曾 斌，劉 洋，李昕蓉，張勤修＊＊

變應(yīng)性鼻炎豚鼠動物模型文獻(xiàn)研究＊

曾 斌1，劉 洋2，李昕蓉2，張勤修2＊＊

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院 成都 610072；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 成都 610072）

目的：通過對近5年來發(fā)表的變應(yīng)性鼻炎豚鼠造模的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行檢索，并對其研究方法進(jìn)行總結(jié)。方法：以“變態(tài)反應(yīng)性鼻炎”、“過敏性鼻炎”、“枯草熱”、“豚鼠”為中文檢索詞，以“guinea-pig model”、“guinea-pig model”為英文檢索詞，對萬方、維普、中國知網(wǎng)、Pubmed數(shù)據(jù)庫中2010-2015年發(fā) 表的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行檢索，對所檢索文獻(xiàn)進(jìn)行歸納分析。結(jié)果 ：本次篩選文獻(xiàn)205篇，納入文獻(xiàn)60篇。致敏藥物共3種，致敏方式共6種，造模周期在7-48天不等。其中，最常用 的致敏藥物為卵清蛋白（OVA）聯(lián)合（Al （OH）3，占63%；最常用的致敏方式是單純滴鼻法，占40%。在造模后評價方面，以主觀性評價為主，主觀評價占56.7%。結(jié)論：目前中醫(yī)類研究缺乏根據(jù)證候造模的標(biāo)準(zhǔn)路徑，且變應(yīng)性鼻炎豚鼠造模藥物、方式、評價等各方面形式多樣，無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。

變應(yīng)性鼻炎 動物模型 豚鼠 文獻(xiàn)研究 綜述

變應(yīng)性鼻炎（Allergic Rhinitis，AR）是由IgE介導(dǎo)的鼻黏膜Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性疾病，以鼻癢、流清涕為主要臨床表現(xiàn)，現(xiàn)已成為全球性健康問題[1-3]。在該病的基礎(chǔ)研究方面，由于疾病動物模型具有倫理道德限制小的優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用。目前，如新西蘭白兔、大鼠、小鼠、豚鼠等多種實驗動物已被用于變應(yīng)性鼻炎的造模，其中，豚鼠是使用頻率較高的造模實驗動物。一方面，豚鼠血清中含有豐富的補(bǔ)體，具有易于致敏的生物學(xué)特性，同樣造模條件下，更容易出現(xiàn)鼻部致敏癥狀[4]；另一方面，豚鼠過敏反應(yīng)與人類有著高度的相似性[5]。但實驗發(fā)現(xiàn)，豚鼠的造模方式并不規(guī)范。故筆者對2010-2015年在萬方、維普、中國知網(wǎng)、Pubmed等數(shù)據(jù)庫中發(fā)表的與“AR豚鼠造?！毕嚓P(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行查詢、整理，并對其造模方式、評價指標(biāo)等進(jìn)行總結(jié)，現(xiàn)報道如下。

1 檢索方法

以“變態(tài)反應(yīng)性鼻炎”、“過敏性鼻炎”、“枯草 熱”、“豚 鼠”、“guinea pigs model”、 “guineapig model”為檢索主題詞，以邏輯連接符“AND”、“OR”、“NOT”對萬方、維普、中國知網(wǎng)、Pubmed等數(shù)據(jù)庫中2010-2015年發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行檢索，共檢索出相關(guān)文獻(xiàn)205篇，排除重復(fù)文獻(xiàn)、不相關(guān)文獻(xiàn)、不可查全的文獻(xiàn)、會議文獻(xiàn)等，最后實際納入文獻(xiàn)60篇。

