朱臻怡，魏云計，馮民，何健，何正和，秦嫻

［淮安出入境檢驗檢疫局，國家飼料安全檢測重點實驗室(淮安)，江蘇淮安 223001］

飼料中常見的獸藥及其檢測技術(shù)*

朱臻怡，魏云計，馮民，何健，何正和，秦嫻

［淮安出入境檢驗檢疫局，國家飼料安全檢測重點實驗室(淮安)，江蘇淮安 223001］

根據(jù)治療、預(yù)防疾病和促進動物生長的需要，獸藥在飼料中得到廣泛應(yīng)用。闡述了飼料中常見獸藥種類及其化學(xué)特性，獸藥在飼料中的應(yīng)用情況及其對人體的危害性。對飼料中獸藥的檢測技術(shù)及其進展進行了簡要介紹。

飼料；獸藥；應(yīng)用；危害；檢測技術(shù)

獸藥是指用于預(yù)防、治療和診斷動物疾病或者有目的地調(diào)節(jié)動物生理機能的物質(zhì)(含藥物飼料添加劑)。動物養(yǎng)殖過程中,不合理使用飼料且不遵守食品衛(wèi)生法規(guī)和休眠期規(guī)定而任意宰殺銷售會造成獸藥在動物性產(chǎn)品中的殘留［1］。一般來說，動物性食品中殘留的獸藥對人體并不直接表現(xiàn)為急毒性作用，但長期攝入低劑量殘留獸藥的食品，可致慢毒性作用，還有可能產(chǎn)生耐藥性問題［2］。美國、歐盟等相繼頒布了一系列法規(guī)，規(guī)定禁止在飼料中使用獸藥或明確規(guī)定其添加量?！帮暳习踩扔谑称钒踩钡挠^念已形成共識，食品安全已經(jīng)成為影響農(nóng)業(yè)和食品工業(yè)競爭力的關(guān)鍵因素，并在某種程度上制約我國農(nóng)業(yè)和農(nóng)村經(jīng)濟產(chǎn)品結(jié)構(gòu)和產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的戰(zhàn)略性調(diào)整，制約我國農(nóng)產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯能力及加入WTO后的國際競爭力［3］。保證食品安全應(yīng)從源頭抓起，因此隨著國內(nèi)外對獸藥殘留引發(fā)的食品安全問題的重視和國際貿(mào)易的深入，解決飼料工業(yè)中違規(guī)操作和掌控食品中獸藥殘留問題，飼料和食品企業(yè)及檢測部門工作人員需要及時了解飼料獸藥的相關(guān)信息及適合的檢測技術(shù)。筆者就飼料中常見的獸藥種類、使用情況及其檢測技術(shù)的研究進展進行了介紹。

1 獸藥在飼料中的應(yīng)用及危害

在畜牧業(yè)發(fā)展初期，防治動物疾病、減少動物死亡是獸藥使用的第一要義，因此在獸藥使用上不管危害、只要療效；當(dāng)前，既要使用獸藥防病促生長、又要控制藥殘和藥費，因此高效、低毒、低殘留是獸藥的發(fā)展方向；未來隨著動物傳染病的減少，使用無毒、無藥殘的獸藥成為研究發(fā)展新方向。

我國于2001年7月發(fā)布的《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》(農(nóng)牧發(fā)【2001】20號)對飼料中藥物添加劑的使用做出了明確規(guī)定，其中可在飼料中長期添加使用的、具有預(yù)防動物疾病促進動物生長的獸藥共33種［4］。

1.1 飼料中獸藥的分類及使用

飼料中的獸藥按其成分的組成及來源大致可分為5類：一是來自植物的藥物，如稱為生物堿的含氮堿性有機物、各種有機酸、可被烯酸或酶類水解的化合物、揮發(fā)油、單寧酸與氨基酸等；二是來自動物的藥物，其采用某些動物的器官組織入藥，或以動物的某些分泌物、排泄物與體液入藥，其中不少含有氨基酸、消化酶或激素的成分；三是來自礦物的藥物，主要成分為各種礦物元素，如廣泛應(yīng)用的石膏、硫磺、氯化鈉、芒硝(硫酸鈉)等；四是化學(xué)合成藥物，如各種磺胺類藥物、呋喃類藥物、抗菌增效劑、某些維生素類和激素類藥物等，分別用于抗菌、消炎和調(diào)節(jié)某些生理機能等；五是通過某些微生物的培養(yǎng)獲取的物質(zhì)，如各種抗生素。

