章 莉 高宜云 顧科峰 傅偉浩

復(fù)方紫草油對濕疹模型小鼠血清IL-2、TNF-α水平的影響

章 莉 高宜云 顧科峰 傅偉浩

目的觀察復(fù)方紫草油對濕疹模型小鼠血清IL-2、TNF-α水平的影響，探討復(fù)方紫草油治療濕疹的作用機制。方法將60只健康小鼠分為正常組、中藥高濃度組、中藥低濃度組、西藥組、模型組，每組12只，建立濕疹小鼠模型，觀察各組治療前后小鼠耳片重量、厚度變化，ELLES法測血清IL-2、TNF-α變化。結(jié)果中藥高濃度組小鼠平均耳片質(zhì)量差（3.56±0.60）mg、厚度差（0.20± 0.09）mm以及血清IL-2、TNF-α[（5.01±0.54）pg/mL，（74.13±3.91）pg/mL]水平均低于中藥低濃度組[（5.46±1.24）mg，（0.40±0.17）mm，（5.66±0.48）pg/mL，（78.12±2.02）pg/mL]和模型組[（8.78±1.12）mg，（0.54±0.16）mm，（6.43±0.63）pg/mL，（85.61±5.10）pg/mL]（P均＜0.05），與西藥組 [（2.86±0.69）mg，（0.10±0.07）mm，（4.80±0.58）pg/mL]比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論中高劑量復(fù)方紫草油能降低濕疹模型小鼠的炎癥反應(yīng)，并能降低血清IL-2、TNF-α水平。

小鼠；濕疹；復(fù)方紫草油；IL-2；TNF-α

1 實驗材料

1.1 實驗動物 ICR系小鼠，雄性，平均體質(zhì)量25.811.55g，浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，合格證：SCKX（滬）2013-0016。

1.2 實驗藥物 2、4二硝基氯苯（DNCB）（東京仁成工業(yè)株式會社，批號C0162），適量DNCB加入丙酮配制成7%、0.1%濃度的兩種溶液。丁酸氫化可的松軟膏（天津金耀藥業(yè)有限公司,批號1503559）。復(fù)方紫草油（紫草、黃芩、生大黃、麻油、亞麻籽）加熱80℃，15～20min（以紫草輕度變焦炭為度），待油冷卻后過濾，備用。

1.3 儀 器 離心機：北京醫(yī)用離心機廠，F(xiàn)A-B型電子天平：湖北好美佳儀器設(shè)備有限公司，皮膚圓形打孔器（直徑8mm）：上海醫(yī)療設(shè)備廠，電子數(shù)顯卡尺：桂林量具刃具廠。

1.4 試 劑 鼠IL-2、TNF-α試劑盒（批號E20151 20903、E2015120907）。

2 實驗方法

2.1 造 模 參照文獻[1]方法，取小鼠60只，按完全隨機設(shè)計原則，分為空白對照組（空白組）、2，4-二硝基氯苯模型組（模型組）、50%中藥低濃度組（中低組）、100%中藥高濃度組（中高組）、丁酸氫化可的松乳膏西藥對照組（西藥組），每組12只，用7%的2,4-DNCB溶液在小鼠的背部及腹部剪毛區(qū)域致敏，第二天加強致敏1次。5天后，小鼠左耳廓均勻涂1% DNCB溶液，每隔3天激發(fā)1次，共激發(fā)4次，并分別于每次激發(fā)后24h用螺旋測微器測定小鼠耳腫脹度。中低組、中高組和西藥組分別以相應(yīng)濃度的藥液給小鼠耳部外涂治療，每天2次，連續(xù)12天，空白組以及模型組未給予特殊處理。

2.2 觀察指標 末次給藥后2h，剪下小鼠雙耳，用直徑8mm的皮膚打孔器分別在左右耳對稱部位打下圓形耳片,測量圓形耳片厚度,稱重,分別記錄左右耳片的厚度、質(zhì)量，計算耳片厚度差和質(zhì)量差。采血測IL-2、TNF-α（ELISA法）水平（詳細操作按試劑盒說明書進行）。