2 動物模型情況

在納入的文獻(xiàn)中，有20篇交待了豚鼠具體種屬。在豚鼠清潔度方面，9篇文獻(xiàn)采用SPF級豚鼠，19篇采用清潔級豚鼠，其余均未見描述。生命特征方面，僅有8篇文獻(xiàn)對所選用的豚鼠年齡進(jìn)行了報道，59篇文獻(xiàn)對其體質(zhì)量進(jìn)行了報道。在已報道文獻(xiàn)中，豚鼠最小年齡在8-9周，最大年齡在2-3月；體質(zhì)量方面差異較大，輕者可180 g，重者可達(dá)455 g，無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。

3 造模致敏藥物

60篇文獻(xiàn)中，主要采用3種造模致敏藥物：卵清蛋白（Ovalbumin，OVA）、OVA+Al（OH）3、2，4-二異氰酸甲苯酯（Toluene Diisocyanate，TDI），各致敏藥物所占比例見圖1。

3.1 卵清蛋白+氫氧化鋁致敏法

本次檢索出的60篇文獻(xiàn)中，一共有38篇文獻(xiàn)采用OVA+Al（OH）3的方法構(gòu)建變應(yīng)性鼻炎動物模型，占所有文獻(xiàn)64%。各研究者在致敏藥物濃度配比、造模周期等具體操作上有所差異，如基礎(chǔ)致敏階段最常用的致敏藥物濃度是OVA 0.3 mg和Al （OH）3粉末30 mg，溶于1 mL生理鹽水中。采用此法致敏豚鼠的造模周期也在12-48天不等。

3.1.1 同種致敏藥物條件下造模周期不同

盡管都以O(shè)VA為抗原，Al（OH）3為佐劑，但是造模周期上存在較大差異，如Chu K等[6]和馬慧敏等[7]造模周期僅12天，而陳寶田等[8]造模周期為48天。

3.1.2 同種致敏藥物條件下具體劑量不同

應(yīng)用同種藥物致敏條件下，其具體劑量在各文獻(xiàn)的報道中也存在較大差異。如均以O(shè)VA和Al （OH）3作為基礎(chǔ)致敏藥物為例，有65.8%的文獻(xiàn)，如李惠琴等[9-12]采用OVA與Al（OH）3以1∶100的比例和生理鹽水進(jìn)行配比；但也有部分文獻(xiàn)，如劉敏等[13]采用1∶30的比例調(diào)配，Jung H W等[14]按1∶20比例配制，而謝錚等[15]致敏藥物的比例為1∶1，劑量差異可達(dá)百余倍。

3.2 2，4-二異氰酸甲苯酯致敏法

有20篇文獻(xiàn)報道使用TDI致敏法造模，占所有文獻(xiàn)的33%，是僅次于OVA+Al（OH）3致敏法的常用方法，但通過對納入文獻(xiàn)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在藥物濃度、造模周期均有較大差異，主要見于以下兩點。

3.2.1 造模周期相同，藥物濃度不同

造模周期相同的情況下，不同文獻(xiàn)中使用TDI致敏的濃度略有差異，如造模周期均為7天，羅秋萍等[16]用10% TDI橄欖油溶液致敏，而李道佩等[17]以6% TDI橄欖油溶液致敏。

3.2.2 藥物濃度相同，造模周期不同

田理[18]和翟秀云[19]等均使用10%的TDI致敏豚鼠，但是前者造模周期為24天，后者造模周期為14天。

3.3 OVA致敏法

本次檢索出的60篇文獻(xiàn)中，有兩篇僅采用OVA致 敏法造 模。Tsunemine S等[20]以1%的OVA溶液霧化致敏，而文潔等[21]則以5%的OVA溶液在豚鼠兩后肢四頭肌和腹腔多點注射致敏，可見僅使用OVA致敏者少，且具體造模濃度、方式未統(tǒng)一。

4 造模方式

本次檢索的文獻(xiàn)主要涉及到的造模方式有：腹腔注射+滴鼻法、單純滴鼻法、單純腹腔注射法、多點注射法、腹腔注射+滴鼻+霧化法、霧化+腹腔注射法、灌胃+滴鼻法，共6種造模方式，各造模方式比例如圖2。

