周 欣，薛文達(dá)，李守雪，張海樓，夏寶妹，曲 淼，陳 剛＊＊，唐啟盛＊＊

（1. 南京中醫(yī)藥大學(xué) 轉(zhuǎn)化系統(tǒng)生物學(xué)與神經(jīng)科學(xué)研究中心 中醫(yī)腦病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南京 210023；2. 北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院 北京 100029）

不同抑郁癥模型下證候差異的品系依賴性研究＊

周 欣1，薛文達(dá)1，李守雪1，張海樓1，夏寶妹1，曲 淼2，陳 剛1＊＊，唐啟盛2＊＊

（1. 南京中醫(yī)藥大學(xué) 轉(zhuǎn)化系統(tǒng)生物學(xué)與神經(jīng)科學(xué)研究中心 中醫(yī)腦病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 南京 210023；2. 北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院 北京 100029）

目的：疾病與證候關(guān)系的本質(zhì)是中醫(yī)學(xué)研究的基本問題之一。本研究基于遺傳（先天稟賦）參與決定疾病證候的原理，研究小鼠品系差異對(duì)抑郁癥證候的影響。方法：使用皮質(zhì)酮皮下重復(fù)注射及慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激兩種方式，在Balb/c和129/S1兩種近交系小鼠上進(jìn)行抑郁癥疾病造模。對(duì)模型動(dòng)物進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、新奇環(huán)境攝食抑制實(shí)驗(yàn)、曠場實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)檢測，以及對(duì)小鼠證候表型特征：皮毛狀態(tài)、掌紋血色度、抓力和負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測。結(jié)果：雄性Balb/c小鼠在兩種模型中分別表現(xiàn)出閾下抑郁樣行為和抑郁樣行為，但是在抓力及掌紋血色表型上都顯示氣虛樣證候。雄性129/S1小鼠在兩種模型下都表現(xiàn)出抑郁樣行為，從行為絕望分析表現(xiàn)為氣郁樣證候。兩個(gè)品系在兩種模型下皮毛評(píng)分都增加，提示此表型與氣虛與氣郁都有關(guān)系。結(jié)論：本研究顯示抑郁癥證候呈現(xiàn)品系依賴性，且一定程度上獨(dú)立于造模方法。這為我們進(jìn)一步利用如 全基因組關(guān)聯(lián)分析等現(xiàn)代技術(shù)研究病證相關(guān)性的現(xiàn)代生物學(xué)本質(zhì)奠定了基礎(chǔ)。

病證結(jié)合 抑郁癥 品系 皮質(zhì)酮 慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激模型

病證結(jié)合是現(xiàn)代中醫(yī)臨床的基本原則，而疾病與證候存在著復(fù)雜的關(guān)系，同樣的疾病在不同的患病人群中可以表現(xiàn)為不同的證候類型，而不同的疾病在同一類人群中也可以表現(xiàn)為相同的證候特點(diǎn)。究其原因，主要是由于個(gè)體的先天稟賦以及后天生活環(huán)境共同作用帶來的。先天稟賦體質(zhì)因素很大程度上由其遺傳物質(zhì)所決定的，已有多項(xiàng)臨床研究支持 遺傳變異性作為證候差異的重要來源[1，2]。小鼠作為模型動(dòng)物，其遺傳品系繁多且易于環(huán)境控制，可以被用來評(píng)價(jià)與研究疾病證候差異的遺傳基礎(chǔ)。

抑郁癥是影響公眾健康的嚴(yán)重精神疾患，由于抑郁癥的高度異質(zhì)性，再加上病理機(jī)制不明，現(xiàn)有的西醫(yī)治療有一定的局限性。中醫(yī)辨證論治抑郁癥具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，關(guān)于抑郁癥證候類型差異也已廣泛研究[3，4]。為了開展抑郁癥中醫(yī)藥治療機(jī)理研究，研究者在臨床與基礎(chǔ)工作中越來越多地采用病證結(jié)合方式。臨床研究中如基于人群流行病學(xué)的抑郁癥證候要素研究[5]，動(dòng)物模型上，通過抑郁癥疾病模型疊加中醫(yī)證候模型的方法比較常見[6，7]。但是此類模型存在兩種造模方法疊加后不確定的關(guān)系[8]。而先進(jìn)行抑郁癥疾病造模，再檢測疾病與證候的病證結(jié)合方法能夠更好地模擬疾病的證候特征，具有良好的重復(fù)性，也再現(xiàn)了“有是病即有是證”和證候作為疾病本身組成部分的臨床實(shí)際[9]。

