胡利靜 肖艷翼 劉騰飛 吳映捷 胡 鯤 楊先樂(lè)

(上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，國(guó)家水生動(dòng)物病原庫(kù)，上海 201306)

藍(lán)藻(Cyanophyta)是單細(xì)胞原核生物，又叫藍(lán)細(xì)菌、藍(lán)綠菌或藍(lán)綠藻，是一類藻類的總稱，主要指色球藻目(Chroococcales)、顫藻目(Oscillatoriales)、念珠藻目(Nostocales)、真枝藻目(Stigonema)4個(gè)目，可在營(yíng)養(yǎng)豐富的淡水水體中出現(xiàn)。藍(lán)藻中有些種類常于夏季高溫時(shí)大量繁殖，并在水面形成一層藍(lán)綠色且有腥臭味的浮沫，稱為“水華”。藍(lán)藻水華的種類有很多，主要有微囊藻(Microcystis)、魚(yú)腥藻(Anabaena)、鞘顫藻(Lyngbya)、束絲藻(Aphanizomenon)、顫藻(Oscillatoria)[1]，其中以產(chǎn)毒的銅綠微囊藻(Microcystisaeruginosa)最為常見(jiàn)。銅綠微囊藻大量繁殖時(shí)，水面會(huì)被厚厚的藍(lán)綠色湖靛所覆蓋，改變了水體的理化環(huán)境，降低了水體的透明度[2]，影響魚(yú)蝦等水生動(dòng)物的正常生長(zhǎng)；水體中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被耗盡時(shí)，銅綠微囊藻開(kāi)始大量死亡，藻細(xì)胞破解，使水體散發(fā)腥臭味，溶解氧減少，造成魚(yú)蝦等水生動(dòng)物的死亡，所以池塘養(yǎng)殖水體中過(guò)量的銅綠微囊藻威脅著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，因此研發(fā)綠色環(huán)保的抑藻藥物勢(shì)在必行。

目前水產(chǎn)養(yǎng)殖中藍(lán)藻的除殺多采用人工或機(jī)械打撈、化學(xué)藥物殺藻等方法。人工或機(jī)械打撈的方法雖見(jiàn)效快，但勞動(dòng)強(qiáng)度大、操作困難、耗時(shí)、效率低而且費(fèi)用高，因此實(shí)際生產(chǎn)中以化學(xué)藥物抑藻方法為主。水產(chǎn)養(yǎng)殖中常用的化學(xué)抑藻藥物為硫酸銅，但硫酸銅的大量使用和使用次數(shù)的增加常會(huì)使重金屬在養(yǎng)殖水域中積累，引發(fā)二次污染，并影響水生生物生長(zhǎng)等。因此，尋求經(jīng)濟(jì)、安全、環(huán)保、有效的抑藻藥物，對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展具有重要的意義。本研究從藥食兩用的植物及常見(jiàn)的中草藥中選擇了10種藥物材料，對(duì)銅綠微囊藻進(jìn)行抑制效果篩選試驗(yàn)，并對(duì)初篩藥物的有效劑量進(jìn)行測(cè)定，以期為開(kāi)發(fā)綠色環(huán)保的抑藻藥物提供一定的技術(shù)指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料和儀器

1.1.1 供試藻種

銅綠微囊藻藻種購(gòu)買于中國(guó)科學(xué)院野生生物種質(zhì)庫(kù)——淡水藻種庫(kù)，編號(hào)為FACHB-434。

1.1.2 抑藻材料

蜜桔、馬水桔、蜜柚、大蒜從市場(chǎng)上購(gòu)得；鐵觀音、大麥茶購(gòu)于商店；仙鶴草、大黃、土槿皮提取物、黃連提取物等購(gòu)于藥店。

1.1.3 主要儀器

MGC-250BPY-2智能型光照培養(yǎng)箱；DU730分光光度計(jì)(美國(guó)Beckman)；Allegra X-15R低速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Beckman)。

1.2 培養(yǎng)基組分及培養(yǎng)條件

銅綠微囊藻的培養(yǎng)按淡水藻種庫(kù)提供配方，采用BG11培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為：溫度(25.0±0.5) ℃，光照強(qiáng)度3 000 lx，光暗比12 h∶12 h，每天搖動(dòng)3～5次。