農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》規(guī)定允許使用的飼料藥物添加劑分為兩大類：一類是具有預(yù)防動物疾病、促進動物生長作用、可在飼料中長時間添加使用的飼料藥物添加劑，使用此類添加劑時不得超范圍(使用對象、期限)、超劑量使用；另一類是用于治療動物疾病并規(guī)定療程，通過混飼給藥的藥物飼料添加劑［5］。

1.2 常用的飼料獸藥

1.2.1 磺胺類藥物

磺胺類藥物為具有對氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類藥物的總稱，可用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病。畜牧養(yǎng)殖業(yè)中作為飼料添加劑廣泛應(yīng)用的是磺胺間甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺二甲基嘧啶(SDMD)和磺胺甲基異噁唑(SMZ)等。有研究表明，長期攝入含磺胺類藥物的動物食品可能會引起人體腎損害，還可能使易感個體出現(xiàn)過敏反應(yīng)，并具有一定的致癌性。繼瘦肉精之后，農(nóng)業(yè)部將畜產(chǎn)品中的磺胺類藥物作為下一個予以監(jiān)控的重點［6］。

1.2.2 硝基呋喃類藥物

硝基呋喃類藥物是人工合成的具有5-硝基呋喃基本結(jié)構(gòu)的廣譜抗菌藥物，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌、真菌和原蟲等病原體均有殺滅作用。常見的硝基呋喃類藥物有以下4種：呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林。因其價格較低且效果好，硝基呋喃類藥物被廣泛用于家禽、家畜、水產(chǎn)、蜂等動物傳染病的預(yù)防與治療，部分品種作為飼料添加劑還具有促生長的作用［7］。由于硝基呋喃類藥物及其代謝物對人體有致癌、致畸胎副作用，個別國家已經(jīng)禁止其在畜禽及水產(chǎn)動物食品中使用。農(nóng)業(yè)部于2002年12月24日發(fā)布的第235號公告及于2005年10月28日發(fā)布的第560號公告中，硝基呋喃類藥物均都被列為在飼養(yǎng)過程中禁止使用的藥物之一。

1.2.3 大環(huán)內(nèi)酯類藥物

大環(huán)內(nèi)酯類藥物是由鏈霉菌產(chǎn)生的弱堿性抗菌素，屬于生長期抑制劑。紅霉素是該類藥物最典型的代表，近年來的主要品種為羅紅霉素、螺旋霉素、柱晶白霉素、麥迪霉素、交沙霉素和竹桃霉素等。在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中，大環(huán)內(nèi)酯類藥物不僅作為治療藥物被廣泛使用，而且為提高經(jīng)濟效益，其還普遍作為促生長劑和預(yù)防用藥。動物長期食用后，在組織及器官內(nèi)蓄積達到一定濃度時會造成肝腎的損害，高殘留還會對人類造成致敏性和毒性反應(yīng)，改變?nèi)梭w腸道菌群的微生態(tài)環(huán)境，造成人體腸道菌群失調(diào)，同時易產(chǎn)生細(xì)菌抗藥性。

1.2.4 四環(huán)素類藥物

四環(huán)素類藥物是由放線菌產(chǎn)生的一類廣譜抗生素，包括金霉素、土霉素、四環(huán)素及半合成衍生物甲烯土霉素、強力霉素、二甲胺基四環(huán)素等。該類藥物是具有抑菌作用并在極高濃度時有殺菌作用的一大類半合成廣譜抗生素，其抗菌譜廣，可以用作獸藥、消毒劑、保鮮劑和添加劑，用于防治腸道感染和促進生長，但容易誘發(fā)耐藥菌株和導(dǎo)致食品殘留。鑒于其積蓄到一定濃度會抑制人體骨骼造血功能，引起再生性貧血及腸道菌群失調(diào)，抑制抗體的形成［8］等，四環(huán)素類藥物在許多國家已經(jīng)禁止使用，對動物養(yǎng)殖中飼用的四環(huán)素類的用量及其在食品中的殘留，許多國家都進行了嚴(yán)格的監(jiān)控。

