計敏　王建蔚　藍(lán)顯明　于林芳　蘭春燕

不同亞型腸易激綜合征患者腸黏膜T淋巴細(xì)胞亞群的變化

計敏王建蔚藍(lán)顯明于林芳蘭春燕

目的：觀察不同亞型腸易激綜合征（IBS）患者腸黏膜T淋巴細(xì)胞亞群變化，探討IBS細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的變化及其可能的發(fā)病機(jī)制。方法：按照羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)選取腹瀉型（IBS-D組）、便秘型（IBS-C組）及混合型（IBS-M組）IBS患者及正常對照組各20例，采用S-P免疫組化方法檢測其結(jié)腸黏膜CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞水平，并對比分析。結(jié)果：IBS-D組腸黏膜CD3+細(xì)胞明顯高于其他三組（P＜0.01），且IBS-M組與IBS-C組及對照組相比也有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；IBS-D組CD4+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值均顯著低于其他三組（P＜0.01），但I(xiàn)BS-C組、IBS-M組和對照組之間相比無統(tǒng)計學(xué)意義；CD8+細(xì)胞各組無顯著性差別。結(jié)論：免疫調(diào)節(jié)異常在腹瀉型IBS的發(fā)病中起重要作用，在其他亞型IBS中這種免疫調(diào)節(jié)異常并沒有表現(xiàn)得很明顯，可能存在另外的發(fā)病機(jī)制。

腸易激綜合征，亞型，T淋巴細(xì)胞亞群

作者單位：518112廣東 深圳，深圳市龍崗區(qū)第二人民醫(yī)院消化內(nèi)科（計敏、藍(lán)顯明、于林芳），病理科（王建蔚），中醫(yī)科（蘭春燕）

腸易激綜合征（Irritable Bowel Syndrome，IBS）是一種十分常見的腸道功能紊亂性疾病。已有研究發(fā)現(xiàn)IBS患者腸道黏膜內(nèi)的淋巴細(xì)胞與正常人有所不同，提示IBS的發(fā)病可能與免疫有關(guān)，但國內(nèi)外研究結(jié)果不盡一致。本研究通過觀察不同亞型IBS患者腸道黏膜T淋巴細(xì)胞亞群變化，從而探討IBS發(fā)病的免疫機(jī)制。

1　對象和方法

1.1研究對象抽取2013年1月至2014年12月在我院消化內(nèi)科門診、病房及腸道門診的不同亞型IBS患者共60例，IBS診斷標(biāo)準(zhǔn)按照羅馬Ⅲ標(biāo)準(zhǔn)［1］，其中腹瀉型（IBS-D組）、便秘型（IBS-C組）及混合型（IBS-M組）各20例，病程1～10年，均經(jīng)生化、內(nèi)鏡、B超、X線、CT等影像學(xué)檢查，排除腸道器質(zhì)性病變、感染性疾病、免疫疾病、其他重大內(nèi)科系統(tǒng)疾病及胃腸道外科手術(shù)史。另隨機(jī)選取我院體檢證實為健康者20例為對照組。各組的年齡及性別組成經(jīng)統(tǒng)計分析無明顯差異（P＞0.05）。

1.2研究方法所有的實驗對象均在結(jié)腸鏡下于結(jié)腸直乙交界處取活檢標(biāo)本2～3塊，立即放入10%中性福爾馬林固定液中，固定后制成石蠟切片。S-P法免疫組化檢測黏膜CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞，具體步驟：①石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟、乙醇梯度脫水后，浸泡于蒸餾水中；②抗原熱修復(fù)；③按SP免疫組化染色步驟進(jìn)行。S-P試劑盒及CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體購自福州邁新公司。

1.3結(jié)果判讀陽性細(xì)胞為被染成棕黑色的、體積偏大、胞質(zhì)豐富的淋巴細(xì)胞。記錄每個高倍視野（100倍）下的陽性細(xì)胞數(shù)，每張切片觀察10個視野，計算出平均每個視野陽性細(xì)胞數(shù)。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0版軟件行t檢驗，P＜

0.05為檢驗水準(zhǔn)。

2　結(jié)果

免疫組化結(jié)果顯示，IBS-D組腸黏膜CD3+細(xì)胞明顯高于其他三組（P＜0.01），且IBS-M組與IBS-C組及對照組相比也有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；IBS-D組CD4+細(xì)胞、CD4+/CD8+比值均顯著低于其他三組（P＜0.01），但I(xiàn)BS-C組、IBS-M組和對照組之間相比無統(tǒng)計學(xué)意義；CD8+細(xì)胞各組無顯著性差別。見表1。

表1　不同亞型IBS患者結(jié)腸黏膜T淋巴細(xì)胞亞群水平（±s）

注:*P＜0.01，與IBS-D組比較；#P＜0.05，與IBS-M組比較

組別IBS-D組IBS-C組IBS-M組對照組CD4+/CD8+1.37±0.11 1.70±0.09*1.78±0.21*1.68±0.10*n 20 20 20 20 CD3+52.5±11.0 42.2±4.1*#45.2±4.7*41.1±6.5*#CD4+26.0±3.5 29.7±5.5*29.4±4.4*33.1±9.3*CD8+18.3±3.5 19.3±3.7 18.5±1.6 17.7±1.9