1.3 浸提液制備方法

蜜桔皮、馬水桔皮、蜜柚皮水提液的制備參考文獻(xiàn)[3]的提取方法，自來(lái)水沖洗柑橘皮表面灰塵，將柑橘皮切成小塊，在烘箱中干燥。以桔皮(干質(zhì)量，下同)/去離子水為0.05 kg/L的比例，用去離子水在4 ℃黑暗中浸提4 d。

大蒜液制備：稱取100 g去皮大蒜，加入100 mL去離子水，攪拌成糜狀后擠壓得汁液，置于磨口試劑瓶中，室溫保存，大蒜質(zhì)量濃度為1 kg/L。

鐵觀音、大麥茶浸提液制備：稱取鐵觀音、大麥茶2 g，加去離子水20 mL，煮沸10 min，重復(fù)一次，合并兩次茶液并用去離子水定容至20 mL，使茶液的最終質(zhì)量濃度為100 g/L作為試驗(yàn)原液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

仙鶴草、大黃浸提液制備參考文獻(xiàn)[4]的提取方法，按藥物/蒸餾水為0.10 kg/L的比例分別將兩種藥物加入盛一定量蒸餾水的燒杯中，置于電爐上煮沸浸提，煮沸20 min后濾出藥液，定容，使藥液質(zhì)量濃度為100 g/L作為試驗(yàn)原液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

土槿皮提取物、黃連提取物浸提液制備:按藥物/蒸餾水為0.05 kg/L的比例分別將兩種藥物加入盛一定量蒸餾水的燒杯中，煮沸10 min后過(guò)濾，定容，使藥液質(zhì)量濃度為50 g/L作為試驗(yàn)原液，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 篩選試驗(yàn)

將銅綠微囊藻在BG11培養(yǎng)基下預(yù)培養(yǎng)10～15 d，使其處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，作為接種的藻種。在無(wú)菌條件下，在250 mL的錐形瓶中各加入20 mL藻液，初始葉綠素a為0.340 6 μg/mL，并分別加入一定量的浸提液，最后加入無(wú)菌培養(yǎng)基，使培養(yǎng)液總體積為100 mL。最終使蜜桔皮、馬水桔皮、蜜柚皮水提液質(zhì)量濃度均為6.25 g/L，大蒜液和鐵觀音、大麥茶、仙鶴草、大黃浸提液的質(zhì)量濃度均為5.000 g/L，土槿皮提取物、黃連提取物浸提液的質(zhì)量濃度均為2.500 g/L。每組3個(gè)平行，并設(shè)空白對(duì)照組。

1.4.2 有效藥物最佳抑藻濃度確定

根據(jù)篩選結(jié)果，采用二倍稀釋法將有效藥物的母液依次倍數(shù)稀釋，查看抑藻效果，確定藥物的最佳抑藻濃度。每組3個(gè)平行，并設(shè)空白對(duì)照組。

1.4.3 測(cè)定指標(biāo)

由于活體藻類中葉綠素a的含量較高，而在死亡藻體、浮游動(dòng)物及其他無(wú)機(jī)漂浮物中葉綠素a的含量較低，因此把葉綠素a含量的測(cè)定作為測(cè)量藻類生物量的重要指標(biāo)[5]。

葉綠素a測(cè)定：參考文獻(xiàn)[6]的測(cè)定方法，即取3 mL培養(yǎng)液，3 500 r/min下離心10 min，棄去上清液，然后加入等體積90%的(體積分?jǐn)?shù))甲醇，混合均勻。將混勻的溶液放置在4 ℃黑暗條件下萃取6～8 h，然后3 500 r/min下再離心10 min，取上清液，用分光光度計(jì)測(cè)定其在665 nm處的吸光度(OD665)，并計(jì)算葉綠素a的含量，計(jì)算公式[7]為：

c=13.9×OD665

(1)

式中：c為葉綠素a質(zhì)量濃度，μg/mL。

表1 10種材料對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的抑制率1)