基于遺傳因素是決定證候的重要來源，不同遺傳背景的動(dòng)物在疾病證候上可能表現(xiàn)出穩(wěn)定的差異。為了檢驗(yàn)此假設(shè)，我們應(yīng)用兩種效度廣泛認(rèn)可的抑郁癥造模方法，包括外源性環(huán)境應(yīng)激與皮質(zhì)酮病理模型，比較了Balb/c與129/S1這兩個(gè)在精神行為研究上常用的近交系小鼠在抑郁癥造模后的病證差異，評(píng)價(jià)不同的造模方式下遺傳品系對(duì)抑郁癥證候的影響。此研究將有助于理解疾病證候差異性的生物學(xué)基礎(chǔ)，為進(jìn)一步解析病證的遺傳載體，闡明中醫(yī)辨證論治精準(zhǔn)治療疾病的科學(xué)內(nèi)涵奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年健康雄性Balb/c和雄性129/S1小鼠，體質(zhì)量20-24 g，分別由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證：SCXK（滬）2015-0002]和 南京中醫(yī)藥大學(xué)轉(zhuǎn)化系統(tǒng)生物學(xué)與神經(jīng)科學(xué)研究中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學(xué)轉(zhuǎn)化系統(tǒng)生物學(xué)與神經(jīng)科學(xué)研究中心SPF級(jí)動(dòng)物屏障房內(nèi)，群籠飼養(yǎng)，12 h光照明暗循環(huán)（早7∶00開燈，晚7∶00關(guān)燈），自由進(jìn)食與飲水。

1.2 藥品與儀器

皮質(zhì)酮（corticosterone）購自美國sigma公司（批號(hào):95H0092），二甲基亞砜（DMSO）分析純（CAS 67-68-5），購自南京化學(xué)試劑公司。動(dòng)物行為分析系統(tǒng)：自發(fā)活動(dòng)（曠場實(shí)驗(yàn)），懸尾/強(qiáng)迫游泳行為分析系統(tǒng)（DigBehv系列上海吉量軟件科技有限公司）；HP-100數(shù)顯推/拉力計(jì)（浙江樂清艾德堡儀器有限公司）。

1.3 造模方式

1.3.1 重復(fù)皮下注射皮質(zhì)酮模型

此種造模方式可以有效誘發(fā)模型動(dòng)物HPA軸功能異常而導(dǎo)致抑郁樣行為，控制小鼠個(gè)體及品系對(duì)于同一應(yīng)激源產(chǎn)生差異性反應(yīng)而導(dǎo)致造模結(jié)果的差異[10]。每種品系按照體重隨機(jī)分為對(duì)照組和皮質(zhì)酮組兩組，每組8只。皮質(zhì)酮先溶于DMSO中，然后加生理鹽水配成corticosterone 2mg·mL-1+2% DMSO混懸液，振蕩乳化均勻。皮質(zhì)酮組按20 mg·kg-1注射上述乳化藥液，對(duì)照組注射等體積生理鹽水。各組每日下午5點(diǎn)皮下注射，連續(xù)給藥3周。

1.3.2 慢性溫和不可預(yù)知應(yīng)激模型（Chronic Unpredictable Mild Stress，CUMS）

此種造模方式主要以模擬人類罹患抑郁癥的環(huán)境-心理應(yīng)激刺激來誘導(dǎo)模型動(dòng)物的抑郁樣行為，與藥物干預(yù)方式相比更接近于臨床。參照之前的方法并有所改良[11]，各品系小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組與模型組，模型組每日隨機(jī)給予一種刺激[24 h禁水、24 h禁食、空籠、斜籠、束縛6 h（將小鼠束縛于自制束縛筒中6 h，小鼠在其中活動(dòng)受限）、濕籠（將小鼠置于墊料潮濕的鼠籠）]+每周兩次徹夜光照（100 W光照持續(xù)24 h），連續(xù)造模3周。

1.4 抑郁樣行為及證候表型測試

造模結(jié)束后第2天開始，參考文獻(xiàn)進(jìn)行抑郁焦慮行為測試包括糖水偏好測試、曠場實(shí)驗(yàn)、新奇環(huán)境攝食抑制測試、懸尾實(shí)驗(yàn)與強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)[12]，以及各種證候表型測試，包括：前爪掌紋血色比值測試、負(fù)重游泳測試、抓力測試和皮毛評(píng)分。

