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        膠體金試紙條及血凝抑制試驗檢測禽流感病毒H7亞型抗體比較分析

        2019-09-10 07:22:44田繼承林群朱利俊張錦國朱智
        畜牧獸醫(yī)科學(xué) 2019年18期

        田繼承 林群 朱利俊 張錦國 朱智

        摘要:試驗采用膠體金試紙條和血凝抑制試驗同時對480份雞、鴨血清樣品進(jìn)行檢測,對比分析2種方法的性能和特點(diǎn)。結(jié)果表明,試驗采用的禽流感病毒H7亞型抗體膠體金試紙條具有性能穩(wěn)定可靠、方法簡便快速等優(yōu)點(diǎn),廣泛適合用于禽流感病毒(H7亞型)抗體的現(xiàn)場快速檢測。

        關(guān)鍵詞:禽流感病毒;膠體金試紙;血凝抑制;抗體檢測

        中圖分類號:S859 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B doi:10.3969/j.issn.2096-3637.2019.18.008

        0 引言

        禽流感(Avian influenza,AI)是由正黏病毒科(Orthomyxouiridae)A型流感病毒屬中不同亞型病毒引起的禽類感染疫病的總稱,禽流感病毒(AIV)為單股負(fù)鏈RNA病毒,基因組有8個獨(dú)立的RNA節(jié)段組成,根據(jù)其表面血清素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的抗原性差異,可分為HA亞型和9個NA亞型,AIV抗原變異性強(qiáng),宿主范圍廣泛,且亞型間無交叉保護(hù)性,使得禽流感頻繁暴發(fā)[1]。高致病性禽流感主要是由H5或H7亞型AIV引起的,潛伏期極短,突然暴發(fā),多不見任何臨床癥狀而突然死亡,發(fā)病率和病死率高達(dá)100%,另外還可感染人,甚至導(dǎo)致死亡。目前湖北地區(qū)所有飼養(yǎng)的家禽和特種禽類都要求接種“重組禽流感病毒H5+H7三價滅活疫苗”,武穴市蛋禽肉禽接種“重組禽流感病毒H5+H7三價滅活疫苗”達(dá)到100%,并且要求所有銷售和外調(diào)的禽類做禽流感抗體抽檢,數(shù)量大,任務(wù)重,膠體金試紙檢測是一種很好的替代檢測方法[2]。

        畜禽生產(chǎn)和動物檢疫中常要進(jìn)行禽流感抗體檢測,常用的檢測方法主要有膠體金試紙條、血凝和血凝抑制試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等,每種方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)[3]。血凝抑制試驗是禽流感抗體檢測的金標(biāo)準(zhǔn),膠體金試紙條的操作方便快速[4]。試驗主要通過對比禽流感病毒H7亞型抗體膠體金試紙條與血凝抑制試驗的檢測結(jié)果,分析膠體金試紙條檢測的性能特點(diǎn)。

        1 材料與方法

        (1)紅細(xì)胞新鮮制備。標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、標(biāo)準(zhǔn)陰性血清和禽流感病毒H7亞型(Re-2株)血凝抑制試驗抗原由青島易邦生物工程有限公司制備,批號190216501。

        (2)膠體金試紙條。商品名為禽流感病毒H7亞型抗體檢測卡,由深圳市康百得生物科技有限公司提供,批號20190515。

        (3)血凝抑制試驗(HI)。按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)及血凝抑制試驗抗原與陰、陽性血清說明書進(jìn)行結(jié)果判定:以完全抑制4個HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。只有陰性對照孔血清滴度不大于2log2,陽性對照孔血清誤差不超過1滴度,試驗結(jié)果才有效。HI價小于或等于3log2判定HI試驗陰性;HI等于4log2為可疑,需重復(fù)試驗(可疑樣品應(yīng)重檢,重檢效價大于或等于4log2判為陽性,小于或等于3log2判為陰性);HI價大于或等于5log2為陽性。

        (4)膠體金試紙條檢測。按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行,取血清樣品20μL加入加樣孔,等待5min,取20μL稀釋液加入加樣孔,等待10~15min判斷結(jié)果。陽性:只有對照(C)線區(qū)出現(xiàn)一條紅色線;陰性:檢測(T)線區(qū)及對照(C)線區(qū)同時出現(xiàn)紅色線;無效:對照(C)線區(qū)不出現(xiàn)紅色線。

