盧敏杰

（中山市南頭鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，廣東 中山 528427）

異種家禽紅細(xì)胞對禽流感抗體檢測的影響

盧敏杰

（中山市南頭鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，廣東 中山 528427）

為提高家禽對禽流感的免疫力，防治各種獸禽類傳染疫病對人體造成影響，加強(qiáng)家禽動物疫苗的檢測工作具有重大意義。通過對家禽抗體的檢測，了解家禽疫苗的效果，及時洞察家禽疫病狀況，并作出反應(yīng)，本文就是在了解家禽紅細(xì)胞對禽流感抗體檢測影響前提下，提高家禽群體保護(hù)能力，避免禽流感對家禽養(yǎng)殖生產(chǎn)和人們身體健康造成影響。

禽流感；紅細(xì)胞；家禽；抗體檢測

根據(jù)多年來的實(shí)際案例得出，禽流感可通過家禽與人混合感染，繼而給人類的生命安全帶來嚴(yán)重威脅。為提高動物免疫力，避免高發(fā)致病性禽流感發(fā)生，許多疫苗被廣泛的應(yīng)用于家禽養(yǎng)殖中，其中，目前使用最廣泛的方法就是血清學(xué)抗體檢測，通過提取家禽的血清進(jìn)行試驗(yàn)室檢測，對結(jié)果進(jìn)行分析，了解家禽的健康狀況。這樣有利于養(yǎng)禽者及時了解家禽的免疫情況，并作出正確的判斷和決策，保證養(yǎng)禽業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展。因此，加強(qiáng)家禽禽流感血清抗體的檢測技術(shù)，對我國養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展具有重大意義。

1 家禽血清抗體檢測試驗(yàn)

一般在檢測家禽血清抗體實(shí)驗(yàn)時，按照國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，在進(jìn)行血凝、血凝抑制試驗(yàn)時，用雞紅細(xì)胞懸液作為整個試驗(yàn)的指示細(xì)胞。在以往的試驗(yàn)中，如果使用不同種的家禽紅細(xì)胞懸液來進(jìn)行試驗(yàn)，會產(chǎn)生一種非特異性的凝集反應(yīng)，但是，目前對于這種反應(yīng)會不會造成檢測結(jié)果的偏差還不得而知，這個問題，也就是本文所要研究的重點(diǎn)。

1.1 材料準(zhǔn)備

待檢血清：選擇廣東省8個大型鴨廠采集80份鴨血清，4個大型雞場采集40份雞血清。

試劑：禽流感病毒H5亞型血凝抑制試驗(yàn)抗原（哈獸研）。

器材準(zhǔn)備：5離心管、燒杯、酒精棉、5～50 μl移液器、110°V型微量血凝板、ml注射器、V型槽。

家禽紅細(xì)胞懸液的處理和保存：按照國家的有關(guān)國標(biāo)規(guī)定，采集的家禽血液試劑要求為健康沒有感染禽流感的公雞和公鴨血，3羽的數(shù)量，采集后用相同體積的阿氏液與其混合，然后以1 000 r/min離心10 mim的要求使用PH7.2、0.01 mol/L PBS液進(jìn)行洗滌，共洗滌三次。之后會看見試劑上層有一層白細(xì)胞的薄膜，小心用吸管將這層薄膜和清液吸走干凈，最后在添加PBS按照1%的比例配成紅細(xì)胞懸液。完成后，在4 ℃的溫度中進(jìn)行保存，作為之后試驗(yàn)的重要試劑。

1.2 試驗(yàn)步驟

血凝試驗(yàn)步驟：在事先準(zhǔn)備好的血凝板中每個孔中滴入25 μl的PBS，再在第一個孔加入標(biāo)準(zhǔn)抗原：25 pl，從第一個孔到十一孔都進(jìn)行倍比稀釋，之后在每個孔再次加入25 pl的PBS，然后依次每個孔加入25 pl處理好的紅細(xì)胞。將配置試劑混合，放置室內(nèi)，正常溫度40分鐘后讀取數(shù)值。

配置4個單位的禽流感病毒抗原，用于回滴試驗(yàn)。

血凝抑制試驗(yàn)步驟：準(zhǔn)備好的血凝板，在最后一孔即十二孔內(nèi)加入50 pl的PBS，剩余十一孔內(nèi)分別加入25 pl PBS。然后再在1～11孔中加入待檢測的血清，在1～10孔進(jìn)行血清倍比稀釋，再將4個單位的病毒抗原液均勻混入1～11孔中，室內(nèi)放置30 min，在讀取試驗(yàn)數(shù)值。

