鄭健 王莉 朱蓉 竺紅△

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏 銀川 750004；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院風(fēng)濕科，寧夏 銀川 750004)

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·實(shí)驗(yàn)研究·

原發(fā)性干燥綜合征患者外周血中IL-10和TGF-β1的表達(dá)水平及其臨床意義

鄭健1王莉2朱蓉2竺紅2△

(1.寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏 銀川 750004；2.寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院風(fēng)濕科，寧夏 銀川 750004)

目的 探討白細(xì)胞介素-10(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)在原發(fā)性干燥綜合征(pSS)發(fā)病中的作用。方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定56例pSS患者(pSS組)及39例健康體檢者(正常對(duì)照組)血清中IL-10和TGF-β1的表達(dá)水平，比較治療前、后pSS患者與正常健康對(duì)照組血清IL-10和TGF-β1表達(dá)水平之間的差異及相關(guān)性，并比較其與ESR、Ig、C3、C4之間的相關(guān)性。結(jié)果 pSS患者血清IL-10和TGF-β1表達(dá)水平在pSS患者中血清的表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組正常人(P<0.05)，經(jīng)治療后，其血清IL-10和TGF-β1表達(dá)水平較治療前均顯著減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，血清IL-10和TGF-β1表達(dá)水平呈正相關(guān)性(r=0.613，P<0.05)；血清IL-10和TGF-β1表達(dá)水平與ESR呈正相關(guān)性(r=0.592，P<0.05；r=0.316，P<0.05)。結(jié)論 IL-10和TGF-β1參與pSS的發(fā)病過程且與疾病活動(dòng)性相關(guān)。

轉(zhuǎn)化生長因子-β1； 白細(xì)胞介素-10； 干燥綜合征

原發(fā)性干燥綜合征 (pSS) 是一種以口干、眼干為特征，主要累及外分泌腺的慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病，可累及肺、腎和神經(jīng)系統(tǒng)等, 病理上以淋巴細(xì)胞浸潤為特征[1]。何春華等[2]報(bào)道由活化的免疫細(xì)胞和一些非免疫細(xì)胞經(jīng)刺激合成、分泌的炎性相關(guān)因子，在介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)方面發(fā)揮了重要的作用。調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞(Bregs)可以通過產(chǎn)生白細(xì)胞介素-10(IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)等負(fù)性免疫調(diào)節(jié)因子，介導(dǎo)免疫耐受，抑制免疫活性細(xì)胞的產(chǎn)生。本研究檢測(cè)了治療前后pSS患者外周血中IL-10和TGF-β1的表達(dá)水平改變，并分析其與ESR、Ig、C3、C4之間相關(guān)性，以初步了解其在pSS發(fā)病及進(jìn)程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年4月至2015年4月在寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院確診的56例pSS患者(pSS組)，均為初診或者未接受糖皮質(zhì)激素和免疫抑制劑治療，按照SS疾病活動(dòng)指數(shù)(SSDAI)計(jì)分對(duì)患者臨床活動(dòng)度進(jìn)行評(píng)估[3]，患者病情均處于活動(dòng)期。pSS組：男18例，女38例，年齡17～76歲，平均(54.4±12.8)歲。病程2個(gè)月至23年，平均(7±4)年。所有病例診斷均符合2002年干燥綜合征國際分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)感染；(2)腫瘤；(3)腎功能衰竭；(4)其他免疫性疾病。選擇同期體檢的39例健康者(正常對(duì)照組)，男性9例，女性30例，年齡13～74歲，平均(51.3±11.9)歲。均無自身免疫性疾病，無其他疾病史及自身免疫病家族史。pSS組與健康對(duì)照組性別、年齡、身高、體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)過寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，所有入選對(duì)象的家屬均知情并同意。

1.2 主要試劑與儀器 人IL-10、TGF-β1 ELISA試劑盒購武漢華美cusabio公司，酶標(biāo)儀購BioTek公司，HF 212UV CO2培養(yǎng)箱。

1.3 試驗(yàn)方法 無菌抽取晨空腹靜脈血2 mL分離血清，離心析出血清后300 μL/管分裝，置于-70 ℃冰箱凍存?zhèn)錅y(cè)。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中IL-10、TGF-β1的含量，嚴(yán)格按照試劑的說明書進(jìn)行操作。TGF-β1的活化：在檢測(cè)TGF-β1之前需要對(duì)血清進(jìn)行酸化和中處理，以激活血清中的TGF-β1。采用BioTek公司的酶標(biāo)儀檢測(cè)，在450 nm處測(cè)光密度(OD值)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算IL-10、TGF-β1的濃度值。

2 結(jié) 果

2.1 pSS患者血清中IL-10、TGF-β1的表達(dá)水平 pSS患者血清中IL-10治療前表達(dá)水平與正常對(duì)照組表達(dá)水平(t=3.16，P<0.05)及治療后表達(dá)水平比較(t=2.97，P<0.05)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。pSS患者血清中TGF-β1治療前表達(dá)水平與正常對(duì)照組表達(dá)水平(t=2.13，P<0.05)及治療后表達(dá)水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.33，P<0.05)。

2.2 pSS患者血清中IL-10、TGF-β1的相關(guān)性 pSS患者血清中IL-10和TGF-β1呈正相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.613，P<0.05)。

