蘇婭，孫悅，周才東，夏儒鴻，瞿先華，李冰，張?jiān)葡?/p>

(1.海南醫(yī)學(xué)院，海南海口571101；2.海南省干部療養(yǎng)院，海南海口571100)

CETP基因TaqIB多態(tài)性與海南漢族人群原發(fā)性高血壓的相關(guān)性

蘇婭1.2，孫悅1*，周才東1，夏儒鴻1，瞿先華1，李冰1，張?jiān)葡?

(1.海南醫(yī)學(xué)院，海南海口571101；2.海南省干部療養(yǎng)院，海南?？?71100)

目的分析CETP基因TaqΙB多態(tài)性與海南漢族人群原發(fā)性高血壓(EH)的相關(guān)性。方法收集2013年3月至2014年1月在海南省干部療養(yǎng)院進(jìn)行體檢及治療的海南省漢族301名健康對(duì)照人群(對(duì)照組)和218例EH患者(EH組)的全血DNA，利用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)/限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR/RFLP)檢測(cè)CETP基因TaqΙB多態(tài)位點(diǎn)的基因型，利用SPSS21.0對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果EH組人群的B1B1、B1B2和B2B2頻率分別為38.53%、47.25%、14.22%，對(duì)照組人群分別為45.18%、39.87%、14.95%。EH組人群的B1和B2等位基因頻率分別為62.16%、37.84%，對(duì)照組分別為65.12%、34.88%，上述各項(xiàng)指標(biāo)組間兩兩比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；EH組CETP基因TaqΙB位點(diǎn)B1B1、B1B2和B2B2基因型和B1/B2等位基因頻率分布和對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論CETP基因TaqΙB位點(diǎn)多態(tài)性與海南漢族人群EH無顯著相關(guān)性。

原發(fā)性高血壓；CETP基因；海南漢族；遺傳多態(tài)性；單核苷酸多態(tài)性

原發(fā)性高血壓(EH)的發(fā)生是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的結(jié)果，其發(fā)生可導(dǎo)致患者心血管系統(tǒng)功能的改變，是腦卒中、冠心病、心肌梗死等心腦血管疾病發(fā)生的危險(xiǎn)因素[1-2]。研究顯示，遺傳因素在高血壓病因?qū)W中占據(jù)的比例為30%～50%，研究明確候選基因與EH的關(guān)聯(lián)性對(duì)于明確高血壓的發(fā)病機(jī)制及后續(xù)的治療具有重要的意義[3-4]。許多學(xué)者對(duì)EH候選基因的遺傳變異對(duì)EH的影響進(jìn)行了研究，例如血管收縮相關(guān)基因、膽固醇酯逆向轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因等。膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Cholesteryl ester transfer protein，CETP)是血漿高密度脂蛋白的重要成分之一，控制著膽固醇在血漿脂蛋白間的交換，進(jìn)而影響著膽固醇從血液向肝臟的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過程。研究表明該蛋白編碼基因的遺傳變異與高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平、LDL和HDL顆粒大小有關(guān)[5-7]。NCBΙ的數(shù)據(jù)庫中顯示CETP基因有超過2 000個(gè)突變位點(diǎn)，其中Ι405V、TaqΙB等多態(tài)性位點(diǎn)與腦卒中、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病及長(zhǎng)壽的關(guān)聯(lián)性研究已有諸多報(bào)道[8-10]。陶曉明等[11]對(duì)CETP基因Taq ΙB多態(tài)性與蒙古族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)可影響血脂水平，可能間接參與原發(fā)性高血壓的發(fā)生。為了探討海南人群中CETP基因TaqΙ位點(diǎn)突變與EH的關(guān)聯(lián)性，筆者選擇了218例高血壓患者及301例對(duì)照進(jìn)行了病例比對(duì)研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2013年1月至2014年12月期間在海南省干部療養(yǎng)院住院治療的218例EH患者作為EH組。該組患者年齡55～70歲，高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合以下標(biāo)準(zhǔn)：在患者未服用抗高血壓藥物的情況下，3次不同日期的測(cè)量平均值收縮壓≥140 mmHg (1 mmHg=0.133 kPa)和/或舒張壓≥90 mmHg，或者患者服用抗高血壓藥物，雖然血壓不在上述范圍內(nèi)，均診斷為高血壓。從同期在海南省干部療養(yǎng)院體檢科采集無血緣關(guān)系的海南漢族健康個(gè)體301例作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡55～65歲，肝腎功能正常，排除心血管疾病、糖尿病及血液病病史。

