劉 芳，歐陽慧子，柴士偉，王 強(qiáng)，馬 融（天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193）

GC法檢測(cè)72種中藥飲片有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量

劉 芳＊，歐陽慧子，柴士偉，王 強(qiáng)，馬 融（天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193）

目的：建立檢測(cè)多種中藥飲片有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的方法。方法：采用氣相色譜法。色譜柱為Agilent HP-5彈性石英毛細(xì)管柱，檢測(cè)器為63Ni源電子捕獲檢測(cè)器，進(jìn)樣口溫度為250Ⅱ，檢測(cè)器溫度為300Ⅱ，程序升溫，載氣為高純氮，載氣流速為1 ml/min，進(jìn)樣量為5 μl，不分流進(jìn)樣。結(jié)果：α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍均為0.01～0.20 μg/ml（r分別為0.999 5、0.996 4、0.999 6、0.993 7、0.999 3、0.999 7、0.999 1、0.998 3）；定量限分別為0.015、0.02、0.01、0.02、0.01、0.01、0.02、0.62 μg/ml；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD＜3.0%；加樣回收率為71.2%～109.2%（RSD為4.2%～9.8%，n＝9）。72種中藥飲片有機(jī)氯農(nóng)藥殘留總體檢出率為66.7%，總體符合標(biāo)準(zhǔn)率為87.5%。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于多種中藥飲片有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)。

氣相色譜法；有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量；中藥飲片

有機(jī)氯農(nóng)藥是應(yīng)用最早、最廣泛的一類殺蟲劑，大多數(shù)具有性質(zhì)穩(wěn)定、難降解和易蓄積于人體內(nèi)產(chǎn)生致癌、致畸、致突變作用等特點(diǎn)[1-2]。雖然我國在20世紀(jì)80年代后期已禁用這類農(nóng)藥，但不科學(xué)的使用已造成有機(jī)氯農(nóng)藥在土壤中大量殘留，使中藥最終難逃農(nóng)藥的污染[3-5]。中藥飲片是依照中醫(yī)藥理論，經(jīng)加工炮制后直接應(yīng)用于臨床的中藥，是中醫(yī)藥療效的基礎(chǔ)。因此，保障中藥飲片質(zhì)量是確保臨床用藥安全、有效的關(guān)鍵[6]。近年來，中藥農(nóng)藥殘留超標(biāo)被頻頻報(bào)道，中藥的質(zhì)量安全不斷受到質(zhì)疑，嚴(yán)重制約中藥及相關(guān)產(chǎn)品的臨床應(yīng)用[7-8]。本試驗(yàn)采用氣相色譜法（GC）測(cè)定了我院藥房72種常用中藥飲片有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量，以期為我院中藥飲片質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

6890型GC儀，包括63Ni源電子捕獲檢測(cè)器（63Ni-ECD）、GC工作站（美國Agilent公司）；AX205型十萬分之一電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；Milli-Q型超純水制備儀（美國Millipore公司）；3K15型高速離心機(jī)（美國Sigma公司）；XW-80A型渦旋混合器（上海滬西分析儀器廠）；RE-5250型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮科學(xué)儀器廠）；N-EAVPTM111型氮吹儀（美國Organomation公司）；AS10200A型超聲清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司，功率：250 W，頻率：40 kHz）。

1.2 試劑

六六六（BHC，包括α-BHC、β-BHC、γ-BHC和δ-BHC 4種同系物）、滴滴涕（DDT，包含PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD和PP′-DDT 4種同系物）標(biāo)準(zhǔn)品均購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所，質(zhì)量濃度均為1 000 mg/L；濃硫酸為優(yōu)級(jí)純，丙酮、正己烷、二氯甲烷、石油醚（60～90Ⅱ）、無水硫酸鈉（研細(xì)，450Ⅱ烘4 h）、氯化鈉（研細(xì)，150Ⅱ烘4 h）均為分析純，水為超純水。

