王志強(qiáng)　楊杰　葛君　陜文生

?

·綜述與講座·

精子DNA碎片與精液常規(guī)參數(shù)的相關(guān)性研究進(jìn)展

王志強(qiáng)楊杰葛君陜文生

男性不育診斷的第一步傳統(tǒng)上采用精液常規(guī)檢查，但是，該檢查在判斷引起該疾病的潛在機(jī)制方面存在明顯的局限性。精子DNA碎片可能是生育障礙的致病因素，其評(píng)估已被建議作為男性不育實(shí)驗(yàn)室檢查的輔助項(xiàng)目，尤其是在應(yīng)用輔助生殖技術(shù)(ART)之前。通過(guò)對(duì)近期文獻(xiàn)進(jìn)行回顧，旨在評(píng)估精液常規(guī)參數(shù)和精子DNA碎片檢查作為診斷男性不育手段時(shí)，兩者間可能相關(guān)性。

輔助生殖；精液常規(guī)參數(shù)；DNA碎片

精液常規(guī)分析無(wú)論過(guò)去還是現(xiàn)在都是男性不育初步評(píng)估的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目[1]。盡管該檢查并不完善，但是嚴(yán)格的方法學(xué)指導(dǎo)及質(zhì)量控制下進(jìn)行，精液常規(guī)分析可針對(duì)男性生育能力提供有用信息。某些患者，初步的精液檢查可以揭示精子功能障礙的一些基本形式，如弱精子癥或畸形精子癥[2]，這對(duì)自然妊娠有嚴(yán)重的不利影響。然而，傳統(tǒng)精子的診斷能力仍存在局限性，據(jù)估計(jì)，基本精液分析圖正常的男性有15%患有不育[3]。顯然，我們需要采取更為精確的測(cè)試，以準(zhǔn)確判斷男性不育的功能性病因及其與生殖結(jié)局的關(guān)系。許多近期研究證實(shí)，精子DNA完整性是正常受精以及父系遺傳信息傳遞給子代的先決條件。因此，該技術(shù)可引進(jìn)為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢查，可以豐富有關(guān)精液功能相關(guān)特征的診斷[4]。本文的目的是探討精子DNA完整性檢測(cè)與精液常規(guī)參數(shù)檢測(cè)的相關(guān)性以及臨床意義。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室和臨床評(píng)估精子DNA完整性檢測(cè)的診斷能力，并針對(duì)需要輔助生殖的夫妻，得出該檢測(cè)用于其有效治療的價(jià)值和實(shí)用性。

1　精液常規(guī)分析

精液顯微鏡檢查是一種檢測(cè)男性生育能力的基本方法，但近幾年，精液常規(guī)分析被認(rèn)為“過(guò)時(shí)”，其診斷能力遭遇挑戰(zhàn)，尤其是在先進(jìn)的輔助生殖技術(shù)(ART)誕生之后，如卵母細(xì)胞胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)。但是，大部分男科專家仍一致認(rèn)為基本精液分析目前和將來(lái)都是男性不育初步評(píng)估最必不可少的項(xiàng)目。根據(jù)美國(guó)泌尿協(xié)會(huì)(AUA)和美國(guó)生殖醫(yī)學(xué)會(huì)(ASRM)的建議，完整的男性不育初步評(píng)估應(yīng)包含綜合病史及生育史的記錄、體格檢查以及至少兩項(xiàng)精液分析[5]。

