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        快速準(zhǔn)確術(shù)中新鮮標(biāo)本冰凍切片方法探討

        2016-03-09 09:23:29余春艷梅娟
        淮海醫(yī)藥 2016年3期
        關(guān)鍵詞:病理診斷

        余春艷,梅娟

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        快速準(zhǔn)確術(shù)中新鮮標(biāo)本冰凍切片方法探討

        余春艷,梅娟

        [摘要]目的:探討如何快速準(zhǔn)確的做好術(shù)中冰凍切片。方法:采用Leica-CM1950型恒冷切片機(jī)和Leica-819一次性刀片對2005-2015年手術(shù)切下來的30 000多例新鮮標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)冰凍切片取材、冷凍、切片、染色后封片。所用試劑的組成為:AAF混合固定液(乙醇、乙酸、中性甲醛)、蘇木素染液、伊紅染液、梯度乙醇和二甲苯。結(jié)果:在臨床手術(shù)醫(yī)生和病理科的相互配合下,冰凍切片做的質(zhì)量又好又快。結(jié)論:要想快速準(zhǔn)確的做好術(shù)中冰凍切片,臨床手術(shù)醫(yī)生和病理科的相互配合是必不可少的,另外病理技術(shù)人員在日常的工作中要不斷的總結(jié)經(jīng)驗,把冰凍切片質(zhì)量做到最好,才能為病理診斷的準(zhǔn)確性提供保障。

        [關(guān)鍵詞]冰凍切片; 制片; 病理診斷

        術(shù)中快速冰凍是病理科非常重要的一項工作,它是病理科技術(shù)與水平的體現(xiàn),也是一個醫(yī)院綜合醫(yī)療能力的體現(xiàn),在臨床診療中起了極其重要的作用。術(shù)中快速冰凍是通過對手術(shù)切下來的新鮮標(biāo)本進(jìn)行快速冷凍切片來確定病變性質(zhì)的一個過程。如何能快速準(zhǔn)確的做好術(shù)中冰凍切片,我們在長期的臨床工作中總結(jié)了一些經(jīng)驗,現(xiàn)報告如下。

        1臨床手術(shù)醫(yī)生應(yīng)注意事項

        1.1要在術(shù)前與患者及其家屬做充分的溝通告之他們什么是術(shù)中快速冰凍,以及做的目的是什么。由于冰凍診斷受時間和條件的限制,并不是所有冰凍的診斷率都能達(dá)到100%,會出現(xiàn)當(dāng)時無法診斷需要等待第二天的石蠟結(jié)果,甚至有些石蠟結(jié)果也不能做出診斷,還需要結(jié)合免疫組化標(biāo)記結(jié)果的,這些情況都應(yīng)向患者家屬告之。冰凍發(fā)報告時間為30 min左右,絕大部分報告都可以在這個時間內(nèi)發(fā)出,但如果遇到診斷具有一定難度需要重新多次取材的標(biāo)本,時間肯定會延長,一旦出現(xiàn)這種情況,請患者家屬不要焦慮,相互理解并且耐心等待。

        1.2不要把同一個患者的標(biāo)本分為兩份送到不同的病理科這種情況看似不會發(fā)生,實際上在工作中就曾遇到過,不僅加重患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),也給診斷帶來難度。此外送檢標(biāo)本不應(yīng)過小,過小組織切片困難。組織塊一定要新鮮,忌浸入乙醇、4%中性甲醛固定液,避免過多的水分,防止組織脫水、冰晶形成和組織變形[1]。對于應(yīng)高度注意的病變部位,臨床醫(yī)生最好用扎線的方法標(biāo)記出來以節(jié)省取材時間。

        1.3術(shù)中冰凍切片申請單一定要規(guī)范書寫一定要用黑或藍(lán)黑筆認(rèn)真工整填寫,姓名、性別、年齡、科室、床位、住院號、病變部位、臨床診斷尤其要準(zhǔn)確填寫。送檢部位要標(biāo)記明確,如果是單側(cè),左與右一定要書寫清楚。如果是雙側(cè)的話,一定要用系線的方法來加以區(qū)分。但是線頭不能扎太多,以免影響取材。例如系線一側(cè)如果為左側(cè),那么申請單上一定要寫上“系線者為左側(cè)”。并且“左”與“右”一定要書寫清楚。此外臨床病史一定要填寫清楚,對于患有“乙肝、丙肝、梅毒、艾滋病、結(jié)核”等傳染病的患者,一定要在冰凍申請單上填寫清楚,并用特別醒目的字體標(biāo)示出來,以便于病理工作者做好防護(hù)。對于送檢部位比較多的標(biāo)本,比如腫瘤組織的切緣,每一個切緣都應(yīng)單獨區(qū)分裝袋,并且袋上標(biāo)簽都應(yīng)詳細(xì)填寫病人信息,不可填寫類似于“上、下、左、右”等字樣,以免和其他標(biāo)本混淆。袋口一定要扎緊向上放,以防組織脫落。