1.4.1 糖水偏好測試（Sucrose Preference Test，SPT）

造模前3天，小鼠孤籠喂養(yǎng)，給予2%蔗糖溶液雙瓶適應(yīng)3天，期間自由攝食。然后禁食禁水18 h，給予一瓶2%蔗糖溶液與一瓶普通飲水，檢測2 h內(nèi)蔗糖溶液消耗值與所有液體總消耗的比值，作為評(píng)估“失樂”樣抑郁狀態(tài)的重要指標(biāo)。

1.4.2 曠場實(shí)驗(yàn)（Open Field Test，OFT）

測試當(dāng)天將小鼠放到實(shí)驗(yàn)室，先讓其適應(yīng)環(huán)境30 min。然后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物從黑色觀察箱的底部中央以頭部朝前的位置放入，關(guān)上箱門，在安靜環(huán)境下用DigBehv動(dòng)物行為分析系統(tǒng)連續(xù)采集5 min。采用DigBehv動(dòng)物行分析系統(tǒng)采集、存儲(chǔ)和分析視頻信號(hào)。將每個(gè)場劃分為中央?yún)^(qū)域和周邊區(qū)域。以活動(dòng)總路程、評(píng)價(jià)小鼠自發(fā)活動(dòng)的特點(diǎn)，中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間評(píng)價(jià)焦慮樣行為。

1.4.3 新奇環(huán)境攝食抑制測試（Novelty Suppressed Feeding Test，NSF）

實(shí)驗(yàn)前一天所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食16 h，然后將其放入實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)30 min。實(shí)驗(yàn)開始將小鼠放入微光環(huán)境通用隔音試驗(yàn)箱中，箱內(nèi)中央事先放入稱量好的飼料，關(guān)上箱門，在安靜環(huán)境下使用動(dòng)物行為采集監(jiān)控系統(tǒng)觀察并記錄10 min。最后以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)入箱內(nèi)開始至首次接觸并攝入飼料的時(shí)間和總的飼料消耗量作為評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物陌生環(huán)境下焦慮行為的指標(biāo)。

1.4.4 懸尾實(shí)驗(yàn)（Tail Suspension Test，TST）與強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（Forced Swim Test，F(xiàn)ST）

懸尾實(shí)驗(yàn)操作如下：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的尾部1-3 cm處以醫(yī)用微孔膠布黏貼在動(dòng)物行為分析系統(tǒng)配備的掛鉤上，令小鼠頭下尾上距離箱底30 cm高處倒懸放入行為分析箱內(nèi)，持續(xù)懸掛6 min，觀察記錄后4 min小鼠懸掛后停止掙扎的時(shí)間（不動(dòng)時(shí)間）。

強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)操作如下：采用容量為5 L的透明玻璃燒杯，裝入約3 L水，令燒杯內(nèi)水深約15 cm，水溫保持在 25±1℃。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放入水中，持續(xù)游泳6 min，觀察記錄后4 min小鼠的漂浮時(shí)間（在水中停止掙扎和攀爬逃避活動(dòng)，處于軀體漂浮水面狀態(tài)的時(shí)間）。

1.4.5 前爪掌紋血色比值測試

使用盧氏方法[13]，在室溫25℃100 Lux照度下以體視顯微鏡放大20倍采集模型小鼠前爪脈絡(luò)圖片，利用Photoshop CS軟件分析前爪第二三掌趾肉墊間脈絡(luò)RGB值， 以R值除以RGB值作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.4.6 負(fù)重游泳測試

參照文獻(xiàn)[14]，各品系小鼠按體質(zhì)量8%施以負(fù)重，負(fù)重物以實(shí)驗(yàn)用動(dòng)脈血管夾捆綁，夾在小鼠尾部1-3 cm處。將小鼠放入5 L容量的玻璃燒杯中，燒杯內(nèi)裝有約3 L的水，水深約15 cm，水溫保持在25±1℃。觀察并記錄從小鼠被放入水中到力竭沉入水底超過8 s的時(shí)間。

1.4.7 抓力測試

參照文獻(xiàn)[15]，以手持式HP-100數(shù)顯推/拉力計(jì)測量各品系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓力，設(shè)定儀器自動(dòng)記錄每次每只小鼠的最高抓力，重復(fù)測量5次，以其平均最高抓力作為最終記錄值。