WHO于2010年發(fā)布了最新的第5版《人精液檢查與處理的實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》，該版本對(duì)之前的4個(gè)版本進(jìn)行了充分修訂。新版手冊(cè)提供了詳細(xì)的方法描述及其局限性[6]，包括替代選項(xiàng)，即實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)特殊需要選擇應(yīng)用的檢測(cè)項(xiàng)目。應(yīng)重視檢測(cè)過(guò)程中的質(zhì)量控制以確保其謹(jǐn)慎性，以公認(rèn)的指南為依據(jù)，采用標(biāo)準(zhǔn)操作流程[7]。更重要的是，新版WHO手冊(cè)創(chuàng)新的基本特征是引入了再評(píng)估和支持基本精液參數(shù)參考值的循證數(shù)據(jù)。盡管WHO手冊(cè)新提出的指南對(duì)精液參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化和評(píng)估有重要意義，但是精液分析結(jié)果的診斷解釋仍需科學(xué)審查。

精液常規(guī)參數(shù)所獲取的信息在一定程度上反映了精子發(fā)生過(guò)程的質(zhì)量，而該過(guò)程決定了精子的功能強(qiáng)弱以及精子的受精潛能。精子濃度、活力以及形態(tài)與體內(nèi)體外受精率具有相關(guān)性。

一項(xiàng)或多項(xiàng)精液參數(shù)偏離參考值提示可能為男性因素導(dǎo)致夫妻的不孕不育問(wèn)題[8]。幾種不育問(wèn)題與精子質(zhì)量異常有關(guān)，如精子形態(tài)異常，頭部畸形的精子數(shù)量增多，常可導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)[9]。但是，低于參考值的精液參數(shù)并不能排除體內(nèi)妊娠的可能性，或者與之相反，“正常”的精子常規(guī)參數(shù)報(bào)告也并不一定能夠保證讓人滿意的受精能力。

由于評(píng)估方法存在內(nèi)在的局限性，精液標(biāo)本多變的性質(zhì)，以及不同精液實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查的能力水平不同，臨床上用對(duì)生殖結(jié)局進(jìn)行評(píng)估時(shí)，可生育的男性與不能生育的男性可能存在部分重疊[10]。這可能是由于常規(guī)分析無(wú)法揭示男性生育障礙的潛在機(jī)制。為了豐富基本評(píng)估的診斷價(jià)值，有必要采取更專業(yè)的測(cè)試，在分子水平測(cè)定精子的功能完整性。越來(lái)越多的證據(jù)表明，精子DNA損傷與不良臨床結(jié)局具有相關(guān)性，精子染色質(zhì)完整性檢查有望成為實(shí)驗(yàn)?zāi)锌茖W(xué)的新型、有價(jià)值的診斷工具[11]。

2　精子基因完整性評(píng)估

2.1精子染色質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)精子染色質(zhì)為有序、緊密的晶體結(jié)構(gòu)，由單倍體DNA和異構(gòu)蛋白組成。高度濃縮以及不溶性在父系遺傳信息通過(guò)男性和女性生殖道時(shí)起保護(hù)作用，并使遺傳信息可以保存在精核極小的體積內(nèi)[12]。Ward等[13]提出的模型描述了精子染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)，由DNA長(zhǎng)鏈起始，隨后在4個(gè)水平被逐漸包裝：染色體錨定，即DNA附著于核環(huán)；DNA附著于核基質(zhì)，形成DNA環(huán)狀結(jié)構(gòu)域；組蛋白被精蛋白替代，將DNA壓縮成致密的“甜甜圈”樣構(gòu)型及染色體結(jié)構(gòu)。

精子DNA與蛋白質(zhì)相互作用形成的致密復(fù)合物構(gòu)成高度穩(wěn)定且具有轉(zhuǎn)錄惰性的染色質(zhì)。精子發(fā)生和附睪轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中，組蛋白大部分(85%)被過(guò)轉(zhuǎn)換蛋白(TPs)替代，隨后被精蛋白替代。保留下來(lái)的15%組蛋白結(jié)合DNA位于對(duì)早期胚胎發(fā)育有重要遺傳作用的區(qū)域，如啟動(dòng)子、印跡位點(diǎn)和microRNAs[14]。精蛋白為高度堿性的蛋白質(zhì)，大小為典型組蛋白的一半。人體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)兩種精蛋白(P1和P2)，而其他動(dòng)物體內(nèi)僅有P1。