        2病理科應(yīng)注意事項

        2.1取材仔細(xì)核對標(biāo)本袋上信息與冰凍申請單信息是否吻合,如果遇到信息不吻合的標(biāo)本要立刻與手術(shù)室醫(yī)生聯(lián)系。取材時應(yīng)用鋒利的刀,避免用鈍刀前后拉動或用力擠壓組織,引起組織結(jié)構(gòu)的變形和損傷。對于未做扎線標(biāo)記的腫塊一定要多剖幾個面,例如甲狀腺微小癌腫塊,如不仔細(xì)極易漏取。對于醫(yī)生扎線的部位要重點取扎線處,但一定要剔除線頭,因為線頭會使組織塊切不完整,影響制片、診斷。組織塊要平整規(guī)則,避開壞死出血區(qū),盡量剔除脂肪、毛發(fā)、硬骨、鈣化物[2],最后組織塊大小以1.5 cm×1.5 cm×(0.3~0.4)cm為宜,過厚或過大都會延長組織冷凍時間,而過薄或過小會不利于切片。

        2.2冷凍將冰凍機(jī)內(nèi)溫度調(diào)到適合于該組織切片的度數(shù)范圍內(nèi),一般在-18℃~-25℃內(nèi)變動[3]。不同組織標(biāo)本適宜切片溫度如下:甲狀腺-20℃~-18℃,含脂肪的乳腺-30℃~-22℃,脂肪組織-30℃以下,卵巢、膽囊、胃壁-22℃~-20℃[4]。首先在冷凍托上滴適量普通膠水或OCT(組織包埋劑),再把組織放于其中央置于冰凍機(jī)內(nèi)。調(diào)整好厚度即開始切片,含淋巴組織結(jié)構(gòu)的組織一般切3 μm,甲狀腺、乳腺、肝臟等切4 μm,胃、腸、子宮、卵巢等可切4~5 μm,脂肪組織切5 μm以上[5]。最后由于冷凍機(jī)內(nèi)溫度過低,長時間的切片有可能會凍傷手,所以在做好工作的同時,也應(yīng)做好自我安全防護(hù)。

        2.3切片當(dāng)組織塊經(jīng)冷凍后顏色發(fā)白時,或者用鑷子觸碰發(fā)硬時即可以切片。切片時要緩慢勻速、用力均勻。含皮膚和鈣化區(qū)應(yīng)向上放置,軟組織向下放。對于囊壁含乳頭或息肉的組織,一定要把乳頭或息肉大部分暴露時才可以切片,比如甲狀腺乳頭狀癌、膽囊內(nèi)壁息肉、卵巢乳頭狀囊腺瘤/癌,如果只切出囊壁而未切出乳頭或切不全就容易誤診。另外對于切片需要特別注意的地方,醫(yī)生最好能特別交待一下技術(shù)員,比如微小癌的腫塊,經(jīng)過冷凍后顏色會發(fā)白,癌與周圍正常組織就很難區(qū)分,在看不清楚的情況下就有可能會將癌組織切掉。此外刀片一定要鋒利,鋒利的刀片切出的組織塊完整、厚薄均勻,鈍的刀片切出的組織易卷曲、破碎、布滿刀痕,顯微鏡下根本無法觀察。

        2.4固定切下的組織迅速放入AAF混合固定液(乙醇、乙酸、中性甲醛)中充分固定。

        2.5染色首先入新配制的Harri’s(哈瑞士)蘇木精染色液染色2~4 min[6],但在染之前一定要把表面的結(jié)晶給撈掉,否則大量的結(jié)晶會附著在組織上影響診斷。然后用體積分?jǐn)?shù)1%鹽酸乙醇分化,水洗后放入40℃~60℃熱水中藍(lán)化。然后置入5~10 g/L伊紅染液10 s,水洗,體積分?jǐn)?shù)80%~100%梯度乙醇脫水至二甲苯[4]。

        2.6封片封片時中性樹膠不要滴的太多,過多會溢出玻片之外,影響美觀,過少組織就不能完全覆蓋,沒有折光率,無法診斷。最后貼上標(biāo)簽即可診斷。

        [參考文獻(xiàn)]

        [1]侯巧艷,何雯,張美艷,等.不同組織的快速冰凍切片技術(shù)探討[J].廣西醫(yī)學(xué),2008,30(10):1560.

        [2]趙曼曼,張新新.快速冷凍切片技術(shù)的經(jīng)驗總結(jié)[J].臨床合理用藥,2010,3(7):32.

        [3]王伯沄,李玉松,黃高昇,等.病理學(xué)技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000:88.

        [4]許平,陳奎生,李晟磊,等.快速冰凍切片制備方法的改進(jìn)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2010,45(2):241-243.

        [5]繆勇建.如何做好術(shù)中冰凍切片[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2007,9(24):343.

        [6]許良中.實用腫瘤病理方法[M].上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社,1997:73.

        (收稿日期:2015-12-23)

        [中圖分類號]R 361.2

        [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

        [文章編號]1008-7044(2016)03-0321-02

        DOI:10.14126/j.cnki.1008-7044.2016.03.032

        [作者簡介]余春艷(1983-),女,技師,大學(xué)。

        [作者單位] 蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 病理科,安徽 蚌埠 233000

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