白 靜，王 會(huì)

（河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院，河南鄭州 450000）

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定食品中丙烯酰胺

白 靜，王 會(huì)

（河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院，河南鄭州 450000）

采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定食品中丙烯酰胺。本次研究提取食品樣品中丙烯酰胺經(jīng)水與醇類等極性溶劑，經(jīng)高速冷凍離心過(guò)濾以及固相萃取柱進(jìn)行凈化，溴化衍生后采用氣相色譜進(jìn)行分離并以質(zhì)譜聯(lián)用法來(lái)測(cè)定食品中的丙烯酰胺含量。丙烯酰胺在濃度為5～500μg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)線性系數(shù)為r=0.998 92；定性檢出限為1.7μg/kg，定量檢出限5μg/kg，回收率在96%以上；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在6.7%以下。采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定食品中丙烯酰胺能夠滿足分析要求，在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中具有操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確可靠、干擾少以及快速等特點(diǎn)，值得大力推廣使用。

氣相色譜；質(zhì)譜聯(lián)用法；食品；丙烯酰胺

丙烯酰胺是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的小分子化合物，具有水溶性，為白色結(jié)晶狀固體，被列為IIA類致癌物［1］。2002年首次發(fā)現(xiàn)在食品中含有此類物質(zhì)，尤其經(jīng)過(guò)高溫油炸的淀粉類食品，在食品加工的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的丙烯酰胺。目前在臨床上對(duì)于此類物質(zhì)的鑒定方法主要采用的是固相萃取柱凈化樣品，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法與高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法［2］。其中高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法在應(yīng)用的過(guò)程中具有操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，但對(duì)于儀器設(shè)備具有很高的要求，因而不適合臨床推廣。而氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法在操作的過(guò)程中較為繁瑣，優(yōu)點(diǎn)在于具有較高的靈敏度與專一性。由于在食品中具有各類食品添加劑與干擾物質(zhì)，加上丙烯酰胺含量較低，采用上述兩種方法難以準(zhǔn)確地定量［3］。鑒于此，本次研究提取食品樣品中丙烯酰胺經(jīng)水與醇類等極性溶劑，經(jīng)高速冷凍離心過(guò)濾以及固相萃取柱進(jìn)行凈化，溴化衍生后采用氣相色譜進(jìn)行分離并以質(zhì)譜聯(lián)用法來(lái)測(cè)定食品中的丙烯酰胺含量。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本次研究所采用的儀器設(shè)備包括氣相色譜-質(zhì)譜儀、固相萃取裝置、石墨化碳黑柱、高速冷凍離心機(jī)、精密天平、振蕩器、粉碎機(jī)或者均質(zhì)機(jī)［4］。試劑包括純度在99%以上的丙烯酰胺與甲基丙烯酰胺，1 000mg/L甲醇溶液存放在溫度在-20℃的冰箱作為丙烯酰胺儲(chǔ)備液濃度，1.0mg/L的水溶液作為丙烯酰胺標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度。CarrezⅠ試劑的制備應(yīng)該稱取劑量為15g的K4［Fe（CN）6］·3H2O，并將其溶于劑量為100ml的水中；CarrezⅡ試劑的制備應(yīng)該稱取劑量為30g的ZnSO4·7H2O，并將其溶于劑量為100ml的水中。濃度為0.1moL/L溴酸鉀溶液的制備應(yīng)該稱取劑量為1.67g的分析純溴酸鉀，加水將其稀釋并定容至100mL；濃度為0.2moL/L硫代硫酸鈉溶液的制備應(yīng)該稱取劑量為4.96g的分析純硫代硫酸鈉，加水將其稀釋并定容至100mL［5］。1+9硫酸的制備應(yīng)該稱取劑量為10mL的硫酸緩慢地滴加至90mL的水中，然后將其搖勻，并冷卻至室溫。除此之外，還包括溴化鉀（分析純）、無(wú)水硫酸鈉（分析純）。其中無(wú)水硫酸鈉在檢測(cè)前需要采用300℃的溫度進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)2h的烘烤。其他的試劑除注明為分析純外均為色譜純，在試驗(yàn)的過(guò)程中所用水均為二次蒸餾超純水，氦氣的純度在99.999 9%以上［6］。

在檢測(cè)的過(guò)程中載氣均為高純氦氣，流速控制在1ml/min，進(jìn)樣方式選擇無(wú)分流進(jìn)樣，且進(jìn)樣口的溫度控制在250℃。柱溫的初溫應(yīng)該保持在80℃左右，并保持長(zhǎng)達(dá)6min時(shí)間，以15℃/min的溫度升至250℃，此溫度需要保持3min［7］。除此之外，傳輸線、離子源、四級(jí)桿的溫度應(yīng)該控制在250℃、230℃以及150℃，EI電離方式中電子能量為70eV，檢測(cè)器的電壓控制在1.40kV，溶劑延遲的時(shí)間控制在6min。對(duì)于離子的選擇中，甲基丙烯酰胺衍生物，m/z166，164，122，定量為m/z164；丙烯酰胺衍生物，m/z152，150，108，定量為m/z150。