2.2誘導(dǎo)精子DNA損傷的機(jī)制精子核凝聚過(guò)程中發(fā)生一系列事件，包括拓?fù)渲嘏?、DNA結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)換、轉(zhuǎn)錄改變以及核小體結(jié)構(gòu)喪失。核酸內(nèi)切酶被認(rèn)為可以在精子發(fā)生中期制造和連接DNA鏈上的缺口，但是成熟精子內(nèi)正常情況下并無(wú)核酸內(nèi)切酶。據(jù)推測(cè)，TPs有修復(fù)短暫性DNA缺口的作用，以預(yù)防射精的成熟精子發(fā)生持續(xù)性DNA損傷[15]。此外，精子在分子水平對(duì)胚胎有任何表觀遺傳機(jī)制的變動(dòng)，如選擇性組蛋白保留、組蛋白修飾、轉(zhuǎn)錄因子、蛋白酶體組成以及DNA甲基化，都可能阻止父親的基因組向卵母細(xì)胞的有限傳遞，從而妨礙精子功能。

染色質(zhì)構(gòu)型的形成過(guò)程中各階段發(fā)生改變均可能對(duì)精子功能產(chǎn)生不利影響。精子DNA損傷的發(fā)生主要與以下機(jī)制有關(guān)：(1)減數(shù)分裂I期凋亡失敗導(dǎo)致射出的精子存在缺陷；(2)精子發(fā)生期間染色質(zhì)凝聚缺陷，包括精蛋白化缺陷和染色質(zhì)包裝不充分[16]；(3)睪丸后氧化應(yīng)激，主要由內(nèi)外活性氧(ROS)和抗氧化能力不平衡導(dǎo)致[17]；(4)內(nèi)源性半胱天冬酶和核酸內(nèi)切酶活性誘導(dǎo)的碎片；(5)各種病理性醫(yī)源性和環(huán)境因素，包括癌癥、抗腫瘤藥物、精索靜脈曲張、高溫、白細(xì)胞精子癥，有毒物質(zhì)的職業(yè)暴露，如胺甲萘，空氣污染以及男性年齡增長(zhǎng)[18]。此外，不育男性患者的精子DNA碎片與遺傳因素有關(guān)。基因的變異性與多態(tài)性在基因組完整性、減數(shù)分裂重組以及配子發(fā)生的調(diào)節(jié)過(guò)程中起關(guān)鍵作用，即錯(cuò)配修復(fù)途徑[19]、解毒途徑[20]和抗氧化保護(hù)[21]與精子DNA碎片風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。染色體結(jié)構(gòu)重排，如相互易位和羅伯遜易位，臂間倒位以及染色體畸變，即Yq基因微缺失，與不育男性患者對(duì)精子DNA完整性減弱的易感性增加有關(guān)。這些因素的不利作用可能相互聯(lián)系。例如，精子發(fā)生過(guò)程中的功能機(jī)制障礙，如染色質(zhì)壓縮不良，可能導(dǎo)致所產(chǎn)生的精子后期對(duì)氧化應(yīng)激更為易感，從而對(duì)精子DNA完整性造成不利影響[22]。

3　精子DNA碎片與實(shí)驗(yàn)室及臨床的相關(guān)性

3.1與精液常規(guī)參數(shù)的相關(guān)性過(guò)去幾年中，幾項(xiàng)研究嘗試探討精子DNA碎片與常規(guī)精子參數(shù)之間的相關(guān)性，但未得出明確結(jié)論。大部分研究指出，DNA碎片率與精子質(zhì)量呈負(fù)相關(guān)，其中精子質(zhì)量以精子濃度、活率、活力以及形態(tài)為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估，而不考慮研究對(duì)象的年齡[23]。

