200080　上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院消化科

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自然殺傷T細(xì)胞：膽道疾病新參與者？

馬振增陸倫根

200080上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院消化科

膽汁淤積性肝病的發(fā)病機(jī)制，特別是自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)中免疫介導(dǎo)的膽管損傷發(fā)病機(jī)制還不完全清楚[1]。一方面膽道的上皮層是朝向膽汁的一大黏膜屏障，直接將腸道和肝臟聯(lián)系起來(lái)，另一方面膽道細(xì)胞與各種非實(shí)質(zhì)肝細(xì)胞和來(lái)自腸道的靜脈血接觸。然而以前認(rèn)為膽道細(xì)胞只不過(guò)是免疫介導(dǎo)的損傷受害者，現(xiàn)在認(rèn)為其在調(diào)節(jié)黏膜屏障和免疫性微環(huán)境中起到重要作用。這一新觀點(diǎn)認(rèn)為膽管細(xì)胞能夠表達(dá)促炎細(xì)胞因子、趨化因子、TLRs及人類(lèi)白細(xì)胞抗原家族Ⅰ和Ⅱ類(lèi)分子。

在小鼠和人類(lèi)肝臟中含有大量的自然殺傷T細(xì)胞(NKT)免疫細(xì)胞群，NKT具有天然的和適應(yīng)性免疫的特點(diǎn)，在不同的人類(lèi)疾病中發(fā)揮著重要作用[2]。NKT表達(dá)T細(xì)胞受體(TCR)并且迅速產(chǎn)生IFN-γ，白細(xì)胞介素4等細(xì)胞因子。通過(guò)CD1d限定酯質(zhì)抗原(如糖脂和磷脂)的抗原識(shí)別，NKT細(xì)胞得以明確界定。CD1d是一種類(lèi)似于主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ的分子，被各種細(xì)胞所表達(dá)，包括樹(shù)突樣細(xì)胞，肝細(xì)胞及B細(xì)胞。例如在感染性疾病中，NKT細(xì)胞作為對(duì)抗病原體早期防線的一部分，除此之外，在腫瘤和自身免疫性疾病中也進(jìn)行了NKT細(xì)胞的研究[2]。

很多對(duì)NKT細(xì)胞的研究受到技術(shù)上的限制，因?yàn)樗麄內(nèi)鄙偻ㄟ^(guò)脂質(zhì)運(yùn)載的CD1d多聚體的特異性染色，因此常常依賴(lài)于同步檢測(cè)NK細(xì)胞和TCR的標(biāo)志物。然而并不是所有的NKT細(xì)胞都表達(dá)NK標(biāo)志物，如CD56則不表達(dá)NK標(biāo)志物[3]。NKT細(xì)胞另一個(gè)使研究更加復(fù)雜的特性是其異質(zhì)性。NKT細(xì)胞至少可以分為Ⅰ型或者iNKT和具有部分不同生物學(xué)功能的Ⅱ型NKT細(xì)胞兩個(gè)亞群[4]。iNKT表達(dá)一組具有不變?chǔ)伶満鸵唤M有限β鏈的TCR。這種半恒定iNKT的TCR可識(shí)別刺激性的鞘磷脂和α-半乳糖神經(jīng)酰胺(αGalCer)[2]。是否αGalCer模擬相關(guān)異質(zhì)或者半抗原還不完全清楚。孤立研究具有抗腫瘤活性的分子發(fā)現(xiàn)可被iNKT細(xì)胞特異性識(shí)別。Ⅱ型NKT細(xì)胞擁有更加多樣的TCR并且通過(guò)CD1d識(shí)別自身的糖脂-3′硫酸化-β半乳糖神經(jīng)酰胺(又稱(chēng)為硫腦苷脂)。對(duì)小鼠研究后認(rèn)為iNKT具有重要的促炎作用，Ⅱ型NKT細(xì)胞具有重要的調(diào)節(jié)功能[4]。對(duì)Ⅱ型NKT的研究晚于Ⅰ型NKT細(xì)胞，因此更多的關(guān)于Ⅱ型NKT的認(rèn)識(shí)更關(guān)注于iNKT細(xì)胞的功能方面。NKT細(xì)胞被認(rèn)為促進(jìn)多種肝臟的發(fā)病機(jī)制，例如病毒性肝炎和肝臟缺血再灌注損傷[5]。例如，在肝臟缺血再灌注損傷小鼠模型中，Ⅰ型NKT細(xì)胞加重?fù)p傷，而Ⅱ型NKT細(xì)胞通過(guò)滅活Ⅰ型NKT細(xì)胞、抑制IFN-γ合成，募集骨髓源性的炎性細(xì)胞和NK細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)肝臟的作用[5]。