1.2.5 喹諾酮類藥物

喹諾酮類(又稱吡酮酸類或吡啶酮酸類)是人工合成的含4-喹諾酮基本結(jié)構(gòu)的抗菌藥。1979 年合成諾氟沙星，隨后又合成一系列含氟的氟喹諾酮類藥物。喹諾酮類藥物分為四代，目前應(yīng)用較多的為第三代。常用藥物有諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、氟羅沙星等。此類藥物廣泛用于泌尿生殖系統(tǒng)疾病、胃腸疾病，以及呼吸道、皮膚組織的革蘭陰性細(xì)菌感染的治療。喹諾酮類抗生素是一類人畜通用的藥物，其在人體內(nèi)的殘留、蓄積會造成人體對該藥物的嚴(yán)重耐藥性，影響人體疾病的治療。美國FDA于2005年宣布禁止用于治療家禽細(xì)菌感染的抗菌藥物恩諾沙星的銷售和使用。

1.2.6 氯霉素類抗生素

氯霉素類抗生素是一種由委內(nèi)瑞拉鏈霉菌中分離提取的廣譜抗生素，常常被添加到飼料中以治療和預(yù)防動物傳染性疾病。氯霉素類抗生素主要有氯霉素、甲砜霉素及氟甲砜霉素等。由于其易在動物機體和人體中蓄積，可能引起嚴(yán)重的毒副作用，對人類的毒性較大，甚或有抑制骨髓造血機能的潛在威脅，歐盟、美國和中國等國家和地區(qū)均已將氯霉素列為禁用藥。

1.2.7 β-興奮劑類藥物

β-興奮劑是一類人工合成藥物，這類藥物能增強脂解、減慢蛋白質(zhì)分解代謝，從而促進肌肉組織生長，降低酮體脂肪含量，畜牧生產(chǎn)中大劑量使用可明顯提高飼料轉(zhuǎn)化率、瘦肉率和增質(zhì)量，被作為一種新型藥物促生產(chǎn)添加劑廣泛使用，這一類藥物俗稱“瘦肉精”［9］。目前使用最廣泛的藥物是克侖特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇，近年來如溴布特羅、西布特羅、馬布特羅和特布他林也開始被用于促生長。β-興奮劑對人和動物的肝臟、腎臟等內(nèi)臟器官具有嚴(yán)重的毒副作用，隨著瘦肉精在肉品中的殘留引發(fā)中毒事件不斷發(fā)生，動物飼養(yǎng)中違法添加β-興奮劑已成為制約我國畜牧業(yè)健康發(fā)展和進出口貿(mào)易的重大瓶頸，因此我國已嚴(yán)禁在畜牧業(yè)生產(chǎn)中使用各種β-興奮劑類藥物。

1.2.8 硝基咪唑類藥物

硝基咪唑類化合物對厭氧菌及原蟲有獨特的殺滅作用，是畜禽飼料中常用的抗原蟲感染及抗菌藥，并具有促生長作用。畜禽常用的有甲硝唑、地美硝唑、替硝唑和奧硝唑等。硝基咪唑類藥物及其某些代謝物對哺乳動物具有致癌、致畸、致突變后果，并有遺傳毒性，因此各國對該類化合物的使用均有嚴(yán)格限制。歐盟禁止在飼料中投放地美硝唑作為添加劑，我國也對硝基咪唑類藥物進行嚴(yán)格控制，農(nóng)牧發(fā)【2002】1號文件中規(guī)定了在食品動物中禁用地美硝唑和甲硝唑。

