于 丹 遼寧省撫順市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 113006

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室ELISA檢測(cè)中應(yīng)注意的問(wèn)題

于 丹 遼寧省撫順市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 113006

本文主要從ELISA檢測(cè)的概述入手，對(duì)ELISA檢測(cè)中需要注意的問(wèn)題，從血樣采取與處理、回溫、加樣、孵育、洗滌、顯色和保護(hù)等方面進(jìn)行了分析。

ELISA檢測(cè)；獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室；問(wèn)題

在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室中，ELISA檢測(cè)工作的核心問(wèn)題就在于操作的精準(zhǔn)性，所以必須在血樣采取與處理、回溫、加樣、孵育、洗滌、顯色和保護(hù)工作中對(duì)其檢測(cè)的質(zhì)量進(jìn)行控制，才能更好地促進(jìn)這一工作的重要性彰顯。

1 ELISA檢測(cè)的概述

ELISA檢測(cè)，也就是酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定的簡(jiǎn)稱(chēng)。在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室中，ELISA檢測(cè)的內(nèi)容包括豬瘟抗體、藍(lán)耳病抗體和口蹄疫抗體檢測(cè)。但是在檢測(cè)過(guò)程中，為了確保檢測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)性，就必須注意操作方法的正確性。

2 需要注意的問(wèn)題分析

（1）在血樣采取與處理過(guò)程中應(yīng)確保采樣輕柔，預(yù)防出現(xiàn)溶血的情況，這主要是由于紅細(xì)胞在溶解過(guò)程中所釋放的物質(zhì)中具有過(guò)氧化物酶活性的特點(diǎn)，進(jìn)而對(duì)檢測(cè)結(jié)果帶來(lái)影響。而且標(biāo)本存儲(chǔ)的時(shí)間較長(zhǎng)就會(huì)導(dǎo)致LGG聚合為多聚體，進(jìn)而出現(xiàn)本底過(guò)深和假陽(yáng)性的出現(xiàn)，所以需要及時(shí)對(duì)血清樣板進(jìn)行測(cè)定，并將其放在4℃的保溫箱中。若測(cè)定的時(shí)間超過(guò)3天，應(yīng)將其低溫冰存。

（2）在回溫過(guò)程中應(yīng)盡可能地采取低溫，一般回溫溫度只要確保洗滌液的結(jié)晶在充分搖動(dòng)的情況下可以完全溶解即可。

（3）在加樣過(guò)程中，由于其涉及的環(huán)節(jié)較多，所以在采用微量加樣器時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照規(guī)定的加入量，將其加入到板孔之中，而且在加樣過(guò)程中應(yīng)確保加入的樣品處于板孔的底部。這樣就能有效預(yù)防在孔壁上存在的樣品，預(yù)防樣品濺出的同時(shí)還要避免其出現(xiàn)氣泡。而在加入不同的物質(zhì)時(shí)應(yīng)更換吸嘴，有效地預(yù)防和避免出現(xiàn)交叉感染的情況。但是在顯色過(guò)程中，主要是采取多道微量加樣器，這樣才能提高加液的速度，從而更好地統(tǒng)一加樣和顯色的時(shí)間，盡可能地將檢測(cè)的誤差降到最低。

（4）在孵育過(guò)程中，由于其在ELISA檢測(cè)中需要一定的時(shí)間，所以其在這一過(guò)程中始終處于恒溫狀態(tài)，具體的做法就是在恒溫箱中放置ELISA板。同時(shí)還要利用封板條將反應(yīng)孔封住，嚴(yán)禁將反應(yīng)板疊放，這樣就能夠有效地預(yù)防其蒸發(fā)，同時(shí)又能夠確保每個(gè)反應(yīng)板的溫度快速平衡，盡可能地確保溫育溫度與溫育時(shí)間的精準(zhǔn)性。

（5）由于洗滌直接影響ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，因此要注重洗滌工作的開(kāi)展，通過(guò)洗滌將ELISA分離游離，同時(shí)利用與ELISA結(jié)合的酶標(biāo)記物，將在板孔內(nèi)殘留的物質(zhì)清除，這樣在反應(yīng)時(shí)就能夠避免這些物質(zhì)帶來(lái)的干擾。首先是預(yù)防由于血液凝固導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn)，因?yàn)檠喝裟滩蝗?，將存在吸附纖維的情況，這樣洗板不干凈，就會(huì)導(dǎo)致一些非固相的殘留酶的形成，最終導(dǎo)致非特異性的顯色效果受到影響。而且當(dāng)顯色很深時(shí)，容易將其錯(cuò)誤地認(rèn)為屬于強(qiáng)陽(yáng)性。其次是在洗液過(guò)程中，盡可能地在臨時(shí)使用之前配置新鮮的洗液，預(yù)防由于較長(zhǎng)的放置時(shí)間而出現(xiàn)渾濁的絮狀物，否則就會(huì)出現(xiàn)花板和堵孔的情況。因而在洗板機(jī)使用過(guò)程中應(yīng)對(duì)其間隔的時(shí)間和洗板液的使用量進(jìn)行嚴(yán)格控制。最后是在拍板過(guò)程中，還應(yīng)將殘余水分拍掉，但是應(yīng)輕拍輕打，盡可能地減少拍打次數(shù)。

（6）在顯色之后，應(yīng)在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)利用酶標(biāo)儀及時(shí)讀取比色的情況，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行精確判斷，這樣才能確保顯色的質(zhì)量。

（7）在保護(hù)過(guò)程中，由于TMB和OPD具有較強(qiáng)的致癌性，因而在這一檢測(cè)工作中，在操作時(shí)還應(yīng)注意影響檢測(cè)人員安全的因素，所以必須在檢測(cè)過(guò)程中規(guī)范每項(xiàng)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)和流程，強(qiáng)化檢測(cè)人員的管理，確保整個(gè)過(guò)程的安全。

3 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室ELISA檢測(cè)工作中，需要注意的問(wèn)題較多，尤其是在血樣采取與處理、回溫、加樣、孵育、洗滌、顯色和保護(hù)等7個(gè)方面，確保檢測(cè)的精準(zhǔn)性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性。

[1]曲百友,王劍.獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室ELISA檢測(cè)中應(yīng)注意的問(wèn)題[J].山東畜牧獸醫(yī),2014,05:66.

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