1.2 樣本采集所有入選者抽取晨間空腹靜脈血3 mL，采用EDTA抗凝保存，SDS裂解法提取DNA。

1.3 等位基因特異性PCR擴(kuò)增CETP基因

1.3.1 引物的設(shè)計(jì)與合成利用Primer 5.0，參照文獻(xiàn)[10]設(shè)計(jì)引物，引物序列如表1所示。

表1 PCR擴(kuò)增引物及酶切片段

1.3.2 PCR擴(kuò)增及酶切采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)和瓊脂糖凝膠電泳的方法鑒定CETP基因TaqΙB位點(diǎn)CC(B1B1)、CT (B1B2)、TT基因型(B2B2)。PCR擴(kuò)增反應(yīng)采用Tgradient96型梯度PCR儀，擴(kuò)增體系為20μL，其中DNA模板1μL，2×Es Taq MasterMix 10μL，上下游引物(1μmol/L)各1μL，Rnase-Free Water 7μL。PCR擴(kuò)增條件：94℃預(yù)變性2 min；94℃30 s，65℃30 s，72℃35 s，34個(gè)循環(huán)；72℃再延伸10 min。酶切條件：10× FastDigest 2μL，PCR產(chǎn)物7μL，F(xiàn)astDigest enzyme (TaqΙ)1μL，65℃水浴90 min。

1.4 基因型的判斷及確認(rèn)

1.4.1 基因分型結(jié)果判定根據(jù)酶切產(chǎn)物電泳結(jié)果判斷基因分型。若電泳結(jié)果只有兩條條帶(分別為236 bp和655 bp)，則為野生的純合子B1B1；若電泳結(jié)果有三條條帶(分別為236 bp、655 bp和891 bp)，則為雜合子B1B2；若電泳結(jié)果只有一條條帶(891 bp)則為突變純合子B2B2，如圖1所示，1、3、5、7、9號(hào)樣本的基因型分別為B2B2，B1B2，B2B2，B1B2，B2B2，B2B2。

圖1 CETP基因TaqIB突態(tài)位點(diǎn)基因分型電泳圖

1.4.2 基因分型結(jié)果的驗(yàn)證從高血壓組中隨機(jī)抽取3個(gè)上述建立的PCR-RFLP技術(shù)檢測(cè)后分型出的各種CETP基因型的DNA樣本，送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行DNA序列測(cè)定。結(jié)果表明，酶切方法鑒定的基因型與測(cè)序鑒定的基因型完全相同。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)基因型分布頻率及等位基因分布頻率等計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組受檢者中CETP基因TaqΙB位點(diǎn)B1B1、B1B2、B2B2三種基因型和B1、B2等位基因分布頻率見表2，其中基因型B1B1、B1B2和B2B2組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.13、0.094、0.816)，等位基因B1和B2發(fā)生頻率比較差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表2 CETP基因TaqIB位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率分布[例(%)]

3 討論

CETP在血漿膽固醇代謝中所起的關(guān)鍵作用引起了諸多學(xué)者對(duì)它與血脂及心腦血管疾病關(guān)聯(lián)性的興趣。前瞻性的研究結(jié)果顯示該基因多態(tài)性對(duì)高密度膽固醇HDL-C的濃度有較大影響，且與疾病的發(fā)生密切相關(guān)[12-13]。陶曉明等[11]對(duì)CETP基因Taq ΙB多態(tài)性與蒙古族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)該位點(diǎn)的多態(tài)性與血液中HDL-C、TC、TG的水平密切相關(guān)，但與EH的發(fā)生卻沒有直接的相關(guān)性。本研究顯示EH組CETP基因三種基因型B1B1、B1B2和B2B2的發(fā)生頻率分別為38.53%、47.25%、14.22%，對(duì)照組B1B1、B1B2和B2B2的發(fā)生頻率分別為45.18%、39.87%、14.95%。等位基因B1和B2在EH組中的分布頻率分別為62.16%、37.84%，在對(duì)照組中為65.12%、34.88%。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示CETP基因TaqΙB多態(tài)性與海南漢族原發(fā)性高血壓的發(fā)生不存在顯著相關(guān)性，這與陶曉明等[11]對(duì)蒙古人的研究結(jié)果是一致的。此外，蒙古人群中等位基因B2的發(fā)生頻率為0.41，與東南亞人群及白種人的發(fā)生頻率相近(0.42)[12-13]，而我們對(duì)海南人群的研究發(fā)現(xiàn)B2的頻率為0.35，低于以上人群。

此外，由于本研究未統(tǒng)計(jì)被研究人群的血脂水平及其他相應(yīng)指標(biāo)，故無法探究EH組與對(duì)照組的血脂及其他指標(biāo)的相關(guān)性。因此，應(yīng)擴(kuò)大樣本量，并采集參加本研究人群的各項(xiàng)檢查指標(biāo)，并結(jié)合多種研究方法對(duì)上述結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證。

[1]張紅杰.原發(fā)性高血壓發(fā)病機(jī)制的中西醫(yī)研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,20(19):2465-2467.