1.4.8 皮毛評(píng)分

參照文獻(xiàn)[16]，將小鼠全身分為頭頸/前肢部、軀干/背腹部以及下肢/尻尾部3個(gè)部分，每個(gè)部分皮毛穗結(jié)、污穢、枯萎脫落各記1分，總分0-9分。每周評(píng)記一次。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理使用SPSS 17.0軟件，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。不同品系對(duì)照組與模型組組間，采用two-way ANOVA，分別以品系和造模作為作用因子，多組間兩兩比較采用tukey's t 檢驗(yàn)及SNK-t檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 皮質(zhì)酮模型

皮下注射皮質(zhì)酮3周后，OFT的總路程和中央時(shí)間上，兩個(gè)品系的小鼠均無顯著變化。在NSF上，Balb/c小鼠無論是潛伏時(shí)間還是攝食量上都未見顯著變化，而129/S1小鼠則呈現(xiàn)出潛伏時(shí)間顯著延長（P＜0.05）和攝食量顯著下降（P＜0.05）。SPT 上Balb/c小鼠無顯著變化，而129/S1小鼠顯著下降（P＜0.05）。在行為絕望上，Balb/c同樣沒有顯著變化，而129/S1在TST和FST上都呈現(xiàn)不動(dòng)時(shí)間的顯著延長（P＜0.05，P＜0.05）。在證候表型上兩個(gè)品系的小鼠造模后皮毛評(píng)分均顯著增加（P＜0.01，P＜0.01）。Balb/c小鼠的抓力與掌紋血色比值均顯著下降（P＜0.05，P＜0.05），而129/S1的負(fù)重游泳時(shí)間呈現(xiàn)顯著增加表現(xiàn)（P＜0.05）。詳見表1。

表1 Balb/c和129/S1兩品系皮質(zhì)酮皮下注射造模3周后抑郁樣行為及證候表型（，n=8）

表1 Balb/c和129/S1兩品系皮質(zhì)酮皮下注射造模3周后抑郁樣行為及證候表型（，n=8）

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；采用two-way ANOVA，tukey's t檢驗(yàn)。

2.2 CUMS模型

在OFT實(shí)驗(yàn)中，Balb/c和129/S1兩個(gè)品系小鼠中模型組與對(duì)照組相比均表現(xiàn)為總路程的顯著增加（P＜0.05，P＜0.05），而中央時(shí)間顯著無變化。在NSF上兩個(gè)品系均呈現(xiàn)潛伏時(shí)間的顯著增加（P＜0.05，P＜0.05）和攝食量的顯著下降表現(xiàn)（P＜0.05，P＜0.05）。在行為絕望上兩個(gè)品系小鼠的TST不動(dòng)時(shí)間均顯著延長（P＜0.05，P＜0.05），但在FST漂浮時(shí)間上只有Balb/c呈現(xiàn)顯著增加（P＜0.05），而129/S1卻無顯著變化。SPT上兩個(gè)品系也均表現(xiàn)為顯著下降的行為（P＜0.05，P＜0.05）。在證候表型上，兩個(gè)品系小鼠中模型組與對(duì)照組相比，皮毛評(píng)分均明顯增加（P＜0.01，P＜0.01）。抓力與掌紋血色比值上僅Balb/c小鼠呈顯著下降（P＜0.05），129/S1無顯著變化。在負(fù)重游泳時(shí)間上，Balb/c小鼠呈現(xiàn)顯著增加（P＜0.05），而129/S1小鼠卻表現(xiàn)為顯著下降（P＜0.05）。詳見表2。

表2 Balb/c和129/S1兩品系CUMS造模3周后抑郁樣行為及證候表型（，n=8-10）

表2 Balb/c和129/S1兩品系CUMS造模3周后抑郁樣行為及證候表型（，n=8-10）

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；采用two-way ANOVA，SNK-t檢驗(yàn)。

3 討論

本研究使用了遺傳差異的兩種近交系小鼠，分別以注射外源性皮質(zhì)酮模擬HPA軸激活的病理因素導(dǎo)致抑郁癥的模型，和CUMS模擬環(huán)境中微小而持續(xù)的應(yīng)激導(dǎo)致抑郁癥的模型，觀察在不同應(yīng)激下遺傳背景對(duì)抑郁樣行為與中醫(yī)證候表型的影響差異。