4.1 單純滴鼻法

此次檢索文獻(xiàn)中有24篇使用滴鼻法，其中TDI致敏法中，無論TDI橄欖油溶液濃度是否有差別，均使用滴鼻法進(jìn)行造模，如王曉青[22]和李道佩[23]等；而非TDI致敏法中，僅4篇文獻(xiàn)使用單純滴鼻法致敏，如李家樂[24]將OVA和Al（OH）3以1∶5的比例用生理鹽水配制，然后進(jìn)行雙側(cè)鼻孔滴鼻，從而達(dá)到致敏作用。

4.2 腹腔注射+滴鼻法

本次檢索的文獻(xiàn)中，共19篇文獻(xiàn)使用該法。如董培良等[25]基礎(chǔ)致敏時將OVA與Al（OH）3以1∶30的比例用生理鹽水配制成混懸液進(jìn)行腹腔注射，再用5% OVA生理鹽水溶液雙側(cè)滴鼻進(jìn)行局部激發(fā)。

4.3 單純腹腔注射法

僅6篇文獻(xiàn)單純使用腹腔注射法構(gòu)建AR豚鼠模型[26,27]。

4.4 多點注射法

僅有兩篇文章報道用多點注射法造模。所謂多點注射，是指在豚鼠的兩后肢四頭肌和腹腔等多部位注射，且各部位注射致敏藥物的量不同，如文潔等[21]在豚鼠兩后肢四頭肌的部位注射5% OVA生理鹽水液各0.4 mL，但腹腔注射量為1 mL。

4.5 腹腔注射+滴鼻+霧化法

共4篇文獻(xiàn)采用腹腔注射+滴鼻+霧化3種方式聯(lián)合的形式致敏豚鼠，如在以O(shè)VA和Al（OH）3混懸液作為致敏藥物時，江滿杰等[28]在基礎(chǔ)致敏階段采用腹腔注射，在強(qiáng)化致敏階段使用霧化吸入，最后再予以滴鼻激發(fā)。

4.6 其它造模方式

謝錚等[15]兩篇文章使用霧化+腹腔注射法，粟栗[29]等3篇文獻(xiàn)采用灌胃+滴鼻法。

5 造模評價方法

5.1 主觀評價

本次檢索的文獻(xiàn)中有34篇文獻(xiàn)采用此法評價造模是否成功，占所有文獻(xiàn)的56.7%。主觀評價主要采用趙秀杰等[30]建立的動物行為積分評價方法，即將實驗動物噴嚏、流涕、搔抓癥狀，按照輕、中、重度分別評為1-3分，在造模過程中觀察實驗動物相關(guān)癥狀并計算行為學(xué)計分，分?jǐn)?shù)越高其模型質(zhì)量也越好。通常積分大于5分，則造模成功。該評價標(biāo)準(zhǔn)易于操作、層次清晰，觀測時長以30 min多見。但該評分方法細(xì)節(jié)無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，如無具體的觀察時點及觀察時長等。

5.2 客觀評價

本次檢索的文獻(xiàn)中采用客觀評價確定是否造模成功的文獻(xiàn)共5篇，所涉及的客觀評價方法為：被動皮膚過敏試驗（Passive Skin Anaphylactic Test，PCA）、OVA皮內(nèi)注射法。PCA試驗雖然是評價方式中最為精確的，但實際操作中可能面臨增加實驗動物的問題。

5.3 主客觀聯(lián)合評價

主客觀聯(lián)合評價是指采用行為學(xué)積分+鼻粘膜分泌物涂片。在行為積分評價≥5的基礎(chǔ)上結(jié)合鼻黏膜分泌物涂片中嗜酸性粒細(xì)胞（Eosnophils，EOS）陽性的方法來評價模型，使結(jié)論更加肯定。