注：1)相同字母的數(shù)據(jù)間沒(méi)有顯著差異,不同字母的數(shù)據(jù)間差異顯著。

1.5 數(shù)據(jù)分析

各浸提液對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的抑制率計(jì)算公式為：

IR=(1-N/N0)×100%

(2)

式中：IR為抑制率，%；N為浸提液組藻的葉綠素a質(zhì)量濃度，μg/mL；N0為對(duì)照組藻的葉綠素a質(zhì)量濃度，μg/mL。

所得數(shù)據(jù)用Excel 2003和IBM SPSS Statistics 19.0軟件程序包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 10種材料對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)抑制率的影響

10種材料對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)抑制率的影響如表1所示。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可知，從1 d時(shí)的抑制率來(lái)看，蜜桔皮、蜜柚皮、馬水桔皮對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的抑制率較大；大黃、土槿皮提取物、黃連提取物對(duì)銅綠微囊藻的抑制率次之，且3者之間無(wú)顯著差異；大蒜、大麥茶對(duì)銅綠微囊藻的抑制率最低。從2 d的抑制率來(lái)看，3種柑橘皮對(duì)銅綠微囊藻的抑制率依然較高，且明顯高于其他7種材料對(duì)銅綠微囊藻的抑制率；大黃、土槿皮提取物、黃連提取物對(duì)銅綠微囊藻的抑制率次之；仙鶴草、大蒜、大麥茶對(duì)銅綠微囊藻的抑制率較低。從3～5 d的抑制情況看，大蒜對(duì)銅綠微囊藻的抑制率上升較快；仙鶴草、大麥茶對(duì)其的抑制率仍保持較低水平；其他材料抑藻率較大，且不同的材料間有不同的差異性。

2.2 10種材料對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a含量的影響

10種材料在不同時(shí)間內(nèi)對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a質(zhì)量濃度的影響如圖1所示。銅綠微囊藻各處理組作用的時(shí)間對(duì)葉綠素a含量的回歸方程如表2所示，其中y為銅綠微囊藻的葉綠素a質(zhì)量濃度，μg/mL；x為各處理組作用的時(shí)間，d。從圖1及表2可以看出，蜜桔皮、馬水桔皮、蜜柚皮、土槿皮提取物、黃連提取物浸提液組中銅綠微囊藻的葉綠素a含量隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，各組間下降的幅度略有不同，馬水桔皮>蜜桔皮>蜜柚皮>黃連提取物>土槿皮提取物。大蒜、鐵觀音、大麥茶、仙鶴草、大黃的浸提液組及對(duì)照組中銅綠微囊藻的葉綠素a含量隨著時(shí)間延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，大蒜、鐵觀音、大黃的浸提液組上升幅度明顯小于仙鶴草和大麥茶，且這些浸提液組中葉綠素a含量的上升幅度均低于對(duì)照組的上升幅度，但仙鶴草和大麥茶浸提液組葉綠素a含量的上升幅度與對(duì)照組相差不大。

表2 銅綠微囊藻各處理組作用的時(shí)間對(duì)葉綠素a含量的回歸方程

2.3 有效材料抑藻最佳濃度的確定

各質(zhì)量濃度蜜桔皮水提液對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a的作用效果如圖2所示，其中0.39、0.78 g/L濃度組與對(duì)照組中銅綠微囊藻葉綠素a變化相似；1.56 g/L濃度組的銅綠微囊藻葉綠素a的合成呈上升趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比上升幅度降低，說(shuō)明該濃度組對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a的合成具有一定的抑制能力；3.13 g/L濃度組使銅綠微囊藻的葉綠素a基本維持在初始值(0.340 6 μg/mL)狀態(tài)；而6.25、12.50、25.00 g/L濃度組能明顯抑制銅綠微囊藻葉綠素a的合成。

圖1 10種材料對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a質(zhì)量濃度的影響Fig.1 Effect of 10 kinds material on growth of M. aeruginosa

圖2 蜜桔皮對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響Fig.2 Effect of Tangerine peel on growth of M. aeruginosa