形態(tài)正常的精子百分比與DNA碎片呈顯著負(fù)相關(guān)[24]。染色質(zhì)結(jié)構(gòu)異常和DNA鏈斷裂與形態(tài)嚴(yán)重異常相關(guān)，如巨頭、多尾畸形精子與二體同時(shí)存在，或發(fā)生伴異倍體率增高的圓頭精子癥。此外，特定的形態(tài)異常，如錐形頭，在DNA碎片增多的患者中無(wú)法解釋與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)有關(guān)。頭部異常小的精子其體外受精(IVF)預(yù)后較差，且與高水平DNA碎片有關(guān)[25]。

相反，有幾項(xiàng)研究報(bào)道沒(méi)有發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)精液參數(shù)(如精子濃度、運(yùn)動(dòng)性和形態(tài))與DNA碎片指數(shù)存在顯著相關(guān)性[26]。但是，根據(jù)WHO標(biāo)準(zhǔn)具有正常特征的精子也存在遺傳物質(zhì)受損[27]。與之不同的是，在一些特定的患者，如易位攜帶者和癌癥患者，精子染色體畸變并不總是伴隨精液特征(如正常形態(tài)精子百分比)異常[28]。

不同研究在精液常規(guī)參數(shù)與DNA碎片指數(shù)的相關(guān)性方面存在爭(zhēng)議，其可能原因如下：(1)用于測(cè)定DNA完整性的方法不同：多數(shù)研究采用不同方法評(píng)估DNA碎片，因此常常檢測(cè)DNA損傷的不同方面，而且結(jié)果并不一定具有可比性。(2)精液常規(guī)參數(shù)分析方法和標(biāo)準(zhǔn)不同：精子計(jì)數(shù)以及形態(tài)評(píng)估所采用的技術(shù)不同可能影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，各實(shí)驗(yàn)室依據(jù)的指南(如WHO 1999或WHO 2010手冊(cè))可能并不一致，從而導(dǎo)致界定“正?！钡膮⒖贾递^為混亂。(3)精液參數(shù)測(cè)定的質(zhì)量控制：精液分析研究很少提及實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)定時(shí)是否為了保證結(jié)果的精確性，減少主觀性而采用了外部質(zhì)量控制。(4)研究人群的選擇標(biāo)準(zhǔn)缺乏一致性：各患者亞組所得出的結(jié)果并不一定具有可比性[25]。

3.2與臨床參數(shù)的相關(guān)性精子DNA損傷可能在生殖過(guò)程的不同階段發(fā)揮作用，從胚胎的著床前發(fā)育開(kāi)始，到實(shí)現(xiàn)并維持妊娠，最后分娩健康子女。精子DNA損傷在生育的不同時(shí)間點(diǎn)均有影響，與以下臨床終點(diǎn)具有相關(guān)性：受精率、胚胎發(fā)育、著床、妊娠和流產(chǎn)率以及后代先天性異常。

關(guān)于精子DNA碎片對(duì)受精率是否有影響的確存在一些爭(zhēng)議。受精結(jié)果與高水平精子DNA碎片呈負(fù)相關(guān)[29]。但是，如果DNA損傷的類型和程度可被卵母細(xì)胞的修復(fù)能力所平衡，那么即使精子DNA碎片率升高，仍可能實(shí)現(xiàn)受精。這在行ART的患者中尤為明顯，特別是ICSI，受精率與精子DNA碎片或異常DNA凝聚的發(fā)生率似乎并無(wú)相關(guān)性[26]。

在精子DNA質(zhì)量受損的患者，胚胎可能出現(xiàn)凋亡和碎片，難以到達(dá)囊胚期。這在行ART(IVF和ICSI)的患者中較為明顯，基因組異常的精子可能對(duì)胚胎造成不可修復(fù)的損傷，導(dǎo)致胚胎發(fā)育停滯在囊胚期之前，且著床率較低[30]。