1.3 飲片

本試驗(yàn)選取我院中藥房常用、重要和有代表性的中藥飲片共72種，所選擇的飲片包括不同的用藥部位，如根和根莖類、莖木類、皮類、全草類、花類、果實(shí)和種子類。品種如下：三七、人參、浙貝母、百部、川貝母、百合、黃芩、丹參、生黃芪、炙甘草、防己、郁金、桔梗、木香、生白術(shù)、麩炒蒼術(shù)、白及、熟大黃、赤芍、白芍、黃連、貓爪草、茜草、北沙參、防風(fēng)、柴胡、當(dāng)歸、前胡、白芷、川芎、羌活、板藍(lán)根、山藥、地骨皮、牡丹皮、白鮮皮、枳殼、陳皮、青皮、佛手、化橘紅、柏子仁、五味子、預(yù)知子、黑芝麻、木瓜、胖大海、覆盆子、枸杞子、大棗、蓮子心、麩炒芡實(shí)、蓮子、木蝴蝶、金銀花、佛手花、菊花、代代花、款冬花、石斛、酒蓯蓉、鉤藤、槲寄生、忍冬藤、薄荷、荊芥、大火草、白花蛇舌草、白芨、炒麥芽、六神曲、秦皮，經(jīng)我院馬瑛主任藥師鑒定均為真品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent HP-5彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm× 0.25 μm）；檢測(cè)器：63Ni-ECD；進(jìn)樣口溫度：250Ⅱ；檢測(cè)器溫度：300Ⅱ；升溫程序：初始90Ⅱ保持1 min，以40Ⅱ/min升到170Ⅱ保持1 min，以2Ⅱ/min升到190Ⅱ保持1 min，以10Ⅱ/min升到250Ⅱ保持1 min；載氣：高純氮（純度＞99.999%）；載氣流速：1 ml/min；進(jìn)樣量：5 μl；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液 分別量取BHC、DDT標(biāo)準(zhǔn)品適量，各置于10 ml量瓶中，加正己烷定容，制成質(zhì)量濃度均為10 μg/ml的單一標(biāo)準(zhǔn)品溶液。量取上述單一標(biāo)準(zhǔn)品溶液各0.2 ml，置于同一10 ml量瓶中，加正己烷定容，制成α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT質(zhì)量濃度均為0.2 μg/ml的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.2.2 供試品溶液 參照2015年版《中國藥典》方法[9]，于60Ⅱ下干燥樣品4 h，粉碎成細(xì)粉，取約2 g，精密稱定，置于100 ml具塞錐形瓶中，加水20 ml浸泡過夜，精密加丙酮40 ml，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷后再次稱定質(zhì)量，用丙酮補(bǔ)足減失的質(zhì)量，再加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 ml，稱定質(zhì)量，超聲處理15 min，放冷后再次稱定質(zhì)量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的質(zhì)量，靜置后分層，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無水硫酸鈉的100 ml具塞錐形瓶中，放置4 h。精密量取上述溶液35 ml，于40Ⅱ水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90Ⅱ）反復(fù)操作至二氯甲烷和丙酮除凈（一般4次），用石油醚（60～90Ⅱ）溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml具塞離心管中，加石油醚（60～90Ⅱ）精密稀釋至5 ml，小心加入硫酸1 ml，振搖1 min，以半徑為12.5 cm、3 000 r/min離心10 min，精密量取上清液2 ml，置于濃縮瓶中用氮?dú)鈱⑷芤簼饪s至適量，加正己烷精密稀釋至1 ml，即得。

2.2.3 空白對(duì)照溶液 缺樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法從“精密加

丙酮40 ml……”開始操作，制備空白對(duì)照溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液、空白對(duì)照溶液各適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜，詳見圖1。結(jié)果顯示，其他成分均不干擾α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT的檢測(cè)。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，置于10 ml量瓶中，加正己烷制成各待測(cè)農(nóng)藥殘留成分質(zhì)量濃度分別均為0.01、0.02、0.05、0.08、0.10、0.15、0.20 μg/ml的系列混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密量取上述系列混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液各5 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以待測(cè)農(nóng)藥殘留成分質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程與線性范圍，詳見表1。

2.5 定量限（LOQ）考察

分別精密量取“2.2.1”項(xiàng)下混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，倍比稀釋，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得LOQ，詳見表1。

2.6 精密度試驗(yàn)

圖1 氣相色譜圖A.空白對(duì)照；B.混合標(biāo)準(zhǔn)品；C.供試品（當(dāng)歸，批號(hào)：1501076）；1.α-BHC；2.β-BHC；3.γ-BHC；4.δ-BHC；5.PP′-DDE；6.OP′-DDT；7.PP′-DDD；8.PP′-DDTFig 1 GC chromatograms1.blank samples；2.mixed standards；3.test samples（Fritillaria thunbergii，batch number：1501076）；1.α-BHC；2.β-BHC；3.γ-BHC；4.δ-BHC；5.PP′-DDE；6.OP′-DDT；7.PP′-DDD；8.PP′-DDT

表1 回歸方程、線性范圍與定量限Tab 1 Regression equation，linear range and limit of quantitation

取“2.2.1”項(xiàng)下混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，加正己烷制成各待測(cè)農(nóng)藥殘留成分質(zhì)量濃度均為0.10 μg/ml的溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT峰面積的RSD分別為1.90%、1.75%、1.61%、2.08%、0.79%、2.87%、1.84%、1.83%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（當(dāng)歸，批號(hào)：1501076）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT峰面積的RSD分別為1.08%、1.95%、2.06%、2.02%、0.79%、1.76%、1.64%、1.85%（n＝6），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品（當(dāng)歸，批號(hào)：1501076）適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT峰面積的RSD分別為1.99%、0.84%、2.46%、0.99%、1.82%、1.51%、1.95%、2.07%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品（當(dāng)歸，批號(hào)：1501076）適量，共9份，分別加入低、中、高質(zhì)量的各標(biāo)準(zhǔn)品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表2。