Balb/c品系小鼠在兩種造模條件下，都表現(xiàn)出抓力下降，掌紋血色比值下降以及皮毛評(píng)分上升的證候指標(biāo)變化。在皮質(zhì)酮造模中，曠場行為與新奇環(huán)境攝食抑制行為均無變化，而糖水偏好變化盡管未達(dá)到顯著性，但是有抑郁樣表現(xiàn)的趨勢(shì)。比較而言，CUMS造模導(dǎo)致糖水偏好顯著下降的抑郁樣表型，以及新奇環(huán)境攝食抑制行為變化表現(xiàn)出的焦慮樣表型。而且曠場中活動(dòng)總路程和負(fù)重游泳時(shí)間都顯著增加。根據(jù)這些指標(biāo)，可以看出在CUMS模型下，Balb/c品系表現(xiàn)為抑郁伴隨焦慮的疾病狀態(tài)，而在皮質(zhì)酮模型下，此品系可能處于閾下抑郁狀態(tài)，或者只有部分動(dòng)物獲得了抑郁樣表型。即便如此，Balb/c小鼠在兩種模型下都表現(xiàn)為抓力和掌紋血色度的下降以及皮毛評(píng)分的增加，類似于氣虛證。抓力下降是氣虛的表現(xiàn)，掌紋血色度的下降則體現(xiàn)血虛。肺為主氣臟腑，又主皮毛，氣為血之帥，氣虛則力乏，血行不足，失于宣發(fā)敷布津液榮養(yǎng)皮毛，皮毛失華。Balb/c小鼠的氣虛證候在疾病尚不明顯時(shí)就已出現(xiàn)，也從側(cè)面支持了中醫(yī)依據(jù)證候治未病思想的合理性。而此證候在疾病前后都顯著表現(xiàn)出來，既體現(xiàn)出證候的相對(duì)穩(wěn)定性，也表現(xiàn)出證候的品系依賴性。

129/S1品系小鼠在兩種造模條件下，都表現(xiàn)出糖水偏好的顯著下降的抑郁樣表型，在新奇環(huán)境攝食抑制行為中都表現(xiàn)出焦慮樣表型。另外，皮毛評(píng)分也都顯著升高。皮質(zhì)酮造模導(dǎo)致負(fù)重游泳時(shí)間和強(qiáng)迫游泳漂浮時(shí)間均增加，CUMS造模導(dǎo)致曠場總路程增加和負(fù)重游泳時(shí)間的下降。兩種造模方式都可有效誘發(fā)129/S1小鼠抑郁焦慮樣行為，提示在此品系中，皮質(zhì)酮在介導(dǎo)慢性應(yīng)激產(chǎn)生抑郁疾病中可能發(fā)揮非常重要的作用。在證候上，皮質(zhì)酮造模引起皮毛評(píng)分提高，而抓力與血色度不變，負(fù)重游泳時(shí)間甚至顯著延長，提示皮毛失華可能不是由氣血虧虛導(dǎo)致。根據(jù)其強(qiáng)迫游泳漂浮時(shí)間的延長，表現(xiàn)為應(yīng)激后氣行不暢而生郁滯的特點(diǎn)，可以辨為氣郁證候。類似地，在CUMS造模中，抓力不變，曠場總路程成倍增加，表現(xiàn)為氣盛沖動(dòng)急躁，加上不動(dòng)時(shí)間（懸尾）增加，也可辨為氣郁或肝氣郁證[17]。其負(fù)重游泳水平下降，提示抗疲勞力量有所不及，既有可能是氣郁的表現(xiàn)，也可能是向氣郁化火，煉灼腎精等轉(zhuǎn)化?？偟膩碚f， 129/S1品系在兩種造模條件下都表現(xiàn)為抑郁樣行為和氣郁證候。相對(duì)于Balb/c在兩種造模中都有抓力和血色度的變化，129/S1品系都沒有上述表現(xiàn)，也提示該證候表現(xiàn)的品系依賴性。

