余春艷，梅娟

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快速準(zhǔn)確術(shù)中新鮮標(biāo)本冰凍切片方法探討

余春艷，梅娟

[摘要]目的：探討如何快速準(zhǔn)確的做好術(shù)中冰凍切片。方法：采用Leica-CM1950型恒冷切片機(jī)和Leica-819一次性刀片對(duì)2005-2015年手術(shù)切下來(lái)的30 000多例新鮮標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)冰凍切片取材、冷凍、切片、染色后封片。所用試劑的組成為：AAF混合固定液(乙醇、乙酸、中性甲醛)、蘇木素染液、伊紅染液、梯度乙醇和二甲苯。結(jié)果：在臨床手術(shù)醫(yī)生和病理科的相互配合下，冰凍切片做的質(zhì)量又好又快。結(jié)論：要想快速準(zhǔn)確的做好術(shù)中冰凍切片，臨床手術(shù)醫(yī)生和病理科的相互配合是必不可少的，另外病理技術(shù)人員在日常的工作中要不斷的總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，把冰凍切片質(zhì)量做到最好，才能為病理診斷的準(zhǔn)確性提供保障。

[關(guān)鍵詞]冰凍切片； 制片； 病理診斷

術(shù)中快速冰凍是病理科非常重要的一項(xiàng)工作，它是病理科技術(shù)與水平的體現(xiàn)，也是一個(gè)醫(yī)院綜合醫(yī)療能力的體現(xiàn)，在臨床診療中起了極其重要的作用。術(shù)中快速冰凍是通過(guò)對(duì)手術(shù)切下來(lái)的新鮮標(biāo)本進(jìn)行快速冷凍切片來(lái)確定病變性質(zhì)的一個(gè)過(guò)程。如何能快速準(zhǔn)確的做好術(shù)中冰凍切片，我們?cè)陂L(zhǎng)期的臨床工作中總結(jié)了一些經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1臨床手術(shù)醫(yī)生應(yīng)注意事項(xiàng)

1.1要在術(shù)前與患者及其家屬做充分的溝通告之他們什么是術(shù)中快速冰凍，以及做的目的是什么。由于冰凍診斷受時(shí)間和條件的限制，并不是所有冰凍的診斷率都能達(dá)到100%，會(huì)出現(xiàn)當(dāng)時(shí)無(wú)法診斷需要等待第二天的石蠟結(jié)果，甚至有些石蠟結(jié)果也不能做出診斷，還需要結(jié)合免疫組化標(biāo)記結(jié)果的，這些情況都應(yīng)向患者家屬告之。冰凍發(fā)報(bào)告時(shí)間為30 min左右，絕大部分報(bào)告都可以在這個(gè)時(shí)間內(nèi)發(fā)出，但如果遇到診斷具有一定難度需要重新多次取材的標(biāo)本，時(shí)間肯定會(huì)延長(zhǎng)，一旦出現(xiàn)這種情況，請(qǐng)患者家屬不要焦慮，相互理解并且耐心等待。

1.2不要把同一個(gè)患者的標(biāo)本分為兩份送到不同的病理科這種情況看似不會(huì)發(fā)生，實(shí)際上在工作中就曾遇到過(guò)，不僅加重患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，也給診斷帶來(lái)難度。此外送檢標(biāo)本不應(yīng)過(guò)小，過(guò)小組織切片困難。組織塊一定要新鮮，忌浸入乙醇、4%中性甲醛固定液，避免過(guò)多的水分，防止組織脫水、冰晶形成和組織變形[1]。對(duì)于應(yīng)高度注意的病變部位，臨床醫(yī)生最好用扎線(xiàn)的方法標(biāo)記出來(lái)以節(jié)省取材時(shí)間。

1.3術(shù)中冰凍切片申請(qǐng)單一定要規(guī)范書(shū)寫(xiě)一定要用黑或藍(lán)黑筆認(rèn)真工整填寫(xiě)，姓名、性別、年齡、科室、床位、住院號(hào)、病變部位、臨床診斷尤其要準(zhǔn)確填寫(xiě)。送檢部位要標(biāo)記明確，如果是單側(cè)，左與右一定要書(shū)寫(xiě)清楚。如果是雙側(cè)的話(huà)，一定要用系線(xiàn)的方法來(lái)加以區(qū)分。但是線(xiàn)頭不能扎太多，以免影響取材。例如系線(xiàn)一側(cè)如果為左側(cè)，那么申請(qǐng)單上一定要寫(xiě)上“系線(xiàn)者為左側(cè)”。并且“左”與“右”一定要書(shū)寫(xiě)清楚。此外臨床病史一定要填寫(xiě)清楚，對(duì)于患有“乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病、結(jié)核”等傳染病的患者，一定要在冰凍申請(qǐng)單上填寫(xiě)清楚，并用特別醒目的字體標(biāo)示出來(lái)，以便于病理工作者做好防護(hù)。對(duì)于送檢部位比較多的標(biāo)本，比如腫瘤組織的切緣，每一個(gè)切緣都應(yīng)單獨(dú)區(qū)分裝袋，并且袋上標(biāo)簽都應(yīng)詳細(xì)填寫(xiě)病人信息，不可填寫(xiě)類(lèi)似于“上、下、左、右”等字樣，以免和其他標(biāo)本混淆。袋口一定要扎緊向上放，以防組織脫落。

2病理科應(yīng)注意事項(xiàng)