2.10 樣品農(nóng)藥殘留量測(cè)定

取72批樣品各適量，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算各待測(cè)農(nóng)藥殘留成分的含量，結(jié)果見表3。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2 Results of recovery test（n＝9）

表3 樣品農(nóng)藥殘留量測(cè)定結(jié)果（n＝3，μg/kg）Tab 3 Determination results of organochlorine pesticide residues in samples（n＝3，μg/kg）

續(xù)表3Continued tab 3

3 討論

本試驗(yàn)中，筆者對(duì)我院72種中藥飲片有機(jī)氯農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)，樣品覆蓋了大多數(shù)的中藥產(chǎn)地，包含了臨床常用的中藥品種，所用GC法穩(wěn)定、靈敏度高、專屬性強(qiáng)。飲片中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留均有不同程度的檢出，其中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留總體檢出率為66.7%，∑BHC的檢出率為25.0%，而∑DDT的檢出率為56.9%。我國控制中藥材中農(nóng)藥殘留的標(biāo)準(zhǔn)主要為2015年版《中國藥典》，對(duì)于∑BHC和∑DDT的限量均規(guī)定≤200 μg/kg，按此限量規(guī)定，所有飲片樣品均未超標(biāo)，即符合國家標(biāo)準(zhǔn)。而《藥用植物及制劑進(jìn)出口綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》[10]關(guān)于藥用植物原料與制劑的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留限量規(guī)定為∑BHC和∑DDT均≤100 μg/kg，按此限量規(guī)定，∑BHC達(dá)標(biāo)的飲片樣品有68個(gè)品種，品種合格率為94.4%；∑DDT達(dá)標(biāo)的飲片樣品有67個(gè)品種，品種合格率為93.1%，合格率均較高。由結(jié)果可知，根和根莖類藥材飲片樣品中的BHC類農(nóng)藥殘留較嚴(yán)重，如三七、人參、麩炒蒼術(shù)、熟大黃、板藍(lán)根等，果實(shí)類（如陳皮）和花類（如金銀花）等容易受到DDT類農(nóng)藥污染，這與文獻(xiàn)的報(bào)道結(jié)果一致[11-14]。由本研究結(jié)果可知，盡管中藥飲片中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的總體檢出率較高，但污染嚴(yán)重的飲片比例非常低，均未超過2015年版《中國藥典》規(guī)定的限量；并且，符合國家進(jìn)出口標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的有63個(gè)品種，占全部的87.5%。因此，雖然有機(jī)氯農(nóng)藥殘留現(xiàn)象較為普遍，但并沒有媒體宣傳的那么嚴(yán)重。

隨著國內(nèi)外對(duì)中藥飲片質(zhì)量要求的提高和對(duì)農(nóng)藥殘留檢測(cè)的要求越加嚴(yán)格，中藥飲片農(nóng)藥殘留問題也引起我院的高度重視。筆者希望通過建立一套簡(jiǎn)便、可靠的中藥飲片農(nóng)藥殘留量測(cè)定方法，加強(qiáng)檢驗(yàn)監(jiān)督，對(duì)飲片質(zhì)量嚴(yán)格把關(guān)，確保中藥飲片的質(zhì)量，進(jìn)而保證患者用藥安全、有效。

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（編輯：張 靜）

Determination of Organochlorine Pesticide Residues in 72 Chinese Herbal Medicine Tablets by GC

LIU Fang，OUYANG Huizi，CHAI Shiwei，WANG Qiang，MA Rong（The First Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the detecting of organochlorine pesticide residues in 72 Chinese herbal medicine tablets.METHODS：The column was Agilent HP-5 elastic quartz capillary column，detector was63Ni source electron capture detector，the inlet temperature was 250Ⅱand the detector temperature was 300Ⅱ，temperature programmed，carrier gas was highpurity nitrogen，flow rate of carrier gas was 1 ml/min，and the injection volume was 5 μl，splitless injection.RESULTS：The linear range were 0.01-0.20 5 μg/ml for α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP′-DDE、OP′-DDT、PP′-DDD、PP′-DDT（r were 0.999 5，0.996 4，0.999 6，0.993 7，0.999 3，0.999 7，0.999 1，0.998 3）；Limit of quantitation were 0.015，0.02，0.01，0.02，0.01，0.01，0.02，0.62 μg/ml；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 3.0%；recovery was 71.2%-109.2%，RSD was 4.2%-9.8%（n＝9）.The overall detection rate of the organochlorine pesticides was 66.7%，and the overall compliance rate was 87.5%. CONCLUSIONS：The method is simple with good precision，stability and reproducibility，and can be used for the detection of organochlorine pesticide residues in Chinese herbal medicine tablets.

Gas chromatography；Organochlorine pesticide residues；Chinese herbal medicine tablet

R927

A

1001-0408（2016）36-5147-04

2016-04-18

2016-06-23）

＊副主任藥師。研究方向：中藥質(zhì)量控制。電話：022-27432772。E-mail：tjcs008@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2016.36.34