1.2 一般方法

在氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定的過(guò)程中，稱取劑量為10.0g左右的食品樣品，并將其磨碎均質(zhì)后放置于250mL的三角瓶中［8］。然后在其中加入劑量為0.1mL、濃度為1 000μg/ L的甲基丙烯酰胺溶液，并在溶液中加入劑量為95mL的水，為其進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)0.5h的旋渦振蕩后加入劑量為20mL的正己烷，在進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)10min的振蕩后棄去正己烷層。此后在溶劑中加入1+9硫酸酸化至pH值為4-5之間，加入Carrez試劑Ⅰ與Carrez試劑Ⅱ各2mL，將其充分地混勻后進(jìn)行靜置分層。其中將溶液的上清液在離心速度為10000r/min的速率下進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)15min的離心，取劑量為20ml的離心上清液并加入7.5g的KBr溶解后加入溶度為0.1moL/L、劑量為5ml的溴酸鉀溶液，然后將溶液放置于溫度為4℃的冰箱過(guò)夜［9］。然后在此溶劑中滴入濃度為0.2 moL/L 的Na2S2O3直至黃色消失，主要目的在于分解此溶液中過(guò)量的溴。將混合物移入劑量為250mL的分離漏斗中，并采用劑量為40mL的乙酸乙酯進(jìn)行提取，進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)1min的搖動(dòng)，在其相分離后便棄去水層。將有機(jī)相經(jīng)覆蓋有劑量為15g的無(wú)水Na2SO4的玻璃棉過(guò)濾至劑量為100mL的圓底燒瓶?jī)?nèi)，采用過(guò)濾器與分液漏斗采用劑量為10mL的乙酸乙酯進(jìn)行2次漂洗。最后將混合餾分用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行蒸發(fā)后定容至1mL［10］。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 氣相色譜條件

采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法能夠大量地除去進(jìn)入色譜柱高沸點(diǎn)雜質(zhì)，并且能夠在一定程度上延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命，并且也能避免對(duì)下一次樣品進(jìn)行測(cè)定過(guò)程中造成的干擾。本次測(cè)定中最佳的色譜條件為：載氣流速為氦氣1mL/min，柱頭壓為4psi。在不分流進(jìn)樣方式中進(jìn)樣量控制為1.0μL，柱溫在80℃初始溫度下保持8min后，采用15℃/min的速率升至250℃，并保持此速度3min。在此條件下，丙烯酰胺衍生物保留時(shí)間為10.96min，甲基丙烯酰胺溴代衍生物保留時(shí)間為11.77min。

2.2 質(zhì)譜條件

本次測(cè)定中對(duì)丙烯酰胺進(jìn)行溴化衍生，從而成為α，β-二溴甲基丙酰胺，在優(yōu)化各種條件下根據(jù)物質(zhì)特征碎片離子m/zl152，5，1，108與m/zl166，164，122.分別對(duì)其進(jìn)行選擇性離子掃描，從而得到總離子流圖與質(zhì)譜圖，見(jiàn)圖1，圖2。采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法所獲得的譜圖基本無(wú)任何雜質(zhì)的干擾，顯著地提高了待測(cè)組的分峰強(qiáng)度，提高了定性與定量的準(zhǔn)確性。

Gas Chromatography-Mass Spectrometry of Acrylamide in Food

Bai Jing，Wang Hui

Objective：To investigate the use of gas chromatography-mass spectrometry of acrylamide in food.Methods：The study sample extraction of acrylamide in food by the water and alcohol and other polar solvents，by high speed centrifugation and frozen solid phase extraction column purifi cation，after the bromide derivative is separated by gas chromatography and mass spectrometry to determine the acrylamide levels in food.Results：The concentration of acrylamide in 5-500μg/having a good linearity within the range L，the linear correlation coeffi cient r=0.99892；qualitative detection limit of 1.7μg/kg，limit of quantifi cation was 5μg/kg，the recoveries 96 % or more；and the relative standard deviation of 6.7% or less.Conclusion：gas chromatography-mass spectrometry acrylamide in foods to meet the analytical requirements，is simple，accurate and reliable，and fast and so little interference in the course of the experiment，which is worth promoting use.

gas chromatography；mass spectrometry；food；acrylamide

TS207

A

1003-6490（2016）07-0102-02

2016-06-15

白靜（1984—），女，河南開(kāi)封人，講師，主要研究方向?yàn)榧Z油食品分析。