1.3 試驗(yàn)結(jié)果分析

根據(jù)之前的試驗(yàn)結(jié)果，可以知道在血凝抑制試驗(yàn)中，用同種家禽的紅細(xì)胞檢測其血清時，都沒出現(xiàn)特異性凝集反應(yīng)。比如，在用雞的紅細(xì)胞檢驗(yàn)雞的血清時，檢測結(jié)果正常，沒出現(xiàn)特異性凝集反應(yīng)，用鴨的紅細(xì)胞檢測鴨的血清時，結(jié)果也是正常的。但在用不是同一種類的家禽紅細(xì)胞檢測另一種家禽血清時，比如試驗(yàn)中用雞的紅細(xì)胞檢驗(yàn)鴨血清，用鴨的紅細(xì)胞檢驗(yàn)雞血清時，都出現(xiàn)了不同程度的非特異性凝集反應(yīng)。其中，這種非特異性凝集反應(yīng)對試驗(yàn)成果的影響有較大的差異，影響的重要因素也就是抗體的滴度，滴度較高時，對檢測結(jié)果的影響較小，但是滴度不夠時，對結(jié)果的影響明顯。因此，在進(jìn)行異種家禽紅細(xì)胞對禽流感抗體檢測時，用同種家禽的紅細(xì)胞懸液進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，能減少非特異性因子對結(jié)果的影響，使結(jié)果更貼近事實(shí)。

2 家禽禽流感抗體檢測分析

在之前血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果得出，為保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，最好使用同種家禽紅細(xì)胞懸液來進(jìn)行檢測，能減少非特異性因子的影響。這在科學(xué)界也是被普遍認(rèn)同的原理，雞紅細(xì)胞懸液本就是為了檢驗(yàn)雞的禽流感，它的研究也是根據(jù)雞的紅細(xì)胞生產(chǎn)出來，所以不同的生物物種禽流感檢測用不同的禽流感懸液是正確的。而異種家禽由于紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)的不同，在檢測時也會出現(xiàn)細(xì)微的變化，最終造成檢測結(jié)果的不一樣。對于上面我們做的異種家禽紅細(xì)胞懸液在面對血清時產(chǎn)生的非特異性凝聚反應(yīng)，最后得出的結(jié)果是影響禽流感抗體的檢測結(jié)果，這也充分說明了用兩種紅細(xì)胞檢驗(yàn)抗體時，同種紅細(xì)胞懸液是最有效的實(shí)驗(yàn)體。在我們做研究的兩種紅細(xì)胞懸液中，雖然同種家禽紅細(xì)胞懸液和異種家禽紅細(xì)胞懸液的檢測只有在非特異性凝聚方面有著細(xì)微的差別，但是這些差別在抗體的研究中是非常重要的，這些細(xì)微的差別在家禽抗體產(chǎn)生時也許會發(fā)生巨大的變化，最終造成一些不可預(yù)測的結(jié)果，對于這種不可預(yù)測的結(jié)果，并不是我們在抗體研究中想看到的，這也證明了只有同種家禽的紅細(xì)胞懸液才能適用與抗體的研究。

3 總結(jié)

目前，我國關(guān)于異種家禽紅細(xì)胞懸液檢測抗體的研究相對較少，在家禽研究方面和國外的一些研究機(jī)構(gòu)還是有差距的。但是在對于異種家禽紅細(xì)胞懸液對于抗體的檢測上面已經(jīng)走出了一小步，我們對于家禽細(xì)胞以及抗體的研究已經(jīng)證明我們的實(shí)力，文中提到的實(shí)驗(yàn)中證明了異種家禽紅細(xì)胞懸液對于抗體還是有比較大的影響的，由于它的紅細(xì)胞的原因，在檢測時會產(chǎn)生非特異性凝聚反應(yīng)，這對于整個實(shí)驗(yàn)結(jié)果都有著比較大的影響，所以說，在檢測抗體時只有用同種家禽的紅細(xì)胞懸液才能達(dá)到最好的檢測效果。

［1］國家標(biāo)準(zhǔn)局.GB/T 18936-2003.高致病性禽流感診斷技術(shù)［S］.

［2］彭英波.山區(qū)家禽禽流感免疫抗體監(jiān)測與分析［M］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2014，（5）.

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-799X（2016）08-0097-01

盧敏杰（1986-），男，廣東中山人，助理獸醫(yī)師，主要從事疫病監(jiān)測、動物防疫工作。