1.2.9 頭孢菌素類藥物

頭孢菌素類藥物是一系列分子中含有頭孢烯的半合成抗生素，屬于β–內(nèi)酰胺類抗生素。該類藥物抗菌譜廣，對厭氧菌有高效，引起的過敏反應(yīng)較青霉素類低。目前常用的頭孢菌素類藥物約有30種，按其發(fā)明年代的先后和抗菌性能的不同而分為四代，有頭孢拉定、頭孢氨芐、頭孢羥氨芐、頭孢克洛、頭孢噻呋等。2012年，旨在解決抗生素耐藥性，美國FDA頒布規(guī)定，禁止在家畜飼料中使用頭孢菌素類抗生素，以保證頭孢菌素類藥物對人類的安全性。

1.2.10 氨基糖苷類藥物

氨基糖苷類抗生素是從放線桿菌中提取得來的，該類藥物具有廣譜抗菌性，能夠抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，通常為預(yù)防疾病和促進家畜的生長而被加到飼料中，最常用的有慶大霉素、新霉素、鏈霉素和二氫鏈霉素等。氨基糖苷類藥物最顯著的副作用是有腎毒性和耳毒性，美國FDA對動物源性食品中氨基糖苷類獸藥殘留極為關(guān)注，歐盟則明確規(guī)定禁止使用其作為家畜的生長促進劑。

1.2.11 糖皮質(zhì)激素類藥物

糖皮質(zhì)激素又名腎上腺皮質(zhì)激素，是由腎上腺皮質(zhì)分泌的一類甾體激素，也可人工合成，又被稱為皮質(zhì)類固醇，具有調(diào)節(jié)糖、脂肪和蛋白質(zhì)的生物合成和代謝的作用，還具有抑制免疫應(yīng)答、抗炎、抗毒和抗休克作用。常用的糖皮質(zhì)激素類藥物有氫化可的松、地塞米松、倍他米松、氟輕松等，其常見的非法用途是用于增加家畜的飼料攝入量從而使其達到增重和產(chǎn)生脂肪再分配作用的目的。作為生長促進劑，糖皮質(zhì)激素類藥物已被各國禁用，歐盟還規(guī)定了動物食品中地塞米松、倍他米松、甲基波尼松龍等的最大殘留限量。

1.2.12 其它藥物

林可胺類抗生素是由方向桿菌或小單孢菌產(chǎn)生的一類抗生素，常見的有林可霉素和克林霉素。林可胺類藥物用作飼料添加劑能促生長，提高飼料利用率，但其毒副作用較大，許多國家規(guī)定其只作為速效抑制細(xì)菌生長劑的治療用藥，而不準(zhǔn)作為飼料添加劑長期使用。多肽類抗生素是從多粘桿菌或產(chǎn)氣孢子桿菌的培養(yǎng)液中提取制得的一類具有復(fù)雜多肽結(jié)構(gòu)的化學(xué)物質(zhì)，包括多粘菌素類(多粘菌素B、多粘菌素E)、桿菌肽類(桿菌肽、短桿菌肽)和萬古霉素類。多肽類抗生素抗菌作用強，抗菌譜窄，具有獨特的抗菌作用，但大多毒性很大，容易引起神經(jīng)毒性及腎毒性，可直接或間接地通過環(huán)境和食物鏈對人體產(chǎn)生一定的毒副作用。性激素是指由動物體的性腺以及胎盤、腎上腺皮質(zhì)網(wǎng)狀帶等組織合成的甾體激素，具有促進性器官成熟、副性征發(fā)育及維持性功能等作用。在養(yǎng)殖業(yè)中使用比較多的性激素主要有雄激素、雌激素和孕激素，可提高生產(chǎn)效率、改善產(chǎn)品性狀，促進動物生長，提高飼料轉(zhuǎn)化率等。動物體內(nèi)殘留的性激素影響人體內(nèi)的正常激素功能，長期攝入性激素會導(dǎo)致機體代謝紊亂，兒童早熟，兒童異性趨向，發(fā)育異?；蚰[瘤。