6 中醫(yī)類研究中AR豚鼠造?，F(xiàn)況

本次納入文獻(xiàn)共60篇，根據(jù)造模后干預(yù)方式劃分為中醫(yī)類研究和西醫(yī)類研究，前者共27篇，占45%；后者33篇，占55%。中、西醫(yī)類研究在造模致敏藥物、造模方式、造模周期、造模評價方法等方面，兩者并無顯著性差異，均以O(shè)VA聯(lián)合Al（OH）3為最常用的致敏藥物，以單純滴鼻法為最常用的造模方式，以“動物行為學(xué)評分”為最常用的模型評價方法。

圖1 AR豚鼠模型各致敏藥物所占比例

圖2 AR豚鼠模型各造模方式所占比例

針刺、中藥湯劑均屬于中醫(yī)治療方式，皆應(yīng)以辨證論治為基礎(chǔ)，但在檢索出的27篇中醫(yī)類研究中，無一篇文獻(xiàn)對AR豚鼠模型進(jìn)行證型分析，也無一篇文獻(xiàn)根據(jù)變應(yīng)性鼻炎證型進(jìn)行造模和造模評價。

7 討論

目前，變應(yīng)性鼻炎的動物模型種類雖多，但因豚鼠相比其它動物具有更易復(fù)制變應(yīng)性鼻炎模型的優(yōu)點，故多以豚鼠造模[31]。筆者通過對近5年文獻(xiàn)進(jìn)行檢索，并對實驗動物、致敏藥物、造模方式、造模周期以及評價方式等各方面進(jìn)行歸納、總結(jié)，對其異同性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)AR豚鼠造模研究中仍存在不足，具體如下：①造模豚鼠選?。涸炷ｋ嗍竽挲g、性別、體質(zhì)量以及清潔程度各文獻(xiàn)無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，且均未交代選用原因，究其是否會對造模成功有影響，暫無相關(guān)文獻(xiàn)提供數(shù)據(jù)支撐[32]。②致敏藥物：構(gòu)建AR豚鼠所選致敏藥物與研究者有關(guān)，不同的致敏藥物是否會影響實驗結(jié)果，尚需深入探討。③造模方式：TDI致敏法的所有文獻(xiàn)均采用滴鼻法，而OVA聯(lián)合Al（OH）3造模以腹腔注射＋滴鼻法最常用，占該種造模方式的47.5%。④造模評價：57%的文獻(xiàn)采用動物行為積分評分法，但各文獻(xiàn)觀察的時間點、時長均無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，筆者認(rèn)為，該法以主觀評價為主，造模是否成功與人為因素關(guān)系密切，需聯(lián)合鼻黏膜分泌物涂片、PCA等客觀評價方式，才能構(gòu)建出更具說服力的過敏性鼻炎豚鼠模型，但又有增加實驗動物的可能性。由于缺乏建模成功的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，目前，對造模結(jié)果也尚無統(tǒng)一、量化的評價方法，不利于實驗的重復(fù)性以及研究者之間的交流。

同時，本次檢索的中醫(yī)類文獻(xiàn)不僅缺乏針對AR豚鼠模型的中醫(yī)證候分析，而且也無造模后關(guān)于證型的觀察、評分標(biāo)準(zhǔn)。由此可見，目前缺乏中醫(yī)診療特色的AR豚鼠造模路徑。另外，國外文獻(xiàn)中AR豚鼠造模的報道較國內(nèi)文獻(xiàn)更為詳實，如Changani K等[33]在動物介紹方面，均明確報道所選豚鼠飼養(yǎng)方法、種屬、性別、大小、體質(zhì)量、清潔度等基本動物情況；在造模方面，致敏藥物濃度、配制方法、造模方式均有詳細(xì)交待；在造模評價方面，與國內(nèi)研究基本一致，以動物行為積分為主要評價方法。

