程利

[摘要] 目的 通過(guò)測(cè)定活動(dòng)性肺結(jié)核患者血漿中T-SPOT.TB檢驗(yàn)結(jié)果，探討其臨床價(jià)值。 方法 對(duì)36例活動(dòng)性肺結(jié)核患者同期進(jìn)行T-SPOT.TB檢驗(yàn)及PPD試驗(yàn)。 結(jié)果 活動(dòng)性肺結(jié)核患者T-SPOT.TB陽(yáng)性率為94.4%，高于PPD試驗(yàn)；并且T-SPOT.TB檢驗(yàn)的陽(yáng)性檢測(cè)率高于PPD試驗(yàn)。 結(jié)論 T-SPOT.TB檢驗(yàn)對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核患者診斷具有較高的臨床價(jià)值，可以達(dá)到早期檢測(cè)結(jié)核感染的目的。

[關(guān)鍵詞] γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)；T-SPOT.TB檢驗(yàn)；活動(dòng)性肺結(jié)核；早期診斷

[中圖分類號(hào)] R521 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 2095-0616（2016）01-220-03

[Abstract] Objective To investigate the clinical value of plasma T-SPOT.TB test of patients with active pulmonary tuberculosis. Methods T-SPOT.TB test and PPD test were performed in 36 patients with active pulmonary tuberculosis in the same period. Results The positive rate of T-SPOT.TB in active pulmonary tuberculosis was 94.4%， higher than that of PPD test. The positive detection rate of T-SPOT.TB test was higher than that of PPD test. Conclusion T-SPOT.TB test has a high clinical value in the diagnosis of active pulmonary tuberculosis， and can achieve the goal of early detection tuberculosis.

[Key words] Interferon gamma release assay； Test of plasma T-SPOT.TB； Active pulmonary tuberculosis； Early diagnosis

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染性疾病。我國(guó)目前有500萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，每年有5萬(wàn)人死于結(jié)核病[1]，可見臨床上活動(dòng)性肺結(jié)核患者數(shù)量多，社會(huì)危害大。如何能夠快速、準(zhǔn)確的診斷活動(dòng)性肺結(jié)核，有效控制結(jié)核病的蔓延，已經(jīng)成為我們首要重視的問(wèn)題。目前結(jié)核病診斷標(biāo)準(zhǔn)仍局限于臨床檢驗(yàn)痰結(jié)核菌培養(yǎng)和痰涂片直接鏡檢再輔以X線檢查和結(jié)核菌素試驗(yàn)[2]，但結(jié)核菌培養(yǎng)需要較長(zhǎng)時(shí)間（6～8周），并且有20%左右病例培養(yǎng)失敗，結(jié)核菌涂片敏感性較低，平均檢出率30%左右[3]。同時(shí)PPD試驗(yàn)所使用的抗原純化蛋白衍生物與卡介菌存在交叉免疫，有較高的假陽(yáng)性，診斷特異性較差，不適合用于卡介苗廣泛接種的地區(qū)[4]。

近年來(lái)，結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB檢驗(yàn)）已逐淅應(yīng)用于臨床，對(duì)肺結(jié)核診斷有較大的臨床意義。2014年9月～ 2015年9月對(duì)我科活動(dòng)性肺結(jié)核36例患者同時(shí)進(jìn)行T-SPOT.TB檢驗(yàn)及PPD試驗(yàn)，旨在探討T-SPOT.TB檢驗(yàn)在活動(dòng)性肺結(jié)核患者中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本院呼吸內(nèi)科2014年9月～ 2015年9月住院的患者36例，均經(jīng)痰涂片、痰結(jié)核菌DNA、影像學(xué)檢查臨床確診活動(dòng)性肺結(jié)核[5]。其中男20例，女16例；年齡最大80歲，最小20歲，平均45歲。臨床表現(xiàn)：咳嗽、咳痰34例，發(fā)熱10例，咯血4例，氣喘2例。合并癥：矽肺2例，糖尿病1例，腎病綜合征1例，梅素、HIV1例。

1.2 方法

結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)（TB-SPOT檢驗(yàn)）技術(shù)原理：基于γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（IGRA）原理[6]。以結(jié)核桿菌特異性抗原，通過(guò)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（ELISPOT）檢測(cè)受試者體內(nèi)是否存在結(jié)核效應(yīng)T淋巴細(xì)胞及釋放IFN-γ水平，從而判斷目前該受試者是否感染結(jié)核桿菌（現(xiàn)癥感染）的新方法。標(biāo)本要求：采集外周全血，無(wú)需空腹，需用肝素/肝素鋰/肝素鈉抗凝，不得使用EDTA抗凝；采血量要求：肝素抗凝全血6～8mL；樣本室溫（18～25℃）保存與運(yùn)輸，不得冷凍/冷藏；樣本采集后24h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本送福州艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心檢驗(yàn)。

PPD試驗(yàn)技術(shù)原理：結(jié)核菌素純蛋白衍生物作皮膚試驗(yàn)，通常取0.1mL結(jié)核菌素稀釋液在左前臂掌側(cè)中、下1/3交界處皮膚作皮內(nèi)注射，使之形成6～10mm大小的皮丘。注射后48～72h，根據(jù)前臂注射部位皮膚的硬結(jié)直徑[7]。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 T-SPOT.TB 結(jié)果判讀 （1）陰性對(duì)照孔顯色點(diǎn)數(shù)小于6個(gè)，并且檢測(cè)孔顯色點(diǎn)數(shù)與陰性對(duì)照孔顯色點(diǎn)數(shù)之差≥6時(shí)，結(jié)果為陽(yáng)性。（2）陰性對(duì)照孔顯色點(diǎn)數(shù)≥6個(gè)，檢測(cè)孔顯色點(diǎn)數(shù)大于陰性對(duì)照孔顯色點(diǎn)數(shù)二倍，結(jié)果為陽(yáng)性。

