 3 mg/L略高[7]，離體接種的防效達(dá)95.06%。甲基硫菌靈對(duì)火龍果潰瘍病菌菌絲生長(zhǎng)抑制作用的 EC50值為2.737 2 mg/L，但其離體接種的防效達(dá)96.84%。

綜上所述，甲基硫菌靈、吡唑醚菌酯、咪鮮胺、苯醚甲環(huán)唑、苯甲·丙環(huán)唑和克菌·戊唑醇對(duì)火龍果潰瘍病病菌菌絲生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，并且離體接種防治效果好，可進(jìn)一步進(jìn)行田間藥效防治試驗(yàn)。

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S436.67+9

B

1003-8779（2016）04-0016-03

2016-11-9

南寧市青秀區(qū)科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（2015N05）

李界秋（1967—），男，廣西玉林市人，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師。