1.3 獸藥殘留對人體的危害

藥物殘留通過食物鏈的方式在動物體內(nèi)蓄積，并通過畜禽產(chǎn)品直接蓄積于人體或通過環(huán)境釋放蓄積到其它植物中，并最終以各種途徑匯集于人體。獸藥及其代謝產(chǎn)物通過動物糞便、尿液等進入環(huán)境，由于其仍具有生物活性，對周圍環(huán)境的潛在毒性會對土壤微生物、水生生物及昆蟲等造成影響。同時，進入環(huán)境中的獸藥殘留被動植物富集后進入食物鏈，也會危害人類健康。

2 飼料中獸藥的檢測技術(shù)及其研究進展

2.1 飼料中獸藥的檢測

為了加強飼料安全管理，對飼料中獸藥的檢測一直是食品及飼料工作者研究的熱點問題。同時，現(xiàn)代食品、飼料安全對檢測技術(shù)方法要求越來越高，在傳統(tǒng)的檢測方法基礎(chǔ)上，有關(guān)獸藥分析檢測技術(shù)與方法已不斷取得新的進展。

2.1.1 分光光度法

分光光度法是一種常用的分析手段，在一般實驗室非常容易實行。牛純青［10］等采用該方法對飼料預(yù)混劑中的泰樂菌素含量進行了測定，其質(zhì)量濃度在5.0～50 μg／mL的范圍內(nèi)與吸光度具有良好的線性關(guān)系。分光光度法的適用范圍限制較多，僅能檢測部分簡單飼料基質(zhì)中的少數(shù)幾種獸藥，如用于測定飼料預(yù)混劑中環(huán)丙沙星和青霉素［11］。分光光度法測定獸藥雖儀器簡單，但操作程序繁瑣，樣品基質(zhì)局限性大，測定精度稍差，不能同時測定多種獸藥。

2.1.2 微生物學(xué)法

對于多組分發(fā)酵抗生素的含量測定，國際上通常采用微生物學(xué)效價方法--管碟法［12］。管碟法抗生素效價測量是以抗生素對微生物的抗菌效力作為效價的衡量標(biāo)準(zhǔn)，具有與應(yīng)用原理相一致、用量少和靈敏度高等優(yōu)點。作為瓊脂擴散法中的一種，管碟法已被各國藥典廣泛采用，作為法定的抗生素生物檢定方法。顧欣等［13］采用該方法對飼料中的恩拉霉素含量進行了測定，最低定量限為0.5 mg／kg。美國AOAC采用此法檢測飼料中桿菌肽、金霉素、新霉素、泰樂菌素等藥物含量，我國飼料中吉他霉素、鹽霉素、林可霉素等測定方法的國家標(biāo)準(zhǔn)也采用此法。盡管其具有種種檢測優(yōu)點，但是整個試驗過程中任何一個環(huán)節(jié)操作不當(dāng)或者忽略操作細(xì)節(jié)都會造成誤差，導(dǎo)致整組試驗失敗，因此不利于大范圍推廣應(yīng)用。

2.1.3 薄層色譜法

薄層色譜法用以檢測飼料中的獸藥由來已久，雖然只能粗略定量，但所用設(shè)備簡單、檢測成本低，便于實施。其優(yōu)點是可在短時間內(nèi)處理大批樣品，溶劑用量少。韓鳳麗［14］等利用此法測定了飼料中的磺胺類藥物，檢出限為0.05 μg／mL，回收率約為60%。王小鶯［15］等用該方法檢測飼料中的恩拉霉素，取得了很好的結(jié)果。但是這種方法操作比較繁瑣，作為定量方法不夠準(zhǔn)確，僅可作為定性篩選方法。