如圖3所示，馬水桔皮水提液質(zhì)量濃度為1.56 g/L時(shí)銅綠微囊藻的葉綠素a能基本維持在初始值狀態(tài)，當(dāng)小于1.56 g/L時(shí)對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a的合成抑制率減弱甚至促進(jìn)其合成，當(dāng)大于1.56 g/L時(shí)能抑制銅綠微囊藻葉綠素a的合成。

如圖4所示，蜜柚皮水提液0.78、1.56 g/L濃度組的葉綠素a與初始值相比略有增長(zhǎng)，而3.13 g/L濃度組與初始值相比略有下降，0.39 g/L濃度組的葉綠素a反而超過(guò)了對(duì)照組的葉綠素a含量，而大于3.13 g/L的各濃度組均對(duì)銅綠微囊藻的葉綠素a合成具有抑制作用。

圖3 馬水桔皮對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)影響Fig.3 Effect of Mashui orange peel on growth of M. aeruginosa

圖4 蜜柚皮對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響Fig.4 Effect of Pomelo peel on growth of M. aeruginosa

大蒜液對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a質(zhì)量濃度的影響如圖5所示。0.313 g/L濃度組對(duì)其葉綠素a的合成無(wú)抑制作用，其他各濃度組隨著時(shí)間的延長(zhǎng)葉綠素a含量總體呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，但在同一個(gè)時(shí)間點(diǎn)其葉綠素a均低于對(duì)照組，且隨著大蒜液濃度的增大葉綠素a含量的增長(zhǎng)幅度降低。當(dāng)其大于5.000 g/L時(shí)，葉綠素a含量基本維持在初始水平。

圖5 大蒜對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響Fig.5 Effect of Allium sativum on growth of M. aeruginosa

圖6、圖7分別為鐵觀音、大黃浸提液對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)影響趨勢(shì)圖。在2.500 g/L時(shí)兩種材料均使銅綠微囊藻的葉綠素a維持在初始值附近；當(dāng)大于2.500 g/L時(shí)兩種材料均能有效抑制銅綠微囊藻葉綠素a的合成，且大黃的抑制效果好于鐵觀音；當(dāng)小于2.500 g/L時(shí)，除大黃1.250 g/L濃度組外其他濃度組中的葉綠素a含量與對(duì)照組的接近且均呈增長(zhǎng)趨勢(shì)；大黃1.250 g/L濃度組葉綠素a含量雖有增長(zhǎng)趨勢(shì)，但明顯低于對(duì)照組。

圖6 鐵觀音對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響Fig.6 Effect of Tieguanyin tea on growth of M. aeruginosa

圖7 大黃對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響 Fig.7 Effect of Radix et Rhizoma Rhei on growth of M. aeruginosa

如圖8、圖9所示，土槿皮、黃連提取物浸提液對(duì)銅綠微囊藻葉綠素a含量的影響相似。當(dāng)大于2.500 g/L時(shí)，兩種材料各濃度組中的葉綠素a均呈下降趨勢(shì)，且濃度越大其下降幅度越大；當(dāng)小于2.500 g/L時(shí)，兩種材料各濃度組中的葉綠素a均呈上升趨勢(shì)，且隨著濃度降低其上升幅度增加，但各濃度組上升幅度均低于對(duì)照組。

圖8 土槿皮提取物對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響Fig.8 Effect of Cortex Pseudolaricis on growth of M. aeruginosa

圖9 黃連提取物對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響Fig.9 Effect of Rhizoma Coptidis on growth of M. aeruginosa

