楊賀晴，劉宇峰，韓秋菊，姬妍茹，楊慶麗，魏連會，董燕，馬若波，姜德友，*

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150046; 2．黑龍江省科學(xué)院大慶分院生物新技術(shù)研究所，黑龍江大慶 163319; 3．黑龍江農(nóng)墾職業(yè)學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150025; 4．哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150081)

黑蒜多酚粗提物體內(nèi)抗氧化功能研究

楊賀晴1，劉宇峰2，*，韓秋菊3，姬妍茹2，楊慶麗2，魏連會2，董燕2，馬若波4，姜德友1，*

(1．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150046; 2．黑龍江省科學(xué)院大慶分院生物新技術(shù)研究所，黑龍江大慶 163319; 3．黑龍江農(nóng)墾職業(yè)學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150025; 4．哈爾濱醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，黑龍江哈爾濱 150081)

研究黑蒜多酚體內(nèi)抗氧化功能。按《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》，將SPF級KM小鼠隨機分為空白對照組、模型對照組和3個不同劑量的黑蒜多酚量組，以2．04，4．10，12．25 g/(kg·bw)劑量連續(xù)灌胃30 d后，取血。并制造溴代苯油灌胃氧化損傷模型，取黑蒜受試組與模型對照組小鼠的肝臟組織。分別測定造模損傷前血液及造模損傷后肝臟組織中的過氧化脂質(zhì)丙二醛含量，超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶活力和總抗氧能力活性。結(jié)果表明，隨黑蒜多酚粗提物劑量增加可明顯降低小鼠血清和肝臟組織中MDA含量，顯著提高SOD、GSH-Px、T-AOC活力。根據(jù)“保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法規(guī)范”判定標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為黑蒜多酚粗提物具有抗氧化功能。

黑蒜多酚粗提物;溴代苯油氧化損傷;抗氧化;總抗氧能力

黑蒜是近些年新興的一種以藥食植物大蒜為原料經(jīng)獨特的變溫恒濕生物發(fā)酵加工制成的功能性食品［1-2］。在加工過程中，大蒜的糖類、蛋白、風(fēng)味物質(zhì)等主要營養(yǎng)物質(zhì)和抗氧化多酚、蒜氨酸、蒜氨酸酶等功效成分以及色澤、口感、味道、香氣等各個方面都發(fā)生了規(guī)律性的顯著變化，黑蒜中多酚的含量是生大蒜的7．41倍。因此黑蒜在藥食保健功能方面也比生蒜有了大幅度地提高［3-4］。實驗證明，黑蒜是由大蒜經(jīng)生物發(fā)酵技術(shù)加工獲得的，且未產(chǎn)生任何毒性作用［5］，這為將黑蒜進一步開發(fā)成保健食品奠定了安全性基礎(chǔ)。近年來，對黑蒜的研究，由生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域已向功能性的新產(chǎn)品開發(fā)方面逐步深入［6］，黑蒜在降血糖、抗氧化方面的藥食功效獲得了驗證［7］。但黑蒜在動物體內(nèi)的抗氧化活性的研究還很欠缺，尤其是在體內(nèi)如何對血液和肝臟組織內(nèi)過氧化脂質(zhì)丙二醛(maloric dialdehyde，MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)活力和總抗氧能力活性(total antioxidant capacity，TAOC)產(chǎn)生影響的研究還有待加強［8-10］。本文就黑蒜多酚粗提物對正常小鼠血液和溴代苯油灌胃氧化損傷模型造模后肝臟組織中的過氧化脂質(zhì)丙二醛含量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶活力和總抗氧能力活性的指標(biāo)影響進行了研究。以期對黑蒜所具有的強抗氧化作用提供具有統(tǒng)計學(xué)意義的確鑿的理論研究數(shù)據(jù)，為黑蒜的功能食品產(chǎn)業(yè)開發(fā)提供理論支持。

1 材料和方法

1.1 實驗樣品

黑蒜多酚粗提物由黑龍江省科學(xué)院大慶分院提供，黑蒜粗提浸膏中黑蒜多酚的質(zhì)量比為10．826 mg/g，避光于陰涼、干燥處保存。

1.2 實驗動物與實驗條件

選用SPF級KM小鼠，體重18～22 g，共50只，雄鼠。小鼠由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(遼)2015-0001。實驗條件為屏障環(huán)境，環(huán)境溫度22～24℃，濕度50%～56%。小鼠飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供，飼料生產(chǎn)許可證號為SCXK(京)2009-0012。參照2003版《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》關(guān)于“保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法規(guī)范”中“功能學(xué)評價檢驗方法”的條件，將動物在實驗室適應(yīng)環(huán)境2 d后進行實驗。