2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 所得數(shù)據(jù)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行方差分析，組間差異用q檢驗。

3 實驗結(jié)果

3.1 各組小鼠耳片質(zhì)量及厚度比較 中高組小鼠耳片重量和厚度差與中低組和模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與西藥組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 各組小鼠耳片質(zhì)量和厚度差比較（±s）

表1 各組小鼠耳片質(zhì)量和厚度差比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與中高組比較，△P＜0.05；中低組：中藥低濃度組，中高組：中藥高濃度組，西藥組：丁酸氫化可的松乳膏組

組別正常組中低組中高組西藥組模型組只數(shù)12 12 12 12 12耳片質(zhì)量差（mg）1.62±0.46 5.46±1.24*△3.56±0.60* 2.86±0.69* 8.78±1.12*△耳片厚度差（mm）0.02±0.05 0.40±0.17*△0.20±0.09* 0.10±0.07* 0.54±0.16*△

3.2 各組小鼠血清IL-2、TNF-α含量比較 中高組小鼠血清IL-2、TNF-α低于中低組和模型組（P＜0.05），與西藥組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 各組小鼠血清IL-2、TNF-α含量比較（pg/mL±s）

表2 各組小鼠血清IL-2、TNF-α含量比較（pg/mL±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與中高組比較，△P＜0.05；中低組：中藥低濃度組，中高組：中藥高濃度組，西藥組：丁酸氫化可的松乳膏組

組別正常組中低組中高組西藥組模型組只數(shù)12 12 12 12 12 IL-2 3.57±0.51 5.66±0.48*△5.01±0.54* 4.80±0.58* 6.43±0.63*△TNF-α 12.40±1.22 78.12±2.02*△74.13±3.91* 71.20±1.78* 85.61±5.10*△

4 討論

濕疹為皮膚科常見疾病，中醫(yī)稱之為“浸淫瘡”，“濕毒瘡”，等。病因病機總屬濕熱內(nèi)外相搏，蘊蒸外發(fā)，浸淫肌膚,滋水流溢成瘡。

復(fù)方紫草油為我院名中醫(yī)高宜云醫(yī)師驗方。方中主藥紫草涼血，活血，解毒透疹，在清代《瘍醫(yī)大全》中早有記載紫草膏治小兒胎毒，疥癬。黃芩清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎。生大黃清濕熱、瀉火、涼血。亞麻籽又稱大胡麻能潤燥，祛風，止癢。麻油清熱、潤滑、收斂、潤膚，作為油膏制劑之溶媒可補氣行氣、健脾生肌。諸藥合用有清熱涼血，燥濕止癢，潤膚之效。藥理研究表明，紫草含萘醌類色素和多糖類化合物，具有抗細菌、抗真菌作用，并具有明顯抗炎，抑制組胺釋放等作用，同時能抑制TNF-α的表達[2-4]。黃芩具有抗菌、抗病毒、抗炎作用同時對多種變態(tài)反應(yīng)有不同程度的抑制作用[5]。生大黃具有抗菌，抗炎等作用，同時能抑制炎癥細胞因子TNF-α表達[6]。亞麻籽含大量亞油酸和亞麻酸等成分[7]，是維持皮膚和毛發(fā)生長不可缺少的成分，能促進損傷組織的修復(fù)。麻油含有多種脂溶性維生素E，能維護毛細血管的通透性，改善周圍血液循環(huán)[8]。全方有抗菌，抗炎，抗過敏，抑制滲出，減少水腫的作用。