        (5)試驗同時對480份血清樣品(15個雞場和1個鴨場,每場30份),進(jìn)行血凝抑制試驗和膠體金試紙條檢測,對結(jié)果進(jìn)行分析。

        2 結(jié)果

        其中血凝抑制試驗的陽性率為82.29%(395/480),膠體金試紙條的陽性率為82.50%(396/480),總符合率為93.54%(449/480)。見表1。

        按照配對資料的卡方檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,P值大于0.05,可認(rèn)為膠體金試紙條與血凝抑制試驗的陽性檢出率沒有顯著性差異,即2種方法檢測性能一致。同時進(jìn)行一致性檢驗,求得Kappa值為0.78,說明2種方法的一致性良好。

        3 討論

        3.1 準(zhǔn)確性

        研究檢測480份禽類樣本,膠體金試紙條與血凝抑制試驗的檢出陽性率接近,分別為82.50%和82.29%,總符合率達(dá)到93.54%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析2種方法檢出率無顯著性差異,這說明膠體金試紙條性能準(zhǔn)確可靠。各養(yǎng)殖場的檢測結(jié)果顯示,2種方法檢測檢測結(jié)果一致,表明膠體金試紙條具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。Kappa值為0.78,也進(jìn)一步提示膠體金試紙條與血凝試驗方法一致性良好。

        在日常檢測中,發(fā)現(xiàn)試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性受廠家生產(chǎn)技術(shù)影響較大,各批次產(chǎn)品之間也存在較大差異,需要在不同批次產(chǎn)品進(jìn)行準(zhǔn)確性驗證。通過檢出率和一致性的統(tǒng)計學(xué)分析比較,可以準(zhǔn)確、客觀地反映產(chǎn)品的性能情況。

        3.2 特點(diǎn)比較

        2種方法具有各自的優(yōu)缺點(diǎn)見表2,但其優(yōu)勢可以互補(bǔ)。在實際生產(chǎn)和工作中如能合理利用,可充分發(fā)揮各自優(yōu)勢,彌補(bǔ)不足。

        3.3 實用性

        血凝抑制試驗適用于檢疫和實驗室檢測,對操作技術(shù)和環(huán)境的要求較高,還需要新鮮健康公雞血,但該方法為金標(biāo)準(zhǔn)方法[5]。

        膠體金試紙條適用于養(yǎng)殖場對禽流感病毒抗體水平的現(xiàn)場快速評估,評價群體對疫病的抵抗能力,指導(dǎo)疫苗免疫,具有很好的生產(chǎn)指導(dǎo)意義[6]。

        4 結(jié)束語

        研究分析了禽流感病毒H7亞型抗體膠體金試紙條與傳統(tǒng)的血凝抑制試驗的性能特點(diǎn),結(jié)果提示了膠體金試紙條的性能可靠穩(wěn)定,可以作為禽流感防控的新型檢測與監(jiān)測工具。

        參考文獻(xiàn)

        [1]侯俊林,祁連弟,王鳳梅,等.統(tǒng)籌城鄉(xiāng)職業(yè)教育協(xié)調(diào)發(fā)展中新型職業(yè)農(nóng)民培養(yǎng)模式的研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè),2018(6):112。

        [2]李宗華.禽流感的分析診斷和防控措施[J].飼料博覽,2019(8):62.

        [3]瑪莎·穆漢.禽流感特點(diǎn)及防控措施探討[J].畜禽業(yè),2019,30(8):107.

        [4]黃凱慧.禽流感的綜合防控措施[J].中國畜禽種業(yè),2019,15(7):187.

        [5]田啟會.某地區(qū)養(yǎng)殖戶家禽禽流感的實驗室診斷[J].國外畜牧學(xué)(豬與禽),2019,39(6):58-59.

        [6]吳峰,盧奕良,呂琦,等.禽流感病毒H7亞型快速檢測方法建立及應(yīng)用[J].云南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2019,41(S1):103-107.

        作者簡介:田繼承(1978-),男,湖北武穴人,本科,獸醫(yī)師,研究方向:畜牧獸醫(yī)實驗室檢測。

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