1.3 劑量實驗設(shè)計

按小鼠體重隨機分成5組，每組10只，一個空白對照組，一個模型對照組和3個黑蒜多酚粗提物劑量組。黑蒜多酚粗提物人體口服推薦量為24．5 g/(人·日)，折合劑量為0．41 g/(kg·bw)(成人體重按60 kg計算)。動物實驗劑量設(shè)計分別為人體推薦量的30，10，5倍，則高劑量組、中劑量組、低劑量組分別為12．25，4．10，2．04 g/(kg·bw)，黑蒜多酚粗提物以蒸餾水為溶劑配制，空白對照組動物給予同體積溶劑，模型對照組給予0．3 mg/(kg· bw)溴代苯油，所有動物按20 mL/(kg·bw)容積經(jīng)口灌胃投予已配制的不同濃度的黑蒜多酚粗提物溶液及溶劑。

1.4 主要儀器與試劑

ES2000B-2型動物秤，中國;HANGPNG JA2003型電子天平，上海銳析儀器設(shè)備有限公司;Sunrise型酶標(biāo)儀，瑞士TECAN公司。丙二醛、總抗氧化能力、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶試劑盒購自卡爾文生物科技有限公司，其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純級。

1.5 實驗方法

各組動物按所設(shè)劑量每日灌胃給予黑蒜多酚粗提物溶液，每周稱重一次，調(diào)整灌胃量，連續(xù)給予30 d，末次灌胃后眼球取血，24 h內(nèi)完成血清中總抗氧化能力、過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物丙二醛含量、超氧化物歧化酶活力測定。此后動物饑餓過夜，繼續(xù)灌胃給與上述相同劑量的受試物0．5～1 h后，除空白對照組，各劑量組與模型對照組動物均按0．3 mg/(kg·bw)劑量灌胃給予溴代苯油，灌胃體積按0．2 mL/20 g，灌胃22 h后處死動物，取肝組織，測定肝組織中T-AOC、MDA含量及SOD、GSH-Px活力，檢測方法按試劑盒說明書操作。

1.6 數(shù)據(jù)分析

用Excel 2003和SPSS 17．0軟件建立數(shù)據(jù)庫并進行統(tǒng)計分析，各組間計量資料采用單因素方差分析進行總體比較，如果有統(tǒng)計學(xué)差異則用LSD法進行組間兩兩比較，p＜0．05時視為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 實驗結(jié)果

2.1 黑蒜多酚粗提物對小鼠血清的影響

2.1.1 對小鼠血清總抗氧化能力的影響

灌胃給予黑蒜多酚粗提物小鼠30 d后，各受驗動物組與空白對照組比較，血清中總抗氧化能力結(jié)果見表1。

表1 黑蒜多酚粗提物對小鼠血清中T-AOC的影響Tab．1Effect of black garlic polyphenols on serum T-AOC of mice

從表1結(jié)果可見，黑蒜多酚粗提物均能夠顯著提高受試各劑量組小鼠血清的T-AOC。

2.1.2 對小鼠血清抗氧化活性的影響

灌胃給予黑蒜多酚粗提物小鼠30 d后，各受驗動物組與空白對照組比較，血清中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物MDA的含量見表2，SOD和GSH-Px活性結(jié)果見表3。

從表2結(jié)果可見，黑蒜多酚粗提物能夠顯著降低受試中、高劑量組小鼠血清中丙二醛的含量。

表2 黑蒜多酚粗提物對小鼠血清中MDA的影響Tab．2Effect of black garlic polyphenols on serum MDA content of mice

從表3結(jié)果可見，黑蒜多酚粗提物能夠顯著提升受試中、高劑量組小鼠血清中SOD的活性、且黑蒜多酚粗提物亦能顯著提升受試各劑量組小鼠血清中GSH-Px的活性。

2.2 黑蒜多酚粗提物對小鼠肝組織的影響

2.2.1 對小鼠肝組織總抗氧化能力的影響

灌胃給予黑蒜多酚粗提物小鼠30 d后，各受驗劑量組與模型對照組比較，肝組織中總抗氧化能力(T-AOC)結(jié)果見表4。

表3 黑蒜多酚粗提物對小鼠血清中SOD和GSH-Px活性的影響Tab．3Effect of black garlic polyphenols on serum SOD and GSH-Px activities of mice

表4 黑蒜多酚粗提物對小鼠肝組織中T-AOC的影響Tab．4Effect of black garlic polyphenols on hepatic T-AOC of mice

從表4結(jié)果可見，黑蒜多酚粗提物均能顯著提高各受試劑量組小鼠肝組織的T-AOC。

2.2.2 對小鼠肝組織抗氧化活性的影響

灌胃給予黑蒜多酚粗提物小鼠30 d后，各受試劑量組與模型對照組比較，肝組織中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物MDA的含量見表5，SOD和GSH-Px活性結(jié)果見表6。

表5 黑蒜多酚粗提物對小鼠肝組織中MDA的影響Tab．5Effect of black garlic polyphenols on hepatic MDA content of mice

從表5結(jié)果可見，黑蒜多酚粗提物均能顯著降低各受試劑量組小鼠肝組織中MDA的含量。

表6 黑蒜多酚粗提物對小鼠肝組織中SOD和GSH-Px活性的影響Tab．6Effect of black garlic polyphenols on hepatic SOD and GSH-Px activities of mice