2.1取材仔細(xì)核對(duì)標(biāo)本袋上信息與冰凍申請(qǐng)單信息是否吻合，如果遇到信息不吻合的標(biāo)本要立刻與手術(shù)室醫(yī)生聯(lián)系。取材時(shí)應(yīng)用鋒利的刀，避免用鈍刀前后拉動(dòng)或用力擠壓組織，引起組織結(jié)構(gòu)的變形和損傷。對(duì)于未做扎線(xiàn)標(biāo)記的腫塊一定要多剖幾個(gè)面，例如甲狀腺微小癌腫塊，如不仔細(xì)極易漏取。對(duì)于醫(yī)生扎線(xiàn)的部位要重點(diǎn)取扎線(xiàn)處，但一定要剔除線(xiàn)頭，因?yàn)榫€(xiàn)頭會(huì)使組織塊切不完整，影響制片、診斷。組織塊要平整規(guī)則，避開(kāi)壞死出血區(qū)，盡量剔除脂肪、毛發(fā)、硬骨、鈣化物[2]，最后組織塊大小以1.5 cm×1.5 cm×(0.3～0.4)cm為宜，過(guò)厚或過(guò)大都會(huì)延長(zhǎng)組織冷凍時(shí)間，而過(guò)薄或過(guò)小會(huì)不利于切片。

2.2冷凍將冰凍機(jī)內(nèi)溫度調(diào)到適合于該組織切片的度數(shù)范圍內(nèi)，一般在-18℃～-25℃內(nèi)變動(dòng)[3]。不同組織標(biāo)本適宜切片溫度如下：甲狀腺-20℃～-18℃，含脂肪的乳腺-30℃～-22℃，脂肪組織-30℃以下，卵巢、膽囊、胃壁-22℃～-20℃[4]。首先在冷凍托上滴適量普通膠水或OCT(組織包埋劑)，再把組織放于其中央置于冰凍機(jī)內(nèi)。調(diào)整好厚度即開(kāi)始切片，含淋巴組織結(jié)構(gòu)的組織一般切3 μm,甲狀腺、乳腺、肝臟等切4 μm，胃、腸、子宮、卵巢等可切4～5 μm,脂肪組織切5 μm以上[5]。最后由于冷凍機(jī)內(nèi)溫度過(guò)低，長(zhǎng)時(shí)間的切片有可能會(huì)凍傷手，所以在做好工作的同時(shí)，也應(yīng)做好自我安全防護(hù)。

2.3切片當(dāng)組織塊經(jīng)冷凍后顏色發(fā)白時(shí)，或者用鑷子觸碰發(fā)硬時(shí)即可以切片。切片時(shí)要緩慢勻速、用力均勻。含皮膚和鈣化區(qū)應(yīng)向上放置，軟組織向下放。對(duì)于囊壁含乳頭或息肉的組織，一定要把乳頭或息肉大部分暴露時(shí)才可以切片，比如甲狀腺乳頭狀癌、膽囊內(nèi)壁息肉、卵巢乳頭狀囊腺瘤/癌，如果只切出囊壁而未切出乳頭或切不全就容易誤診。另外對(duì)于切片需要特別注意的地方，醫(yī)生最好能特別交待一下技術(shù)員，比如微小癌的腫塊，經(jīng)過(guò)冷凍后顏色會(huì)發(fā)白，癌與周?chē)＝M織就很難區(qū)分，在看不清楚的情況下就有可能會(huì)將癌組織切掉。此外刀片一定要鋒利，鋒利的刀片切出的組織塊完整、厚薄均勻，鈍的刀片切出的組織易卷曲、破碎、布滿(mǎn)刀痕，顯微鏡下根本無(wú)法觀(guān)察。

2.4固定切下的組織迅速放入AAF混合固定液(乙醇、乙酸、中性甲醛)中充分固定。

2.5染色首先入新配制的Harri’s(哈瑞士)蘇木精染色液染色2～4 min[6]，但在染之前一定要把表面的結(jié)晶給撈掉，否則大量的結(jié)晶會(huì)附著在組織上影響診斷。然后用體積分?jǐn)?shù)1%鹽酸乙醇分化，水洗后放入40℃～60℃熱水中藍(lán)化。然后置入5～10 g/L伊紅染液10 s，水洗，體積分?jǐn)?shù)80%～100%梯度乙醇脫水至二甲苯[4]。

2.6封片封片時(shí)中性樹(shù)膠不要滴的太多，過(guò)多會(huì)溢出玻片之外，影響美觀(guān)，過(guò)少組織就不能完全覆蓋，沒(méi)有折光率，無(wú)法診斷。最后貼上標(biāo)簽即可診斷。

[參考文獻(xiàn)]

[1]侯巧艷，何雯，張美艷，等.不同組織的快速冰凍切片技術(shù)探討[J].廣西醫(yī)學(xué)，2008,30(10):1560.

[2]趙曼曼，張新新.快速冷凍切片技術(shù)的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[J].臨床合理用藥，2010,3(7):32.

[3]王伯沄，李玉松，黃高昇，等.病理學(xué)技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:88.

[4]許平，陳奎生，李晟磊，等.快速冰凍切片制備方法的改進(jìn)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2010，45(2):241-243.

[5]繆勇建.如何做好術(shù)中冰凍切片[J]．廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，9(24)：343．

[6]許良中．實(shí)用腫瘤病理方法[M]．上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1997：73．

(收稿日期：2015-12-23)

[中圖分類(lèi)號(hào)]R 361.2

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1008-7044(2016)03-0321-02

DOI：10.14126/j.cnki.1008-7044.2016.03.032

[作者簡(jiǎn)介]余春艷(1983-)，女，技師，大學(xué)。

[作者單位] 蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 病理科，安徽 蚌埠 233000