大量研究證實(shí)，精子DNA碎片程度增加對(duì)實(shí)現(xiàn)并維持妊娠有不利影響。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與多種基因組異常有關(guān)，包括精子DNA碎片。根據(jù)IVF和ICSI數(shù)據(jù)，DNA碎片程度增加時(shí)流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)增加4倍。

在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的夫妻中，非整倍體率與精子DNA碎片存在明顯相關(guān)性。相關(guān)研究表明，對(duì)于這類患者，非整倍體和DNA碎片呈相關(guān)性，提示精子發(fā)生過(guò)程中利用細(xì)胞凋亡的檢查點(diǎn)機(jī)制存在缺陷。這項(xiàng)觀察在由嚴(yán)重睪丸損傷或輸精管部分堵塞導(dǎo)致的嚴(yán)重少精子癥患者中也得到證實(shí)[31]。

盡管發(fā)生DNA損傷的精子引起受精和妊娠的能力下降，但是也不排除可能得到讓人滿意的結(jié)果，尤其是在ICSI的輔助下。對(duì)于這些病例，其下一代的健康是否會(huì)受到影響目前尚不明確。

職業(yè)暴露(金屬、溶劑、農(nóng)藥或煙)導(dǎo)致的父系DNA損傷與先天缺陷、兒童疾病甚至癌癥有關(guān)。近幾年，高齡且存在精子DNA高度損傷的男性，其子女中遺傳病的發(fā)生率增高，如精神分裂癥、軟骨發(fā)育不全以及Apert氏綜合征。

精子DNA損傷可以認(rèn)為是一種“冰山效應(yīng)”，它在射精的所有精子中以不同程度存在，而且對(duì)卵母細(xì)胞和胚胎的修復(fù)能力進(jìn)行一般描述也存在局限性，因此應(yīng)用有創(chuàng)性ART(如ICSI)時(shí)應(yīng)注意存在的風(fēng)險(xiǎn)。毫無(wú)疑問(wèn)，盡管需要進(jìn)一步的隨訪研究，但是后代中與精DNA質(zhì)量相關(guān)的發(fā)病率其嚴(yán)重性仍值得我們注意。

將精子DNA損傷測(cè)試完全用于常規(guī)臨床工作仍需大規(guī)模臨床試驗(yàn)。確定不育患者中哪些特定人群可從該項(xiàng)測(cè)試中獲益是一種更為現(xiàn)實(shí)的途徑。特發(fā)性不育的男性，進(jìn)行過(guò)放化療的癌癥患者，男性染色體結(jié)構(gòu)異常攜帶者，ART妊娠率較低以及胚胎質(zhì)量差的不育男性，嚴(yán)重形態(tài)異常，即多態(tài)畸形精子癥、圓頭精子癥[32]，存在引起DNA損傷的潛在因素，如精索靜脈曲張、反復(fù)ART失敗、流產(chǎn)、炎癥或生殖道感染。

對(duì)于特定患者，DNA損傷的詳細(xì)信息聯(lián)合精液常規(guī)評(píng)估可在ART前評(píng)估，包括完整病史評(píng)估、臨床檢查以及女性因素調(diào)查的綜合精液學(xué)檢查決定了其步驟。如果評(píng)估發(fā)現(xiàn)了病理機(jī)制，如精索靜脈曲張或白細(xì)胞精子癥，應(yīng)進(jìn)行治療，即手術(shù)治療或抗菌治療，然后復(fù)查精液分析和DNA碎片評(píng)估。如果ART失敗，盡管多次精液分析均為正常，且不存在女性病理因素，也應(yīng)進(jìn)行精子DNA碎片評(píng)估。DNA碎片程度增加需要經(jīng)驗(yàn)性治療，如補(bǔ)充抗氧化劑或調(diào)整生活方式，以減少可能發(fā)生的氧化應(yīng)激相關(guān)損傷。