從表6結(jié)果可見，黑蒜多酚粗提物均能夠顯著提升各受試劑量組小鼠肝組織中SOD和GSH-Px的活性。

3 討論與結(jié)論

實驗結(jié)果顯示各組受驗小鼠血清和肝組織中過氧化脂質(zhì)降解產(chǎn)物MDA的含量，隨著黑蒜多酚粗提物劑量的增加而明顯降低，同時血清中SOD和GSH-Px活性隨著劑量的增加而顯著增加，亦可顯著提高各組受驗小鼠血清和肝組織中總抗氧化活性TAOC，并均具有統(tǒng)計學(xué)意義。根據(jù)2003版《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》關(guān)于“保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法規(guī)范”中抗氧化功能實驗結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，可認(rèn)為黑蒜多酚粗提物具有抗氧化功能。人體衰老的根本原因就是被蛋白質(zhì)羥自由基誘導(dǎo)氧化和活性氧對蛋白質(zhì)的直接損傷作用［11］。因此提高了人體的抵抗被氧化損傷的能力，就是掌控了延緩衰老的節(jié)奏。

黑蒜這種新產(chǎn)品的出現(xiàn)，以其獨特的黑蒜多酚抗氧化物質(zhì)，為我們?nèi)梭w抵抗被氧化、預(yù)防衰老、防病保健提供了一種新選擇［12］。2016年盧福芝等［13］對黑蒜發(fā)酵過程中總酚含量變化及提取工藝進行了研究。同年，本項目組魏連會等［14］又對黑蒜多酚的純化及組分進行了更加細(xì)致深入的分析研究，進一步明確黑蒜起到抗氧化作用的主要多酚物質(zhì)為沒食子酸、根皮苷及阿魏酸等，這在多酚單體功效成分的研究層面上深深地邁出了一大步，也為黑蒜保健食品明確功效物質(zhì)的基礎(chǔ)理論研究水平的提高做出了努力。通過本文對黑蒜在體內(nèi)血液和肝臟在對MDA、SOD、GSH-Px、T-AOC的抗氧化功效的有益影響研究，及SOD、GSH-Px在抗氧化損傷、抗炎、影響腫瘤凋亡等在醫(yī)療保健領(lǐng)域已突顯出的作用［15-18］，將會對黑蒜在食品和醫(yī)藥方面的廣泛開發(fā)應(yīng)用起到推動作用，繼而還會對其他健康食材的抗氧化保健作用的研究、甚至中草藥的有效成分的功效評價的研究起到借鑒的積極作用。

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Study on Antioxidant Activities of Black Garlic Polyphenols

YANG Heqing1，LIU Yufeng2，*，HAN Qiuju3，JI Yanru2，YANG Qingli2，WEI Lianhui2，DONG Yan2，MA Ruobo4，JIANG Deyou1，*
(1．School of Basic Medical Sciences，Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150046，China; 2．Daqing Branch of Heilongjiang Academy of Sciences，Daqing 163319，China; 3．Heilongjiang Nongken Vocational College，Harbin 150025，China; 4．College of Public Health，Harbin Medical University，Harbin 150081，China)

This study investigated the antioxidant activities of polyphenols in black garlic．According to“health food inspection and evaluation of technical specifications”，SPF grade KM mice were randomly divided into the blank control group，model control group and black garlic polyphenols groups．The mice in the garlic polyphenols groups were treated at a dosage of 2．04，4．10，and 12．25 g/(kg·bw)for 30 days．The gastric oxidative damage was induced by bromobenzene oil．The liver tissues of mice in the control group and black garlic polyphenols treated groups were taken．The MDA contents，superoxide dismutase(SOD)activities，glutathione peroxidase(GSH-Px)activities，and total antioxidant capacity(TAOC)in liver and serum were investigated．The results showed that the contents of MDA in serum and liver tissue of mice significantly decreased，and the activity of SOD，GSH-Px and T-AOC significantly increased with the increase of the crude extract．According to the standard of health food functional evaluation procedure and test method standard，it is concluded that the crude extract of black garlic has the function of antioxidation．

black garlic polyphenols crude extract;oxidative damage induced by bromobenzene oil;antioxidant;total antioxidant capacity

李寧)

TS201．3

A

10．3969/j．issn．2095-6002．2016．06． 008

2095-6002(2016)06-0041- 05

2016-10- 09

黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開發(fā)計劃(重大)項目(PB15F004);黑龍江省財政廳院所基本應(yīng)用技術(shù)研究專項課題(CZ10G03)。

楊賀晴，女，碩士研究生，研究方向為中醫(yī)藥和藥食兩用中藥;

*劉宇峰，女，研究員，主要從事功能食品和生物制藥方面的研發(fā)工作。

。

*姜德友，男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中醫(yī)藥和藥食兩用中藥方面的研究和教學(xué)工作。

。

楊賀晴，劉宇峰，韓秋菊，等．黑蒜多酚粗提物體內(nèi)抗氧化功能研究［J］．食品科學(xué)技術(shù)學(xué)報，2016，34(6):41-45．

YANG Heqin，LIU Yufeng，HAN Qiuju，et al．Study on antioxidant activities of black garlic polyphenols［J］．Journal of Food Science and Technology，2016，34(6):41-45．