2.1.4 免疫分析法

免疫分析法是利用抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)而建立的一種生物化學(xué)分析法，通常具有高選擇性和低檢出限，廣泛應(yīng)用于各種抗原、半抗或抗體的測定，一般可分為熒光免疫法、發(fā)光免疫法、免疫法及電化學(xué)免疫法等非放射免疫法和放射免疫法［16］。在飼料獸藥檢測中應(yīng)用較廣的主要是酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和膠體金免疫層析方法。ELISA法特別適宜大批樣品集中檢測，膠體金免疫層析法適合現(xiàn)場單個或少數(shù)樣品即時檢測［17］。桑永玉［18］等用ELISA分析方法測定了飼料中的喹乙醇，最低檢測限IC20為5.36 ng／mL，平均回收率為70.7%～134.6%。目前常見的鹽酸克倫特羅、磺胺類、四環(huán)素類和氯霉素類等藥物均有商品化ELISA試劑盒，由于該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，可定量，操作簡便，無需貴重儀器設(shè)備，且對樣品純度要求不高，在食品和飼料檢測中被廣為應(yīng)用。

2.1.5 氣相色譜法和氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜法是一個分析速度快和分離效率高的分離分析方法，雖然在檢測獸藥時存在涉及試劑繁多、操作過程復(fù)雜、檢測成本高等問題，但因其檢測靈敏度、精密度高、檢出限低、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點，我國國家標(biāo)準(zhǔn)也有采用此法檢測氯霉素等，如GB／T 8381.9–2005，方法最低檢出限為0.005 mg／kg［19］，能滿足日常檢測需求。氣相色譜–質(zhì)譜聯(lián)用法主要采用電子轟擊源和負(fù)離子化學(xué)源，靈敏度高，能對藥物做準(zhǔn)確的定性分析。林小莉［20］等用乙醚提取樣品，經(jīng)HLB固相萃取柱凈化，衍生化后用氣相色譜–質(zhì)譜法測定了飼料中6種雌激素類藥物，檢出限為3～8 μg／kg，平均加標(biāo)回收率為75.9%～96.3%。王培龍［21］等用氣相色譜–質(zhì)譜法定性和定量分析了配合飼料中的6種利尿劑，方法的定量限為0.5 μg／g。

此外，全二維氣相色譜／飛行時間質(zhì)譜法(GC×GC–TOFMS)是一種快速定性篩查的手段，采用GC×GC二維特征譜圖、TOFMS譜圖庫檢索的定性手段，可在短時間內(nèi)快速分離和定性分析飼料中多種獸藥。GC×GC–TOFMS提高了色譜分離能力，應(yīng)用于復(fù)雜基質(zhì)背景下化合物的高通量快速分析取得較好的研究結(jié)果［22］。

2.1.6 高效毛細(xì)管電泳法

高效毛細(xì)管電泳是近年來發(fā)展起來的新技術(shù)，該法以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細(xì)管為分離通道，依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離分析的液相分離方法。它沒有高壓泵，不受運行緩沖液的酸、堿性和其中的表面活性劑等添加劑的影響，具有溶劑和試樣消耗少、分離速度快、分離效率高、適用范圍廣、選擇性強等優(yōu)點。蔡春平［23］等利用此法對飼料中的鹽酸克侖特羅和沙丁胺醇進行檢測，最低檢出限為0.5 mg／kg，該法快速、準(zhǔn)確且低成本。陳紅青［24］也利用此方法對飼料中鹽酸克侖特羅和沙丁胺醇含量進行測定，方法的添加回收率為83.2%～94.5%，82.5%～93.7%，最低檢測限為0.02，0.03 μg／mL。

2.1.7 電化學(xué)分析法

電化學(xué)分析法是根據(jù)溶液中物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)及其變化規(guī)律，建立在以電位、電導(dǎo)、電流和電量等電學(xué)量與被測物質(zhì)某些量之間的計量關(guān)系的基礎(chǔ)之上，對組分進行定性和定量的儀器分析方法。由于其選擇性和靈敏度高、檢測快捷方便的特性，電化學(xué)分析技術(shù)在復(fù)雜體系中檢測微量化合物和生物活性成分方面應(yīng)用廣泛。張寅艷［25］等采用該方法對飼料中的6種磺胺類藥物進行了分離和測定，6個分析物能夠在16 min內(nèi)實現(xiàn)很好的基線分離，被測物濃度與峰電流在3個數(shù)量級呈良好的線性，檢出限范圍為0.08～0.20 μg／mL。王偉宇［26］等利用小型化毛細(xì)管電泳–電化學(xué)分析法測定了豬飼料中的β-興奮劑，檢測限為1.20×10–7～2.06×10–7g／mL，已成功應(yīng)用于食品安全分析檢測。研究表明，電化學(xué)分析法精密度高，檢測程序簡單，是實現(xiàn)快速、精確檢測的重要方法之一，應(yīng)用潛力巨大，甚至有國外學(xué)者認(rèn)為其可用來替代高效液相色譜法。