Aitken認(rèn)為，“常規(guī)精液評(píng)估的發(fā)明永遠(yuǎn)代表了男性生育功能評(píng)估的基礎(chǔ)”[33]。這顯然是正確的，因?yàn)榫悍治霭凑展J(rèn)的方法在嚴(yán)格的質(zhì)量控制下進(jìn)行。鑒于過(guò)去幾十年中越來(lái)越多的科學(xué)數(shù)據(jù)表明，精子完整性對(duì)男性生殖能力有非常重要的意義，因此對(duì)精子DNA損傷進(jìn)行詳細(xì)的標(biāo)準(zhǔn)化檢查可合理地用于不孕不育夫妻的綜合檢查。當(dāng)然，下列各項(xiàng)問(wèn)題仍有待解決以達(dá)成共識(shí)：最佳檢查的選擇、操作方法以及最重要的決定結(jié)果的臨床相關(guān)性及診斷價(jià)值的閾值。

總之，用于診斷男性不育的整體分析今后將在于對(duì)精液常規(guī)參數(shù)和精子基因組完整性的信息進(jìn)行有效結(jié)合。需要進(jìn)行有目的的大規(guī)模研究，對(duì)確定具體特質(zhì)及參考值的變量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，以輔助優(yōu)化特定類型男性不育的診斷、治療和預(yù)防。

1Barratt CLR.Semen analysis is the cornerstone of investigation for male infertility.Practitioner,2007,251: 8-10.

2Mario M,Cristina B,Elisa S.Trends in dietary patterns and compliance with World Health Organization recommendations:a cross-country analysis.Public Health Nutrition,2008,11:535-540.

3Lewis SE,Agbaje I,Alvarez J.Sperm DNA tests as useful adjuncts to semen analysis.Systems Biology in Reproductive Medicine,2008,54:111-125.

4Muriel L,Garrido N,Fernández JL,et al.Value of the sperm deoxyribonucleic acid fragmentation level, as measured by the sperm chromatin dispersion test, in the outcome of in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection.Fertil Steril,2006,85:371-383.

5Haidl G,Allam JP,Schuppe HC.Chronic epididymitis: impact on semen parameters and therapeutic options.Andrologia,2008,40:92-96.

6Jequier AM.Semen analysis:a new manual and its application to the understanding of semen and its pathology.Asian J Androl,2010,12:11-13.

7Aitken RJ.Whither must spermatozoa wander? The future of laboratory seminology.Asian Journal of Andrology,2010,12:99-103.

8Andrade-Rocha FT. Semen analysis in laboratory practice: an overview of routine tests. J Clin Lab Anal,2003,17:247-258.

9Carrell DT,Wilcox AL,Lowy L,et al.Elevated sperm chromosome aneuploidy and apoptosis in patients with unexplained recurrent pregnancy loss.Obstet Gynecol,2003,101:1229-1235.

10Gabor H,Attila J,Denny S,et al.Fertility testing and ICSI sperm selection by hyaluronic acid binding: clinical and genetic aspects.Reproductive Biomedicine Online,2007,14:650-663.

11Bungum M,Bungum L,Giwercman A.Sperm chromatin structure assay (SCSA): a tool in diagnosis and treatment of infertility.Asian Journal of Andrology,2011,13:69-75.

12Acharyya S,Kanjilal S,Bhattacharyya AK.Does human sperm nuclear DNA integrity affect embryo quality? Indian J E Bol,2005,43:1016-1022.

13Ward WS,Coffey DS.DNA packaging and organization in mammalian spermatozoa: comparison with somatic cells.Biology of Reproduction,1991,44:569-574.

14Jenkins TG,Carrell DT.The paternal epigenome and embryogenesis: poising mechanisms for development.Asian Journal of Andrology,2011,13:76-80.

15Boissonneault G.Chromatin remodeling during spermiogenesis: a possible role for the transition proteins in DNA strand break repair.Febs Letters,2002,514:111-114.