3 討 論

目前，防治淡水水華的發(fā)生不僅是環(huán)境領(lǐng)域的熱點(diǎn)[8]，也是淡水水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)關(guān)注的焦點(diǎn)。隨著抑藻技術(shù)的發(fā)展，國(guó)內(nèi)外研究者研究溶藻菌[9-11]、水生植物[12-13]、陸生植物[14-16]等抑藻技術(shù)，尤其是植物化感作用因其具有經(jīng)濟(jì)、高效、綠色環(huán)保的特點(diǎn)，備受國(guó)內(nèi)外學(xué)者親睞[17-18]。目前研究報(bào)道的具有抑藻作用的水生植物有很多種[19-22]，但利用水生植物直接抑制銅綠微囊藻的作用效果并不理想，可能因水生植物長(zhǎng)期生長(zhǎng)并適應(yīng)了該特定的環(huán)境從而不再產(chǎn)生對(duì)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)具有抑制作用的代謝產(chǎn)物[23]，也可能是其代謝產(chǎn)物長(zhǎng)期在特定環(huán)境中抑藻效果逐漸消亡。目前，關(guān)于藥物材料對(duì)銅綠微囊藻控制的研究，主要集中在個(gè)別藥物材料的研究[24]。如潘琦等[25]研究美人蕉種植水對(duì)銅綠微囊藻的抑制效應(yīng)時(shí)發(fā)現(xiàn)，以蒸餾水培養(yǎng)3 d收集獲得的美人蕉種植水對(duì)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，且推斷美人蕉自身代謝產(chǎn)生的化感物質(zhì)可有效抑制銅綠微囊藻的正常生長(zhǎng)。李娟等[26]發(fā)現(xiàn)，50 mg/L的H2O2能有效抑制銅綠微囊藻的生長(zhǎng)，且對(duì)藻細(xì)胞的生理指標(biāo)等有很強(qiáng)的損傷效應(yīng)。汪小雄等[27]發(fā)現(xiàn)，浸泡5 d的荔枝落葉能抑制銅綠微囊藻的生長(zhǎng)，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)，抑制效應(yīng)下降。而對(duì)于藥物材料篩選方面的研究報(bào)道卻較少[28]。因此，本試驗(yàn)選擇了10種陸生藥物材料，用其浸提液進(jìn)行了對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)抑制的研究，發(fā)現(xiàn)不同的藥物材料浸提液對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)表現(xiàn)出不同的抑制效果。具有較強(qiáng)抑藻作用的有蜜桔皮、馬水桔皮、蜜柚皮、大黃、土槿皮、黃連，且2～5 d均可保持一定的抑藻率，說(shuō)明這幾種材料均有持久抑藻的作用效果；其次是鐵觀音、大蒜；而大麥茶和仙鶴草在試驗(yàn)期間其抑制率一直小于30%，可認(rèn)為這兩種材料對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響作用不明顯。另外，大蒜、大黃在前期抑制率較低，隨著時(shí)間延長(zhǎng)其抑制率增幅較大，可能是由于浸提液中的有效成分需要一定的活化時(shí)間后才能發(fā)揮抑藻效果；蜜桔等柑橘皮含有豐富的生物活性物質(zhì)[29]，具有抗菌、抗病毒等作用[30]。柑橘、大蒜、鐵觀音都是人們常用的食物及飲品，較之土槿皮、黃連更加方便易得，綜上而言這幾種材料有望作為抑藻劑的制備材料。

為了進(jìn)一步了解有效抑藻材料的最佳抑藻濃度，本試驗(yàn)采用二倍稀釋的方法對(duì)銅綠微囊藻進(jìn)行抑制試驗(yàn)。柑橘皮類水提液對(duì)銅綠微囊藻有低促高抑的作用效果，這與梁宇斌等[31]的研究結(jié)果類似,臍橙皮提取液有低促高抑的作用效果，在質(zhì)量濃度為1.66 g/L時(shí)對(duì)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，而在3.31、6.62 g/L時(shí)對(duì)其具有明顯的抑制作用。本試驗(yàn)得到的具體結(jié)果與之略有不同，可能是由于柑橘種類不同或所產(chǎn)地區(qū)不同所致。不同種類的中草藥材料對(duì)藻的影響可能起抑制作用，也可能起促進(jìn)作用。劉東超等[32]研究了馬齒覓、桔梗、花粉等對(duì)亞心形扁藻生長(zhǎng)的影響，表明其對(duì)亞心形扁藻有一定的促進(jìn)作用，且作用的最佳質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.50%、0.75%和1.00%。周銀環(huán)等[33]研究了3種中草藥對(duì)綠色巴夫藻生長(zhǎng)及葉綠素a含量的影響，結(jié)果表明添加一定量的當(dāng)歸、桔梗能提高綠色巴夫藻的生長(zhǎng)及葉綠素a含量。當(dāng)歸、桔梗屬于營(yíng)養(yǎng)性的藥物材料，仙鶴草也屬于該類材料，本試驗(yàn)中雖然并未出現(xiàn)促進(jìn)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的作用效果，但其抑藻效果并不明顯。土槿皮等具有殺菌、抗病毒的作用，本試驗(yàn)中其對(duì)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)具有抑制作用效果。因此，選擇合適的抑藻材料對(duì)抑藻機(jī)制的研究及抑藻劑的研制非常重要。