此研究首次使用不同的造模方法，發(fā)現(xiàn)兩種造模方式在同一品系小鼠上所表現(xiàn)出的病證一致性較好，提示抑郁癥證候的差異與遺傳背景關(guān)系密切，可以作為中醫(yī)證候的本質(zhì)研究新的研究思路與方法。此外，本文從遺傳角度進(jìn)行病證結(jié)合研究，提供了重復(fù)性好，客觀性強(qiáng)，可量化與驗(yàn)證的病證結(jié)合研究方法。盡管如此，仍有若干問題未在本文解決。例如，證候如何隨病程進(jìn)一步進(jìn)展而變化。我們?cè)趧?dòng)物模型上初步觀察到氣虛抑郁和（肝）氣郁抑郁兩種病證，也是臨床上抑郁癥病人中出現(xiàn)頻率最多的證候[4，5]，后期應(yīng)進(jìn)行方藥反證[17]，強(qiáng)化該病證的證據(jù)。

4 結(jié)語

早在上世紀(jì)80年代末就有學(xué)者提出中醫(yī)基礎(chǔ)研究需要病證結(jié)合，已取得了一定的成果。但是，病證結(jié)合在臨床實(shí)踐與基礎(chǔ)研究中某些基本的問題，例如證候與疾病到底關(guān)系如何的問題研究尚不充分。通過不同品系在不同抑郁癥模型中病證表現(xiàn)的比較，研究結(jié)果支持證候具有遺傳穩(wěn)定性的假設(shè)。以遺傳品系為基礎(chǔ)的病證研究，重復(fù)性佳，指標(biāo)量化，可以作為病證結(jié)合研究的一種方法加以推廣?？梢栽诖嘶A(chǔ)上，利用小鼠全基因組關(guān)聯(lián)分析等方法，從一定數(shù)量的遺傳群體鑒定出特異性地影響抑郁癥證候的基因及網(wǎng)絡(luò)，以闡釋病證深刻的現(xiàn)代生物學(xué)本質(zhì)。

1 張良登,王階,姚魁武,等.心力衰竭中醫(yī)證候研究.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2010, 12(6)∶ 864-869.

2 吳傳云,周雪梅,董梅,等. AT1R基因位點(diǎn)與環(huán)境因素交互作用對(duì)原發(fā)性高血壓證候形成的影響.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2015, 38(12)∶ 817-822.

3 唐啟盛,曲淼,包祖曉,等.抑郁癥中醫(yī)證候規(guī)律及診療標(biāo)準(zhǔn)制定的研究.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2011, 34(2)∶ 77-81.

4 徐春燕,田金洲,時(shí)晶,等.抑郁癥的中醫(yī)證候特征研究.中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2013, 31(4)∶ 810-813.

5 魚浚鏞.抑郁癥的證候要素及其組合規(guī)律研究.北京:北京中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文, 2014.

6 李聰,謝鳴,趙榮華.疏肝健脾方對(duì)肝郁-脾虛-肝郁脾虛證大鼠外觀表征的影響.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志, 2013, 19(11)∶ 1279-1281.

7 周國兒,吳靜,黃云娟,等.“肝郁氣滯”及“肝郁脾虛”型抑郁癥動(dòng)物模型建立初探.中華中醫(yī)藥學(xué)刊, 2014, 32(5)∶ 1035-1038.

8 梁茂新,范穎.中醫(yī)證和病證結(jié)合動(dòng)物模型研制的利弊與癥結(jié).世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2013, 15(7)∶ 1656-1664.

9 趙慧輝,王偉.病證結(jié)合證候模型研究基本思路.中華中醫(yī)藥雜志, 2006, 21(12)∶ 762-764.

10 Zhang H Y, Zhao Y N, Wang Z L, et al. Chronic corticosterone exposure reduces hippocampal glycogen level and induces depression-like behavior in mice. J Zhejiang Univ Sci B, 2015, 16(1)∶ 62-69.

11 Tang J, Xue W, Xia B, et al. I nvolvement of normalized NMDA receptor and mTOR-related signaling in rapid antidepressant effects of Yueju and ketamine onchronically stressed mice. Sci Rep, 2015, 5∶ 13573.

12 Zhang H, Xue W, Wu R, et al. Rapid antidepressant activity of ethanol extract of Gardenia jasminoides ellis is associated with upregulation of BDNF expression in the hippocampus. Evid Based Complement Alternat Med, 2015, 2015∶ 761238.

13 盧文麗,方肇勤,潘志強(qiáng),等.小鼠氣、血、陰、陽、虛等八種模型四診的比較和評(píng)價(jià).中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志, 2006, 12(6)∶ 433-438.