16Leduc F,Nkoma GB,Boissonneault G.Spermiogenesis and DNA repair: a possible etiology of human infertility and genetic disorders.Systems Biology in Reproductive Medicine,2008,54:3-10.

17Alvarez JG.DNA fragmentation in human spermatozoa: significance in the diagnosis and treatment of infertility.Minerva Ginecologica,2003,55:233-239.

18Cocuzza M,Sikka SC,Athayde KS,et al.Clinical relevance of oxidative stress and sperm chromatin damage in male infertility: an evidence based analysis.International Braz J Urol,2007,33:603-621.

19Ji G,Yan L,Zhou Y,et al.Common variants in mismatch repair genes associated with increased risk of sperm DNA damage and male infertility.Bmc Medicine,2012,10:49.

20Jaiswal D,Sah R,Agrawal NK,et al.Combined Effect of GSTT1 and GSTM1 Polymorphisms on Human Male Infertility in North Indian Population.Reproductive Sciences,2012,19:312-316.

21Ji G,Gu A,Wang Y,et al.Genetic variants in antioxidant genes are associated with sperm DNA damage and risk of male infertility in a Chinese population.Free Radic Biol Med,2012,52:775-780.

22Aitken RJ,Koppers AJ.Apoptosis and DNA damage in human spermatozoa.Asian Journal of Andrology,2011,13:36-42.

23Perrin A,Caer E,Oliver-Bonet M,et al.DNA fragmentation and meiotic segregation in sperm of carriers of a chromosomal structural abnormality.Fertil Steril,2009,92:583-589.

24Tang SS,Gao H,Zhao Y,et al.Aneuploidy and DNA fragmentation in morphologically abnormal sperm.International Journal of Andrology,2010,33:e163-179.

25Menkveld R,Holleboom CA,Rhemrev JP.Measurement and significance of sperm morphology.Asian Journal of Andrology,2011,13:59-68.

26Karydis S,Asimakopoulos B,Papadopoulos N,et al.ICSI outcome is not associated with the incidence of spermatozoa with abnormal chromatin condensation.Vivo,2005,19:921-925.

27Sakkas D,Alvarez JG.Sperm DNA fragmentation: mechanisms of origin,impact on reproductive outcome,and analysis.Fertil Steril,2010 93:1027-1036.

28Sun F,Ko E,Martin RH.Is there a relationship between sperm chromosome abnormalities and sperm morphology? Reprod Biol Endocrinol,2006,4:200-201.

29Brugnon F,Assche EV,Verheyen G,et al.Study of two markers of apoptosis and meiotic segregation in ejaculated sperm of chromosomal translocation carrier patients.Human Reproduction,2006,21:685-693.

30Lourdes M，Vicente G，Enrique S，et al.Increased Aneuploidy Rate in Sperm With Fragmented DNA as Determined by the Sperm Chromatin Dispersion (SCD) Test and FISH Analysis.J Androl,2007,28:38-49.

31Garolla A,Fortini D,Menegazzo M,et al.High-power microscopy for selecting spermatozoa for ICSI by physiological status.Reproductive Biomedicine Online,2008,17:610-616.

32Machev N,Gosset P,Viville S.Chromosome abnormalities in sperm from infertile men with normal somatic karyotypes: teratozoospermia.Cytogenet Genome Res,2005,111:352-357.

33Menkveld R,Wong WY,Lombard CJ,et al.Semen parameters, including WHO and strict criteria morphology, in a fertile and subfertile population: an effort towards standardization of in-vivo thresholds.Human Reproduction,2001,16:1165-1171.

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.19.041

730050蘭州市，甘肅省婦幼保健院

陜文生，730050蘭州市，甘肅省婦幼保健院；

E-mail：swsgsfy@163.com

R 893.4

A

1002-7386(2016)19-3017-04

2016-02-25)

項(xiàng)目來(lái)源：甘肅省中醫(yī)藥管理局科研項(xiàng)目(編號(hào)：GZK-2014-48)