1.3.2 PPD 結(jié)果判讀 測(cè)量硬結(jié)平均直徑[8]：[（縱徑+橫徑）/2]的值<5.0mm，結(jié)果為陰性；5.0～9.0時(shí)，結(jié)果為弱陽(yáng)性；10～19mm時(shí)，結(jié)果為陽(yáng)性；≥20mm，或是<20mm但是局部伴有水泡、壞死表現(xiàn)時(shí)，結(jié)果為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS18.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料比較采用x2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 活動(dòng)性肺結(jié)核中兩種方法的檢測(cè)結(jié)果

活動(dòng)性肺結(jié)核患者T-SPOT.TB陽(yáng)性率為94.4%，PPD試驗(yàn)為22.2%，前者高于后者。見表1。

2.2 活動(dòng)性肺結(jié)核中兩種檢測(cè)方法的比較

T-SPOT.TB檢驗(yàn)的陽(yáng)性檢測(cè)率高于PPD試驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=22.32，P<0.025）。見表2。

3 討論

T-SPOT.TB試驗(yàn)2001年由Lalvani等[9]首先將其應(yīng)用于結(jié)核病的快速診斷，它是利用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法探測(cè)結(jié)核桿菌感染者的特異性T細(xì)胞來(lái)診斷結(jié)核病的一種新方法，是最靈敏的抗原特異性T細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)之一[10]。由表1結(jié)果可見，對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，T-SPOT.TB檢驗(yàn)的敏感性為94.4%，PPD皮膚試驗(yàn)敏感性為22.2%，前者明顯高于后者，說(shuō)明T-SPOT.TB檢驗(yàn)較PPD試驗(yàn)對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核的診斷具有更高的臨床價(jià)值。由表2結(jié)果可見，對(duì)活動(dòng)性肺結(jié)核患者，兩種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果不同，T-SPOT.TB檢驗(yàn)的陽(yáng)性檢測(cè)率較高。

本研究結(jié)果顯示，活動(dòng)性肺結(jié)核結(jié)核菌涂片陰性的28例患者中，有26例T-SPOT.TB結(jié)果陽(yáng)性，說(shuō)明T-SPOT.TB檢測(cè)對(duì)痰菌陰性的患者具有很高的輔助診斷價(jià)值，對(duì)臨床醫(yī)生能夠幫助其決定是否運(yùn)用抗結(jié)核藥物治療。而另2例痰菌陰性患者T-SPOT.TB檢驗(yàn)結(jié)果為陰性，我們考慮可能為潛伏性結(jié)核感染[11]。此外，當(dāng)結(jié)核分枝桿菌被清除后，致敏T淋巴細(xì)胞就會(huì)消失，此時(shí)行T-SPOT.TB檢測(cè)可反映出機(jī)體是否清除了結(jié)核分枝桿菌，從而進(jìn)行臨床療效判定[12]。

目前臨床上肺結(jié)核的病例在不斷增多，現(xiàn)在全球每年新增結(jié)核病例為800萬(wàn)～1000萬(wàn)，其中90%患者集中在發(fā)展中國(guó)家[13]。如何從大規(guī)?；颊咧姓_診斷出結(jié)核病患者，既不誤診，也不漏診，突顯早期診斷的重要性，對(duì)臨床醫(yī)生來(lái)說(shuō)至關(guān)重要。結(jié)核菌培養(yǎng)因培養(yǎng)要求高、周期長(zhǎng)，臨床上較難大范圍普及。PPD試驗(yàn)在鑒別診斷結(jié)核分枝菌感染及卡介苗接種方面還存在特異性差的問(wèn)題，臨床上應(yīng)用參考價(jià)值有限。痰結(jié)核菌涂片及結(jié)核菌DNA檢測(cè)對(duì)空洞肺結(jié)核及排痰量較多的肺結(jié)核患者檢測(cè)有一定陽(yáng)性率，但臨床上陽(yáng)性率不是很高。結(jié)核病的血清學(xué)診斷如結(jié)核抗體檢測(cè)亦常應(yīng)用于臨床，但目前WHO認(rèn)為血清學(xué)檢測(cè)試劑用于結(jié)核診斷并不能提高臨床診治效果，不予以推薦[14]。T-SPOT.TB試驗(yàn)被證實(shí)在結(jié)核分枝桿菌感染中有較好的特異性和敏感性，在歐美國(guó)家已經(jīng)成為臨床常規(guī)檢測(cè)結(jié)核的一種方法[15]。同時(shí)T-SPOT.TB試驗(yàn)采用外周血檢測(cè)，簡(jiǎn)便易行，并且能快速出結(jié)果（第2天）[16]，極大的方便了臨床醫(yī)生。

綜上所述，T-SPOT.TB檢驗(yàn)作為一種新的檢測(cè)結(jié)核感染的免疫學(xué)方法，它提高了結(jié)核檢測(cè)陽(yáng)性率，可作為結(jié)核病早期診斷的一項(xiàng)輔助檢查手段，可用于臨床癥狀不典型、PPD試驗(yàn)診斷不明確和痰涂片陰性的疑似結(jié)核患者，且檢測(cè)結(jié)果耗時(shí)短，有較大的臨床意義。

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（收稿日期：2015-10-15）