3　討論

T淋巴細(xì)胞亞群是提示機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)。CD3+是T細(xì)胞所特有的膜表面分子，常作為鑒定T淋巴細(xì)胞的標(biāo)志。CD4+主要分布于T細(xì)胞的輔助細(xì)胞誘導(dǎo)亞群表面，具有輔助T細(xì)胞的功能。而CD8+分布于抑制性T淋巴細(xì)胞（T s）和殺傷性T淋巴細(xì)胞（T c）表面，具有細(xì)胞毒性T細(xì)胞的功能。二者是實現(xiàn)免疫正負(fù)調(diào)節(jié)的兩類截然相反的免疫細(xì)胞。CD4+/ CD8+比值是反映T淋巴細(xì)胞功能狀態(tài)的重要指標(biāo)。不同的淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量和功能出現(xiàn)異常時，機(jī)體就有可能出現(xiàn)免疫紊亂并發(fā)生一系病理變化。

IBS是最常見的消化系統(tǒng)疾病之一，其發(fā)病機(jī)制尚不明確，一般認(rèn)為與精神、飲食、遺傳、胃腸道動力障礙、腸道菌群失調(diào)等因素有關(guān)。目前，越來越多研究認(rèn)為免疫異常與IBS的發(fā)病密切相關(guān)，腸道免疫異?？赡茉贗BS的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。然而現(xiàn)有的相關(guān)研究結(jié)果不盡一致。Chadwick等［2］的研究結(jié)果顯示，IBS患者結(jié)腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞、固有層CD3+、CD25+T淋巴細(xì)胞數(shù)量增加。還有研究［3］發(fā)現(xiàn)，IBS患者腸道中T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯增多，其中以CD3+、CD4+以及CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量增加最為明顯。然而，Holmén等［4］的研究發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比，IBS患者腸黏膜中CD4+、CD25+T淋巴細(xì)胞數(shù)量無明顯差異。在IBS患者外周血的T淋巴細(xì)胞亞群檢測中也得出了有差異的甚至是相反的研究結(jié)果［5，6］。這些研究并沒有討論不同亞型IBS患者腸黏膜T細(xì)胞的改變，因此將IBS患者按照亞型來分組，以期明確不同亞型IBS患者腸黏膜T淋巴細(xì)胞變化。研究發(fā)現(xiàn)，腸黏膜T淋巴細(xì)胞亞群的變化主要發(fā)生于IBS-D組患者，主要表現(xiàn)為CD3+細(xì)胞明顯增高，CD4+細(xì)胞及CD4+/CD8+比值均顯著低于其他三組，而IBS-C組、IBS-M組和正常人群無太大差別。已知CD4+、CD8+細(xì)胞與多種炎癥介質(zhì)有關(guān)，CD4+、CD8+細(xì)胞的改變可能會影響細(xì)胞因子的變化，從而引起相應(yīng)的生理或生化的異常，可能對腸道的感覺、運(yùn)動功能產(chǎn)生一定的影響，在致病因素作用下隨即表現(xiàn)出一系列癥狀。在感染后腸易激綜合征（PI-IBS）的研究中同樣有學(xué)者發(fā)現(xiàn)IBS患者腸黏膜固有層T淋巴細(xì)胞、腸嗜鉻細(xì)胞的增多明顯，尤其在腹瀉型患者中更為多見，且CD4+/CD8+比例失調(diào)［7］。因此推測，免疫調(diào)節(jié)異常在腹瀉型IBS的發(fā)病中起重要作用，可能由于急性感染或感染后腸道的低度炎癥持續(xù)存在損傷腸道黏膜，使其通透性增加，腸黏膜下免疫系統(tǒng)的耐受機(jī)制被破壞，通過免疫-神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，產(chǎn)生IBS的腸道癥狀。在其他亞型IBS中這種免疫調(diào)節(jié)異常并沒有表現(xiàn)得很明顯，可能存在另外的發(fā)病機(jī)制。

［1］中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會胃腸動力學(xué)組.腸易激綜合征診斷和治療的共識意見［J］.中華全科醫(yī)師雜志，2008，5（7）:298-300.

［2］Chadwick VS，Chen W，Shu D，et al.Activation of the mucosal immune system in irritable bowel syndrome［J］.Gastroenterology，2002，122（7）: 1778-1783.

［3］Spiller RC，Jenkins D，Thornley JP，et al.Increased rectal mucosal enteroendocrine cells，T lymphocytes，and increased gut permeability following acute Campylobacter enteritis and in post-dysenteric irritable bowel syndrome［J］.Gut，2000，47（6）:804-811.

［4］Holmén N，Isaksson S，Simrén M，et al.CD4+CD25+regulatory T cells in irritable bowel syndrome patients［J］.Neurogastroenterol Motil，2007，19（2）:119-125.

［5］賈勇，王巧民，戴海明.腸易激綜合征T淋巴細(xì)胞亞群變化及其意義［J］.臨床消化病雜志，2002，14（2）:60-61.

［6］令狐恩強(qiáng)，楊云生.腸易激綜合征患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群分析［J］.中華消化雜志，2002，22（7）:423-425.

［7］Lee KJ，Kim YB，Kim JH，et al.The alteration of enterochromaffin cell，mast cell，and lamina propria T lymphocyte numbers in irritable bowel syndrome and its relationship with psychological f actors［J］.J Gastroenterol Hepatol，2008，23（11）:1689-1694.

A

1004-2725（2016）03-0195-03

深圳市科技創(chuàng)新項目（項目編號：JCYJ20140415112419066）

計敏，E-mail:bjjimin@163.com