14 徐海軍,陶文眾,彭歡歡,等.黃芪多糖和葡萄籽提取物對(duì)衰老模型小鼠負(fù)重游泳時(shí)間和血常規(guī)參數(shù)的影響.天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2015, 27∶ 158-162.

15 方肇勤,潘志強(qiáng),盧文麗,等.大鼠、小鼠辨證的思路與方法.中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2009, 19(10)∶ 53-59.

16 Surget A, Wang Y, Leman S, et al. Corticolimbic transcriptome changes are state-dependent and region-specific in a rodent model of depression and of antidepressant reversal. Neuropsychopharmacology, 2009, 34(6)∶ 1363-1380.

17 孫亞京,裘生梁,張副興.方藥反證三種小鼠抑郁模型的證類分析.大家健康:學(xué)術(shù)版, 2013, 21(7)∶ 93-94.

An Empirical Study on Strain-Dependent Phenotypes of Traditional Chinese Medicine Syndrome of Depression

Zhou Xin1, Xue Wenda1, Li Shouxue1, Zhang Hailou1, Xia Baomei1, Qu Miao2, Chen Gang1, Tang Qisheng2

(1. Center for Translational Systems Biology and Neuroscience, Key Laboratory of Integrative Biomedicine for Brain Diseases, School of Basic Biomedical Science, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China; 2. The Third Affiliated Hospital of Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China)

The essence of the relationship between disease and traditional Chinese medicine (TCM) syndrome is one of the basic problems in the research of TCM. Based on the principle of genetic (innate endowment) involvement in determining disease-syndrome, this study aimed to analyze the effects of different mouse strains on the TCM syndrome of depression. Repeated injections of corticosterone and chronic unpredictable mild stress (CUMS) were used for modeling depression in two inbred strain mice, Balb/c and 129/S1. Animals were tested for sucrose preference, tail suspension, forced swimming, novelty suppressed feeding, open filed activities, as well as fur condition, degree of redness in the palm, grasping force, and loaded swimming tests for TCM syndrome phenotypes. The results showed that male Balb/c strain mice exhibited subthreshold depressive-like behavior and depressive-like behavior respectively in two models. However, grasping force and degree of redness in the palm in both models indicated qi deficiency syndrome. Male 129/S1 mice showed depressive-like behavior in both models. Meanwhile, the behavior despair indicated the qi stagnation syndrome in both models. In both strains and both models, the fur condition was worsen, suggesting the phenotype was associated with both syndromes. It was concluded that TCM syndrome of depression was strain-dependent, and to some extent, independent of the disease model. This study lays a foundation for further utilization of modern technologies such as genome-wide association study to investigate the relationship between disease and TCM syndrome.

Integration of disease and TCM syndrome, depression, strain, corticosterone, chronic unpredictable mild stress model

10.11842/wst.2016.02.001

R277.7

A

（責(zé)任編輯：朱黎婷 張志華，責(zé)任譯審：朱黎婷 王 晶）

2016-01-23

修回日期：2016-01-26

＊ 國家自然科學(xué)基金委青年基金資助項(xiàng)目（81403041）：京大戟中稀有二萜類成分的抗腫瘤活性及構(gòu)效關(guān)系研究，負(fù)責(zé)人：陶偉偉；國家自然科學(xué)基金委面上資助項(xiàng)目（81473658）：益腎調(diào)氣法對(duì)卒中后抑郁、焦慮，癡呆發(fā)生發(fā)展的防治作用研究，負(fù)責(zé)人：唐啟盛；江蘇省自然科學(xué)基金委青年資助項(xiàng)目（BK20140962）：基于GWAS分析策略研究越鞠丸抗抑郁作用的分子機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：薛文達(dá)；江蘇省自然科學(xué)基金委面上資助項(xiàng)目（BK20151568）：PACAP介導(dǎo)越鞠丸快速抗抑郁作用研究，負(fù)責(zé)人：陳剛；南京中醫(yī)藥大學(xué)自然科學(xué)基金青年資助項(xiàng)目（13XZR006）：基于“五志化火”探討梔子抗抑郁作用特點(diǎn)及其機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：周欣；江蘇省委雙創(chuàng)項(xiàng)目（2013455）：中醫(yī)辨證治療抑郁癥的系統(tǒng)生物學(xué)研究，負(fù)責(zé)人：陳剛。

＊＊ 通訊作者：陳剛，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：抑郁癥的病證及其治療機(jī)制；唐啟盛，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：抑郁癥辨證論治研究。