4 結(jié) 論

(1) 從10種材料中篩選出8種有效抑制銅綠微囊藻生長(zhǎng)的材料：大黃、黃連、土槿皮、蜜桔皮、馬水桔皮、蜜柚皮、鐵觀音、大蒜，且抑藻的作用效果能夠持久。而大麥茶、仙鶴草不能有效抑制銅綠微囊藻的生長(zhǎng)。

(2) 蜜桔皮等柑橘皮類水提液在低濃度時(shí)促進(jìn)銅綠微囊藻的生長(zhǎng)，具有低促高抑的作用效果。而黃連、土槿皮等藥物材料在低濃度時(shí)抑制作用較弱。

(3) 由于本試驗(yàn)中的藥物材料浸提液本身具有顏色，考慮到應(yīng)用時(shí)對(duì)水質(zhì)環(huán)境的影響，各材料抑藻質(zhì)量濃度如下：蜜桔皮、蜜柚皮水提液為6.25 g/L；馬水桔皮水提液為3.13 g/L；鐵觀音、大黃浸提液及大蒜液為5.000 g/L；土槿皮、黃連提取物浸提液為2.500 g/L。參考文獻(xiàn):

[1] 王揚(yáng)才,陸開(kāi)宏.藍(lán)藻水華的危害及治理動(dòng)態(tài)[J].水產(chǎn)學(xué)雜志,2004,17(1):90-94.

[2] 高政權(quán),孟春曉.淡水水體中藍(lán)藻水華研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(16):7597-7598.

[3] HISASHI K,TANAKA Y.Allelopathic potential of citrus fruit peel and abscisic acid-glucoseester[J].Plant Growth Regulation,2003,40(2):117-120.

[4] 周立紅.基于化感作用的環(huán)境友好型抑藻劑的研究[D].廈門：廈門大學(xué),2008.

[5] 王德銘.水生生物監(jiān)測(cè)手冊(cè)[M].南京：東南大學(xué)出版社,1993.

[6] 李慧敏,李玉華,武佃衛(wèi),等.Cu2+對(duì)柵藻和魚(yú)腥藻增殖的影響[J].安全與環(huán)境學(xué)報(bào)，2007,7(3):13-16.

[7] 中國(guó)科學(xué)院上海植物生理研究所.現(xiàn)代植物生理學(xué)指導(dǎo)[M].北京:科學(xué)出版社,1999:93-96.

[8] 胡洪營(yíng),門玉潔,李鋒民.植物化感作用抑制藻類生長(zhǎng)的研究進(jìn)展[J].生態(tài)環(huán)境,2006,15(1):153-157.

[9] YOSHIKAWA K,ADACHI M,NISHIJIMA M,et al.β-Cyanoalanine production by marine bacteria on cyanide-free medium and its specific inhibitory activity toward cyanobacteria[J].Appl. Environ. Microbiol.,2000,66(2):718-722.

[10] 張涵之,潘偉斌,陳寶華.溶藻細(xì)菌L7對(duì)水華魚(yú)腥藻氮代謝的影響[J].微生物學(xué)通報(bào)，2012,39(8):1198-1206.

[11] 孫秀敏,鄭培忠,萬(wàn)旗東,等.3株溶藻菌對(duì)水華魚(yú)腥藻生長(zhǎng)的效應(yīng)[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2012,28(4):21-26.

[12] 胡廷尖,王雨辰,陳豐剛,等.鳳眼蓮對(duì)銅綠微囊藻的化感抑制作用研究[J].水生態(tài)學(xué)雜志,2010,3(6):47-51.

[13] 劉光濤,周長(zhǎng)芳,孫利芳,等.鳳眼蓮化感物質(zhì)對(duì)銅綠微囊藻、斜生柵藻生長(zhǎng)及細(xì)胞數(shù)相對(duì)比例的影響[J].環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2011,31(10):2303-2311.

