田繼承 林群 朱利俊 張錦國 朱智

摘要：試驗采用膠體金試紙條和血凝抑制試驗同時對480份雞、鴨血清樣品進(jìn)行檢測，對比分析2種方法的性能和特點(diǎn)。結(jié)果表明，試驗采用的禽流感病毒H7亞型抗體膠體金試紙條具有性能穩(wěn)定可靠、方法簡便快速等優(yōu)點(diǎn)，廣泛適合用于禽流感病毒（H7亞型）抗體的現(xiàn)場快速檢測。

關(guān)鍵詞：禽流感病毒;膠體金試紙;血凝抑制;抗體檢測

中圖分類號：S859 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.18.008

0 引言

禽流感（Avian influenza，AI）是由正黏病毒科（Orthomyxouiridae）A型流感病毒屬中不同亞型病毒引起的禽類感染疫病的總稱，禽流感病毒（AIV）為單股負(fù)鏈RNA病毒，基因組有8個獨(dú)立的RNA節(jié)段組成，根據(jù)其表面血清素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的抗原性差異，可分為HA亞型和9個NA亞型，AIV抗原變異性強(qiáng)，宿主范圍廣泛，且亞型間無交叉保護(hù)性，使得禽流感頻繁暴發(fā)[1]。高致病性禽流感主要是由H5或H7亞型AIV引起的，潛伏期極短，突然暴發(fā)，多不見任何臨床癥狀而突然死亡，發(fā)病率和病死率高達(dá)100%，另外還可感染人，甚至導(dǎo)致死亡。目前湖北地區(qū)所有飼養(yǎng)的家禽和特種禽類都要求接種“重組禽流感病毒H5+H7三價滅活疫苗”，武穴市蛋禽肉禽接種“重組禽流感病毒H5+H7三價滅活疫苗”達(dá)到100%，并且要求所有銷售和外調(diào)的禽類做禽流感抗體抽檢，數(shù)量大，任務(wù)重，膠體金試紙檢測是一種很好的替代檢測方法[2]。

畜禽生產(chǎn)和動物檢疫中常要進(jìn)行禽流感抗體檢測，常用的檢測方法主要有膠體金試紙條、血凝和血凝抑制試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等，每種方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)[3]。血凝抑制試驗是禽流感抗體檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，膠體金試紙條的操作方便快速[4]。試驗主要通過對比禽流感病毒H7亞型抗體膠體金試紙條與血凝抑制試驗的檢測結(jié)果，分析膠體金試紙條檢測的性能特點(diǎn)。

1 材料與方法

（1）紅細(xì)胞新鮮制備。標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清和禽流感病毒H7亞型（Re-2株）血凝抑制試驗抗原由青島易邦生物工程有限公司制備，批號190216501。

（2）膠體金試紙條。商品名為禽流感病毒H7亞型抗體檢測卡，由深圳市康百得生物科技有限公司提供，批號20190515。

（3）血凝抑制試驗（HI）。按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）及血凝抑制試驗抗原與陰、陽性血清說明書進(jìn)行結(jié)果判定：以完全抑制4個HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。只有陰性對照孔血清滴度不大于2log2，陽性對照孔血清誤差不超過1滴度，試驗結(jié)果才有效。HI價小于或等于3log2判定HI試驗陰性;HI等于4log2為可疑，需重復(fù)試驗（可疑樣品應(yīng)重檢，重檢效價大于或等于4log2判為陽性，小于或等于3log2判為陰性）;HI價大于或等于5log2為陽性。

（4）膠體金試紙條檢測。按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行，取血清樣品20μL加入加樣孔，等待5min，取20μL稀釋液加入加樣孔，等待10～15min判斷結(jié)果。陽性：只有對照（C）線區(qū)出現(xiàn)一條紅色線;陰性：檢測（T）線區(qū)及對照（C）線區(qū)同時出現(xiàn)紅色線;無效：對照（C）線區(qū)不出現(xiàn)紅色線。