綜上所述，檢索近5年國內(nèi)外文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，目前AR豚鼠造模缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的造模路徑和模型評價方法，而且中醫(yī)類研究中針對證型的特異性評價存在明顯不足[34]。對此，筆者提出以下幾點建議：①以文獻(xiàn)研究為基礎(chǔ)，對已報道的相關(guān)資料進(jìn)行提取、分析，對各類造模方法進(jìn)行篩選、評價，以確立相對完善的造模路徑；②將提取后的造模路徑予以實驗驗證，提取其主觀與客觀檢測指標(biāo)的相關(guān)數(shù)據(jù)，并分析二者的相關(guān)性，建立具有高質(zhì)量的主、客觀指標(biāo)組合，并保證其可操作性與重復(fù)性；③提取上述數(shù)據(jù)，建立標(biāo)準(zhǔn)化的造模路徑、流程，建立模型評價系統(tǒng)；④中醫(yī)類研究，在上述基礎(chǔ)上應(yīng)以辨證為基礎(chǔ)，加強(qiáng)證候指標(biāo)的分析，如通過建立豚鼠舌質(zhì)、舌苔、尾溫等特異性指標(biāo)構(gòu)建證候分析評價系統(tǒng)，實現(xiàn)病、證雙向分析，使得AR豚鼠造模在中醫(yī)類研究方面日益完善。

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Literature Studies on Guinea Pig Models for Allergic Rhinitis

Zeng Bin1, Liu Yang2, Li Xinrong2, Zhang Qinxiu2
(1. Clinical Medical College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China; 2. The Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China)

The study aimed to summarize the methods of allergic rhinitis model establishment in guinea pig by retrieving published literatures in recent five years. Chinese keywords of “allergic rhinitis”, “hay fever”, “guinea pigs”, and English keywords of “guinea-pig model” was searched in Wanfang Data, CQVIP Database Research Center, CNKI Database and Pubmed from 2010 to 2015. Two hundred and five literatures were collected. And a final of sixty literatures were included in the analysis. As a result, three drugs for allergic rhinitis and six sensitization methods were found with modeling period ranging from 7 days to 48 days in guinea pig. Among them, the most common drug was ovalbumin sensitization joint aluminum hydroxide, which accounted for 63% of all the included literatures; while the most common way was intranasal sensitization method, accounting for 40%. In modeling evaluation, subjective evaluation was the main method, which accounted for 56.7%. It was concluded that there was no standard method in making animal model based on syndrome differentiation in traditional Chinese medicine (TCM) research currently. In allergic rhinitis guinea pig model, drugs, methods and evaluations were still various without a uniform accepted standard.

Allergic rhinitis, animal model, guinea pig, literature research, review

10.11842/wst.2016.02.030

R765.21

A

（責(zé)任編輯：馬雅靜 張志華，責(zé)任譯審：朱黎婷 王 晶）

2015-10-10

修回日期：2015-10-27

＊ 國家自然科學(xué)基金委面上項目（81273985）：穴位埋線經(jīng)軸索反射對變應(yīng)性鼻炎神經(jīng)源性炎癥的調(diào)控機(jī)制，負(fù)責(zé)人：張勤修；國家自然科學(xué)基金委面上項目（81473523）：基于“穴位-鼻黏膜感覺神經(jīng)-樹突狀細(xì)胞”偶聯(lián)的穴位埋線治療變應(yīng)性鼻炎的作用機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：張勤修；高等學(xué)校博士點學(xué)科專項科研基金項目（20125132110011）：迎香穴埋線對變應(yīng)性鼻炎最輕持續(xù)性炎癥的調(diào)控機(jī)制研究，負(fù)責(zé)人：張勤修；四川省教育廳國際科技合作與交流研究計劃項目（2013HH0021）：穴位埋線治療變應(yīng)性鼻炎的臨床療效及安全性的中新合作研究，負(fù)責(zé)人：張勤修。

＊＊ 通訊作者：張勤修，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：中西醫(yī)結(jié)合耳鼻喉。