2.3 pSS患者治療前血清中IL-10、TGF-β1與相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)之間的相關(guān)性分析 pSS患者相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)：ESR：(32±24) mm/h，RF：(39±17) U/mL，IgG：(20.16±7.28) g/L，IgA：(2.93±1.27) g/L，IgM：(1.37±0.73) g/L，C4：(0.27±0.03) g/L，C3:(1.26±0.32) g/L。相關(guān)性分析，顯示pSS患者血清IL-10與ESR(r=0.592，P<0.05)呈正相關(guān)、IgG濃度(r=0.531，P<0.05)、補(bǔ)體C4(r=-0.271，P<0.05)呈負(fù)相關(guān)性。血清TGF-β1與ESR呈正相關(guān)性(r=0.316，P<0.05)，而TGF-β1與IgA、IgM、補(bǔ)體C3、C4、RF、IgG濃度無相關(guān)性。

2.4 治療 56例pSS患者，經(jīng)醋酸潑尼松5～10 mg 次/d口服或者醋酸潑尼松5～10 mg 次/d聯(lián)合硫酸羥氯喹0.2 g qd 口服治療，39例癥狀改善明顯，17例病情未進(jìn)展。

3 討 論

pSS是一種由淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的主要損傷外分泌腺(淚腺、唾液腺等)的全身性自身免疫病，免疫及炎性相關(guān)因素在pSS的發(fā)病過程中起了重要作用，細(xì)胞因子在介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)方面有極其重要的作用。Bregs細(xì)胞是一類具有免疫抑制作用的B細(xì)胞亞群，可以通過分泌IL-10和TGF-β1等細(xì)胞因子，抑制包括Th1型和Th2型炎癥效應(yīng)在內(nèi)的T細(xì)胞依賴性的免疫效應(yīng)，調(diào)節(jié)Th1和Th2之間的平衡，抑制部分自身免疫性疾病和過敏性疾病的發(fā)生進(jìn)展等。

IL-10作為一種細(xì)胞因子，可以通過阻斷促炎因子、趨化因子等作用，發(fā)揮抗炎效應(yīng)。IL-10可以抑制Th1及Th2分泌細(xì)胞因子，激活B淋巴細(xì)胞，從而產(chǎn)生機(jī)體[5]。作為一種多功能負(fù)性調(diào)節(jié)因子，具有下調(diào)炎癥反應(yīng)，拮抗炎癥介質(zhì)的作用。本組治療前血清中IL-10的表達(dá)水平與ESR呈正相關(guān)性(r=0.592，P<0.05)，從而說明IL-10與炎癥反應(yīng)有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，pSS治療前血清IL-10表達(dá)水平較健康對(duì)照組的血清IL-10表達(dá)水平高，可以抑制免疫過度活化，發(fā)揮免疫下調(diào)的作用，利于患者病情的好轉(zhuǎn)，隨著病情的緩解，炎癥反應(yīng)減輕，治療后pSS血清IL-10表達(dá)水平下降。有文獻(xiàn)報(bào)道[6]IL-10的單克隆抗體能抑制炎癥反應(yīng)的程度，從而達(dá)到治療疾病的目的。因此通過調(diào)節(jié)pSS患者體內(nèi)IL-10水平，從而發(fā)揮Bregs細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用，可以有效地控制病情變化。

TGF-β1作為一種負(fù)性免疫調(diào)節(jié)因子，能抑制免疫活性細(xì)胞的增殖和分化，以及細(xì)胞因子和抗體的產(chǎn)生，具有免疫抑制效應(yīng)[7]。本組治療前血清中TGF-β1表達(dá)水平與ESR呈正相關(guān)性(r=0.316，P<0.05)，說明TGF-β1與pSS的疾病活動(dòng)有關(guān)，在疾病的活動(dòng)期，患者體內(nèi)炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，TGF-β1含量升高，抑制免疫反應(yīng)，從而發(fā)揮抗炎效應(yīng)。文獻(xiàn)報(bào)道[8]， TGF-β1的免疫抑制功能較其他細(xì)胞因子更強(qiáng)，廣泛參與免疫細(xì)胞之間的相互作用，抑制免疫活性細(xì)胞的增殖和分化，有效抑制細(xì)胞因子及抗體的產(chǎn)生[9]。本組治療前pSS患者外周血中TGF-β1的表達(dá)水平高，考慮為機(jī)體反饋性抑制免疫反應(yīng)的結(jié)果。張志強(qiáng)等[10]報(bào)道TGF-β1與IL-10可以共同作用，通過抑制一氧化氮(NO)的產(chǎn)生而干擾IFN-r對(duì)巨噬細(xì)胞的活化。治療后炎癥反應(yīng)減輕，TGF-β1表達(dá)水平降低，提示TGF-β1作為機(jī)體重要的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，為疾病的轉(zhuǎn)歸起到了推動(dòng)作用。本研究結(jié)果顯示，pSS患者在治療前血清中IL-10和TGF-β1表達(dá)水平呈正相關(guān)性(r=0.61，P<0.05)，提示IL-10和TGF-β1與pSS的疾病活動(dòng)性有關(guān)。

總之，pSS患者治療前血清中IL-10和TGF-β1高表達(dá)，且疾病活動(dòng)，炎癥指標(biāo)升高，推測(cè)因炎癥反應(yīng)，Bregs細(xì)胞分泌的IL-10和TGF-β1增多，經(jīng)治療后，pSS患者血清中IL-10和TGF-β1表達(dá)水平降低，炎癥指標(biāo)下降，提示相關(guān)炎性細(xì)胞因子產(chǎn)生減少，炎癥反應(yīng)被有效阻斷，提示IL-10和TGF-β1參與pSS發(fā)病過程，并與疾病活動(dòng)性相關(guān)。

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寧夏醫(yī)科大學(xué)重點(diǎn)孵育項(xiàng)目(XZ2013)

R593.2

B

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2015-07-18)

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