關(guān)于這一問(wèn)題，最近Schrumpf等[6]進(jìn)行了一項(xiàng)關(guān)于CD1d在不同人群和鼠類(lèi)膽管細(xì)胞系及人類(lèi)原代膽管細(xì)胞上表達(dá)的研究。這項(xiàng)研究表明CD1d表達(dá)于膽管細(xì)胞，并且能夠通過(guò)自身典型抗原αGalCer刺激iNKT細(xì)胞。考慮到CD1d在大和小膽管的表達(dá)，將PBC、PSC、酒精性肝病患者的肝組織體外培養(yǎng)，健康對(duì)照肝組織來(lái)自于切除的肝臟，并用于研究分析。所有體外培養(yǎng)的肝硬化肝組織相比較健康對(duì)照組低表達(dá)CD1d。但是PBC和PSC患者膽管CD1d表達(dá)方式有所不同，在PSC患者大型膽管有更強(qiáng)的CD1d信號(hào)表達(dá)。研究人員不能給出總膽紅素和CD1d表達(dá)之間的相關(guān)性，除此之外也沒(méi)有進(jìn)行膽汁酸對(duì)CD1d表達(dá)影響的分析。

對(duì)NKT和CD1d在人類(lèi)膽汁淤積性肝病中的表達(dá)研究很少。有研究認(rèn)為,PBC早期，相比較PSC和正常肝臟，CD1d在小型膽管表達(dá)增強(qiáng)[7]，這一結(jié)果與Schrumpf等[6]研究結(jié)果不一致。對(duì)這種分歧的一種解釋是Schrumpf等將體外培養(yǎng)的終末期肝組織和早期疾病階段的肝組織進(jìn)行比較，Kita等[8]量化PBC患者肝臟和血液中的iNKT用的是四聚體染色法。終末期PBC患者肝組織相比較健康對(duì)照組肝組織，iNK細(xì)胞在肝內(nèi)出現(xiàn)的數(shù)量增高，然而外周血iNK細(xì)胞數(shù)量無(wú)差別。還沒(méi)有對(duì)人PBC患者NKT細(xì)胞特異性分析進(jìn)行研究。

Schrumpf等[6]的研究表明，在免疫介導(dǎo)的膽汁淤積性肝臟疾病中，CD1d和NKT細(xì)胞的強(qiáng)大作用。然而為了評(píng)估在人類(lèi)疾病中這些細(xì)胞的作用和CD1d的功能，一些重要問(wèn)題需要闡明如哪一種脂質(zhì)抗原(細(xì)菌，食物，毒性代謝物)是通過(guò)膽管細(xì)胞遞呈到CD1d上的？CD1d是如何進(jìn)行表達(dá)調(diào)控及對(duì)膽汁酸發(fā)揮影響的？NKT細(xì)胞是怎樣通過(guò)膽管上皮對(duì)刺激(如細(xì)胞因子，激素，動(dòng)力學(xué))做出反應(yīng)的？活化的NKT細(xì)胞是通過(guò)吸引其他炎性細(xì)胞直接或者間接的加重膽管損害的？Ⅰ型或Ⅱ型NKT細(xì)胞在人類(lèi)疾病中作用有不同嗎？由于技術(shù)的限制，如不能對(duì)不同類(lèi)型的NKT細(xì)胞進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，迄今為止，這些問(wèn)題很難得到解答。

如果NKT細(xì)胞與膽汁淤積性肝病是病理相關(guān)的，它們可能擁有治療性免疫調(diào)節(jié)的潛能。有趣的是，在伴刀豆蛋白A誘導(dǎo)的肝炎小鼠模型中，應(yīng)用一種合成的核膽酸受體激動(dòng)劑法尼酯X受體(FXR)進(jìn)行治療，減輕了肝損傷[9]。這一保護(hù)作用是通過(guò)FXR在NKT細(xì)胞中誘導(dǎo)骨調(diào)素表達(dá)下調(diào)來(lái)調(diào)節(jié)的。很有前景的推測(cè)是，F(xiàn)XR激動(dòng)劑，如奧貝膽酸，目前正在進(jìn)行PBC和非酒精性脂肪肝治療的臨床試驗(yàn)，可能在膽汁淤積性肝病中能夠調(diào)節(jié)NKT細(xì)胞的功能。

盡管對(duì)NKT細(xì)胞在人類(lèi)肝臟疾病中的作用感興趣，應(yīng)該牢記這種細(xì)胞在正常健康人群肝組織中的含量(幾乎是肝淋巴細(xì)胞的1%)遠(yuǎn)低于鼠類(lèi)肝組織中的含量(幾乎是淋巴細(xì)胞的30%)[2]。一直以來(lái)認(rèn)為很可能少量的NKT細(xì)胞就能觸發(fā)肝臟的炎癥[10]。Schrumpf等[6]的研究因應(yīng)用人類(lèi)樣本而受到稱(chēng)贊，但是對(duì)人類(lèi)疾病NKT細(xì)胞的明確量化和亞型分析的研究較少，需要進(jìn)一步深入研究。深入了解通過(guò)膽管細(xì)胞CD1d調(diào)節(jié)的抗原遞呈作用及它們對(duì)各種NKT細(xì)胞亞型的影響有助于闡明膽汁淤積性肝病的發(fā)病機(jī)制。

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(本文編輯：張苗)

(收稿日期：2015-12-01)