2.1.8 高效液相色譜法

高效液相色譜(HPLC)法在獸藥檢測領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用，具有檢測速度快、分辨率高、靈敏度高、進樣量少、容易回收等優(yōu)點，近幾年來制定的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)也大多采用HPLC法。目前HPLC法使用最多的檢測器主要有紫外光度檢測器、二極管陣列檢測器和熒光檢測器等，熒光檢測器靈敏度高于紫外檢測器，而二極管陣列檢測器可以提供更多的光譜信息，提高了檢測的可靠性。

紫外光度檢測器在應(yīng)用于獸藥的檢測時，其線性范圍寬，適用于梯度洗脫，靈敏度高，不受流速的影響，溫度對其影響小，不會損壞樣品。邸萬山［27］等采用三氯乙酸溶液提取，HLB固相萃取柱凈化，HPLC–紫外檢測器測定動物飼料中的鹽酸克倫特羅，加標(biāo)回收率為97.8%～99.2%，測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.13%(n=3)。

二極管陣列檢測器靈敏度高、噪音低、線性范圍寬，流速和溫度對其影響不大，適用于梯度洗脫。曹鵬［28］等用HPLC–二極管陣列檢測器同時測定飼料總的4種硝基呋喃類藥物，定量限為0.25～0.5 mg／kg，平均添加回收率均大于70%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。

熒光檢測器選擇性和靈敏度高。張素霞［29］等利用HPLC–熒光檢測器對飼料中的萊克多巴胺進行測定，方法的檢測限為0.48 μg／g，平均回收率為89.8%，變異系數(shù)為2.16%(n=6)。

2.1.9 液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜法

液相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜(LC–MS–MS)法能夠?qū)旌衔镞x擇性分析、分辨率高，適合化學(xué)穩(wěn)定性差的藥物檢測，而且可進行化合物結(jié)構(gòu)剖析和蛋白質(zhì)序列測定。近年來有大量文獻報道了LC–MS–MS法在測定飼料中氟喹諾酮類、β-受體激動劑、苯并咪唑類、磺胺類等多種獸藥殘留的應(yīng)用［30–37］，研究表明，該方法在定性方面具有良好表現(xiàn)，靈敏度更高，檢出限可達1×10–9級。液質(zhì)聯(lián)用法常常作為確證方法使用，但是儀器設(shè)備比較昂貴，檢測成本高，操作步驟復(fù)雜，目前國內(nèi)正在逐步普及，相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)方法也在進一步制定完善。

2.1.10 生物傳感器法

生物傳感器是一種由生物敏感部件與轉(zhuǎn)換器緊密結(jié)合、對特定的化學(xué)物質(zhì)或生物活性物質(zhì)具有選擇性和可逆性響應(yīng)的裝置，包括酶傳感器、組織傳感器、微生物傳感器等。與傳統(tǒng)的檢測方法相比，生物傳感器檢測技術(shù)具有選擇性好、靈敏度高、響應(yīng)快、易于操作、高通量及適合現(xiàn)場檢測等優(yōu)點［38］。生物傳感器法在國內(nèi)飼料分析領(lǐng)域的應(yīng)用還在探索階段之中，國外有報道英國食品環(huán)境研究院(FERA)研究可以用便攜式Vantix生物傳感器在飼養(yǎng)場快速檢測飼料中的抗生素，研究表明，應(yīng)用Vantix生物傳感器可以有效檢測多種違禁抗生素。