[14] 鄧然,張永麗.大麥秸稈化感作用方法對(duì)農(nóng)村飲水水源的藻類控制分析[J].資源開(kāi)發(fā)與市場(chǎng),2008,24(2):99-102.

[15] 梁倩華,章群,范曉軍，等.應(yīng)用大麥桿控制原水藍(lán)藻生長(zhǎng)的初步研究[J].生態(tài)科學(xué),2006,25(2):122-123.

[16] 張薛,胡洪營(yíng).桔皮水提液對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的抑制效果研究[J].環(huán)境科學(xué)研究,2008,21(5):43-48.

[17] 張彬,王書(shū)敏,劉小兵,等.植物化感抑藻物質(zhì)研究[J].給水排水,2011,37(4):115-121．

[18] VYVYAN J R.Allelochemicals as leads for new herbicides and agrochemicals[J].Tetrahedron,2002,58(9):1631-1646．

[19] K?RNER S,NICKLISCH A.Allelopathic growth inhibition of selected phytoplankton species by submerged macrophytes[J].Journal of Phycology,2002,38(5):862-871.

[20] NAKAI S,INOUE Y,HOSOMI M,et al.Myriophyllum spicatum-released allelopathic polyphenols inhibiting growth of blue-green algaeMicrocystisaeruginosa[J].Water Research,2000,34(11):3026-3032.

[21] 王立新,吳國(guó)榮,王建安,等.黑藻對(duì)銅綠微囊藻的抑制作用[J].湖泊科學(xué),2004,16(4):337-342.

[22] 吳程,常學(xué)秀,董紅娟,等.粉綠狐尾藻(Myriphyllumaquaticum)對(duì)銅綠微囊藻(Microcystisaeruginosa)的化感抑制效應(yīng)及其生理機(jī)制[J].生態(tài)學(xué)報(bào),2008,28(6):2595-2603.

[23] 李楠.木本植物抑藻化感物質(zhì)的分離、抑藻機(jī)理及應(yīng)用效果研究[D].揚(yáng)州：揚(yáng)州大學(xué),2009.

[24] 蘇漢成.二溴海因?qū)︺~綠微囊藻水華的去除研究[D].廣州：暨南大學(xué),2007.

[25] 潘琦,鄒國(guó)燕,宋祥甫，等.美人蕉根系對(duì)銅綠微囊藻的化感作用[J].環(huán)境科學(xué)研究,2014,27(10):1193-1198．

[26] 李娟,王應(yīng)軍,高鵬.過(guò)氧化氫對(duì)銅綠微囊藻的損傷效應(yīng)研究[J].環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2015,35(4):1183-1189.

[27] 汪小雄,姜成春,李錦衛(wèi),等.荔枝落葉對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)和光合作用的影響[J].環(huán)境科學(xué),2015,36(5):1648-1654.

[28] 郝中湜.十種常見(jiàn)藥用植物對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)抑制效果的研究[D].揚(yáng)州:揚(yáng)州大學(xué),2013.

[29] BOCCO A,CUVELIER M E,RICHARD H,et al.Antioxidant activity and phenolic composition of citrus peel and seed extracts[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry,1998,46(6):2123-2129.

[30] 謝志剛,劉成.柑桔皮的綜合利用新進(jìn)展[J].食物與機(jī)械,2005,21(5):77-80.

[31] 梁宇斌,畢永紅,劉國(guó)祥,等.三種柑橘類果皮提取物對(duì)銅綠微囊藻生長(zhǎng)的影響[J].武漢植物學(xué)研究,2010,28(1):43-48.

[32] 劉東超,陳明貴,崖加靈.4種中草藥對(duì)亞心形扁藻生長(zhǎng)的影響[J].湛江海洋大學(xué)學(xué)報(bào),1998,18(4):17-20.

[33] 周銀環(huán),黃海立.3種中草藥對(duì)綠色巴夫藻生長(zhǎng)及葉綠素a含量的影響[J].水產(chǎn)科學(xué),2003,22(4):10-13.