濕疹致病原因復(fù)雜，其發(fā)病機制可能與Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)有關(guān)，Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)與致敏的T淋巴細胞有關(guān)，其產(chǎn)生一系列淋巴因子，各種炎癥細胞活化因子共同引起血管擴張，血管壁通透性增強從而形成皮膚濕疹樣改變[9]，濕疹發(fā)生發(fā)展過程中，炎癥介質(zhì)的相互作用和變化能影響濕疹的發(fā)展和預(yù)后。TNF-α屬于促炎因子之一，TNF-α含量增高不僅可促進炎癥部位血管擴張、血管壁通透性增加、趨化白細胞引起炎癥部位組織損傷，導(dǎo)致炎癥程度加重，同時，還可引起IL-1、IFN-γ等促炎因子含量增加，進一步加重濕疹皮損的炎癥反應(yīng)[10]。IL-2能促進白介素-2受體（IL-2R）的表達，還可刺激其他細胞因子（TNF、IFN-γ）分泌，引起組織的以淋巴細胞和單核細胞系浸潤為主的滲出性炎癥，從而導(dǎo)致濕疹加重[11]。本實驗中小鼠經(jīng)DNCB致敏和多次激發(fā)后，耳廓明顯腫脹，皮損嚴重，并形成明顯結(jié)痂，呈現(xiàn)典型Ⅳ變態(tài)反應(yīng)免疫模型。本實驗中發(fā)現(xiàn)中高組復(fù)方紫草油能顯著改善皮損腫脹、紅斑、滲出和結(jié)痂現(xiàn)象，對血清中炎癥細胞因子IL-2、TNF-α有明顯的抑制作用，療效好于低濃度組，且與西藥陽性組無差異。

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（收稿：2015-12-22 修回：2016-02-25）

Effects of Compound Zicao Oil on Serum IL-2 and TNF-αin Eczema Mice

ZH ANG Li,GAO Yiyun,GU Kefeng,FU Weihao.Department of Dermatology,Xiaoshan Demertosis Hospital,Hangzhou(311200),China

ObjectiveTo investigate the effects of compound Zicao oil on the levels of serum IL-2 and TNF-αin eczema mice model and the underlying mechanism.MethodsSixty healthy mice were randomly divided into blank control group,traditional Chinese medicine groups（high-and low-dosages）,western medicine group,and model group,with 12 mice in each group.Eczema The thickness and weights of mouse ears were measured.The levels of serum IL-2 and TNF-αwere determined by ELISA method.ResultsIn high-dose traditional Chinese medicine group,the weights and thickness of ears were 3.56±0.60 mg and 0.20±0.09 mm and the levels of serum IL-2 and TNF-α were 5.01±0.54 pg/mL and 74.13±3.91 pg/mL,respectively,which were significantly decreased than those in low-dose traditional Chinese medicine group（5.46±1.24 mg,0.40±0.17 mm,5.66±0.48 pg/mL,78.12± 2.02 pg/mL）and model group（8.78±1.12 mg,0.54±0.16 mm,6.43±0.63 pg/mL,85.61±5.10 pg/mL）,with all P＜0.05 and did not differ from those of western medicine group（2.86±0.69 mg,0.10±0.07 mm,4.80±0.58 pg/mL,4.80± 0.58 pg/mL;all P＞0.05）.ConclusionCompound zicao oil at a certain concentration can suppress the inflammatory response in mice with eczema,with a decrease in the level of serum IL-2 and TNF-α.

mice;eczema;compound zicao oil;IL-2;TNF-α濕疹是皮膚科常見病，病情遷延難愈。目前常用的皮質(zhì)類固醇激素、抗組胺藥等藥物控制癥狀效果良好，但停藥后易復(fù)發(fā)。我院采用復(fù)方紫草油治療成人以及嬰兒濕疹臨床取得良好療效，現(xiàn)用小鼠建立濕疹動物模型，探討其作用機制，報道如下。

杭州市衛(wèi)生科技計劃項目（No.2010B072）；蕭山社會發(fā)展重大科技攻關(guān)項目（2014308）

杭州市蕭山區(qū)皮膚病醫(yī)院皮膚科（杭州 311200）

章莉，Tel：0571-82670363；E-mail：wall1979@163.com