2.2 飼料獸藥檢測存在問題與研究進展

目前已知的獸藥品種繁多、應(yīng)用廣泛，隨著飼料獸藥使用的安全性受到越來越多的關(guān)注，其分析檢測方法研究發(fā)展非常迅速，但各種分析檢測方法靈敏度、精確度、檢測限、檢測程序繁簡程度等各不相同。針對不同實驗室具體儀器設(shè)備條件和分析檢測場合與目的不同，結(jié)合現(xiàn)代分析科學(xué)發(fā)展趨勢，如何準(zhǔn)確、快速測定飼料獸藥殘留對于評價動物源性食品質(zhì)量的安全性非常重要。

隨著設(shè)備的更新和研究的深入，對于飼料獸藥的檢測又涌現(xiàn)出很多新的方法，LC–MS–MS法已趨向研究及應(yīng)用的成熟階段，越來越被廣泛采用。近年來，毛細(xì)管電泳–質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)以其高分離效率也開始應(yīng)用在獸藥殘留分析領(lǐng)域，并引起了廣泛關(guān)注。激光誘導(dǎo)熒光檢測是毛細(xì)管電泳最靈敏的檢測技術(shù)之一［39］，在毛細(xì)管電泳免疫分析中應(yīng)用較多，對獸藥檢測有很廣闊的前景［40-41］。氣相色譜–串聯(lián)質(zhì)譜(GC–MS–MS)技術(shù)選擇性好，可有效避免雜質(zhì)干擾，靈敏度高，也逐漸進入獸藥檢測領(lǐng)域。在獸藥殘留分析樣品前處理環(huán)節(jié)，傳統(tǒng)的樣品前處理技術(shù)已逐步被一些新的樣品分離純化技術(shù)所取代，如固相萃取、固相微萃取、基質(zhì)分散固相萃取、免疫親和色譜技術(shù)、分子印跡技術(shù)、超臨界流體萃取等，以達到自動化處理、減少樣品量、特異性和選擇性好、環(huán)境友好等目的。黃怡［42］等報道了以萊克多巴胺為模板分子，建立的基于分子印跡固相萃取–高效液相色譜法測定飼料中萊克多巴胺的方法，檢出限達到0.1 mg／kg，平均回收率均大于80%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%(n=3)。研究表明，該方法用于復(fù)雜飼料基質(zhì)中萊克多巴胺檢測的效果優(yōu)于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)分析方法。

3 結(jié)論

我國飼料中獸藥的殘留分析總體上仍較為落后，相關(guān)的檢測標(biāo)準(zhǔn)方法還很不完善，目前飼料獸藥殘留分析檢測技術(shù)方面要解決的問題主要有下列三個方面：一是研究通過選擇合適的提取溶劑，簡化樣品前處理手段來簡化操作過程，縮短檢測時間，提高檢測效率；二是研究利用新技術(shù)、新手段來同時測定飼料中多種獸藥殘留；三是重點研究應(yīng)用潛力大、定性定量更準(zhǔn)確、檢測精度高但還沒有得到廣泛普及的分析方法。

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Application and Detection Techniques on Veterinary Drugs in Fodder

Zhu Zhenyi， Wei Yunji， Feng Min， He Jian， He Zhenghe， Qin Xian
［Huaian Entry–Exit Inspection and Quarantine Bureau， State Key Laboratory of Feed Safety Testing(Huaian)， Huaian 223001, China］

Veterinary drugs were widely used in fodder along with the need for treatment to prevent diseases and promote growth of animals. The familiar kinds and chemical properties of veterinary drugs，application of veterinary drugs in fodder and harmfulness of veterinary drugs to human body were expounded. The determination technique and research progress of veterinary drugs in fodder were introduced.

fodder; veterinary drugs; application; harmfulness; determination technique

O657.7

A

1008–6145(2016)06–0114–06

10.3969／j.issn.1008–6145.2016.06.028

*國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局科技計劃項目(2015IK131)

聯(lián)系人：朱臻怡；E-mail:zhuzy@jsciq.gov.cn

2016–08–13