（5）試驗同時對480份血清樣品（15個雞場和1個鴨場，每場30份），進(jìn)行血凝抑制試驗和膠體金試紙條檢測，對結(jié)果進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

其中血凝抑制試驗的陽性率為82.29%（395/480），膠體金試紙條的陽性率為82.50%（396/480），總符合率為93.54%（449/480）。見表1。

按照配對資料的卡方檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，P值大于0.05，可認(rèn)為膠體金試紙條與血凝抑制試驗的陽性檢出率沒有顯著性差異，即2種方法檢測性能一致。同時進(jìn)行一致性檢驗，求得Kappa值為0.78，說明2種方法的一致性良好。

3 討論

3.1 準(zhǔn)確性

研究檢測480份禽類樣本，膠體金試紙條與血凝抑制試驗的檢出陽性率接近，分別為82.50%和82.29%，總符合率達(dá)到93.54%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析2種方法檢出率無顯著性差異，這說明膠體金試紙條性能準(zhǔn)確可靠。各養(yǎng)殖場的檢測結(jié)果顯示，2種方法檢測檢測結(jié)果一致，表明膠體金試紙條具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。Kappa值為0.78，也進(jìn)一步提示膠體金試紙條與血凝試驗方法一致性良好。

在日常檢測中，發(fā)現(xiàn)試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性受廠家生產(chǎn)技術(shù)影響較大，各批次產(chǎn)品之間也存在較大差異，需要在不同批次產(chǎn)品進(jìn)行準(zhǔn)確性驗證。通過檢出率和一致性的統(tǒng)計學(xué)分析比較，可以準(zhǔn)確、客觀地反映產(chǎn)品的性能情況。

3.2 特點(diǎn)比較

2種方法具有各自的優(yōu)缺點(diǎn)見表2，但其優(yōu)勢可以互補(bǔ)。在實際生產(chǎn)和工作中如能合理利用，可充分發(fā)揮各自優(yōu)勢，彌補(bǔ)不足。

3.3 實用性

血凝抑制試驗適用于檢疫和實驗室檢測，對操作技術(shù)和環(huán)境的要求較高，還需要新鮮健康公雞血，但該方法為金標(biāo)準(zhǔn)方法[5]。

膠體金試紙條適用于養(yǎng)殖場對禽流感病毒抗體水平的現(xiàn)場快速評估，評價群體對疫病的抵抗能力，指導(dǎo)疫苗免疫，具有很好的生產(chǎn)指導(dǎo)意義[6]。

4 結(jié)束語

研究分析了禽流感病毒H7亞型抗體膠體金試紙條與傳統(tǒng)的血凝抑制試驗的性能特點(diǎn)，結(jié)果提示了膠體金試紙條的性能可靠穩(wěn)定，可以作為禽流感防控的新型檢測與監(jiān)測工具。

參考文獻(xiàn)

[1]侯俊林，祁連弟，王鳳梅，等.統(tǒng)籌城鄉(xiāng)職業(yè)教育協(xié)調(diào)發(fā)展中新型職業(yè)農(nóng)民培養(yǎng)模式的研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)，2018（6）：112。

[2]李宗華.禽流感的分析診斷和防控措施[J].飼料博覽，2019（8）：62.

[3]瑪莎·穆漢.禽流感特點(diǎn)及防控措施探討[J].畜禽業(yè)，2019，30（8）：107.

[4]黃凱慧.禽流感的綜合防控措施[J].中國畜禽種業(yè)，2019，15（7）：187.

[5]田啟會.某地區(qū)養(yǎng)殖戶家禽禽流感的實驗室診斷[J].國外畜牧學(xué)（豬與禽），2019，39（6）：58-59.

[6]吳峰，盧奕良，呂琦，等.禽流感病毒H7亞型快速檢測方法建立及應(yīng)用[J].云南大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2019，41（S1）：103-107.

作者簡介：田繼承（1978-），男，湖北武穴人，本科，獸醫(yī)師，研究方向：畜牧獸醫(yī)實驗室檢測。