[2]路德輝,何愛娣.老年高血壓患者血壓控制狀況及控制不良的因素分析[J].海南醫(yī)學(xué),2009,20(11):303-305.

[3]陳世豪,譚柏松,張偉堅(jiān).原發(fā)性高血壓伴頸動(dòng)脈粥樣硬化與脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2活性水平相關(guān)性研究[J].海南醫(yī)學(xué),2015,26(3):380-382.

[4]竇貴旺,綦巖,吳志紅.G蛋白β亞單位C825T基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性研究[J].生物學(xué)雜志,2009,26(2):18-20,26.

[5]Zhuang YY,Wang JJ,Qiang HJ,et al.Serum cholesteryl ester transfer Protein concerntrations in healthy Chinese subjects and cardio-cerebrovascular diseases patients[J].Clinica Chimica Acta. 2001,305(1-2):19-25.

[6]Nagano M,Yamashita S,HiranoK,et al.Point mutation(-69G-A)in the promoter region of cholesteryl ester transfer protein gene in Japanese hyperalphalipoproteinemic subjects[J].Arterioscfer Thromb Vase Biol,2001,21(6):985-990.

[7]Boekholdt SM,Kuivenhovan JA,Hovingh GK,et al.CETP gene variation:relation to lipid parameters and cardiovascular risk[J].Curr Opin Lipidol,2004,15(4):393-398.

[8]丘洪,張清,鄧兵,等.膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TaqIB基因多態(tài)性與高血壓病患者心腦血管病事件發(fā)生率的影響[J].中國臨床醫(yī)學(xué)雜志, 2009,16(3):341-343.

[9]周代鋒,張勇,蔡苗,等.CETP基因Ι405V突變位點(diǎn)多態(tài)性與冠心病關(guān)系的再探討[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2011,17(10):1297-1299.

[10]張?jiān)葡?周代鋒,王穎.CETP基因Ι405V突變位點(diǎn)多態(tài)性與冠心病關(guān)系的再探討CETP基因1405V多態(tài)性與海南百歲人群長(zhǎng)壽的相關(guān)性[J].中國老年學(xué)雜志,2011,16:1-3

[11]陶曉明,李國江,侯淑琴,等.膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因TaqΙB多態(tài)性與蒙古族原發(fā)性高血壓的相關(guān)性[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,30 (7):677-682.

[12]尤超,趙大球,梁乘榜,等.PCR引物設(shè)計(jì)方法綜述[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科, 2011,17:48-50.

[13]John F.Thompson etal.High-density genotyping and functional SNP localization in the CETP gene[J].J Lipid Res,2007,48(2):434-443.

Correlation between the TaqIB polymorphism of CETP gene and essential hypertension in Hainan Hanpopulation.

SU Ya1,2,SUN Yue1*,ZHOU Cai-dong1,XIA Ru-hong1,QU Xian-hua1,LI Bing1,ZHANG Yun-xia1.1. Hainan Medical University,Haikou 571101,Hainan,CHINA;2.Cadre Sanatorium of Hainan Province,Haikou 571100, Hainan,CHINA

ObjectiveTo analyze the correlation between the TaqΙB polymorphism of CETP gene and essential hypertension(EH)in Hainan Han population.MethodsA total of 301 cases of healthy controls(control group)and 218 cases of EH patients(EH group),who were admitted to the Cadre Sanatorium of Hainan Province from March 2013 to January 2014,were enrolled for this study.The blood DNA was extracted and detected by restriction fragment length polymorphism(RFLP)to understand the TaqΙB polymorphism of CETP.The detection results were analyzed statistically by SPSS21.0.ResultsThe frequencies of B1B1,B1B2 and B2B2 were respectively 38.53%,47.25%,14.22%in EH group,and 45.18%,39.87%,14.95%in the control group.The allele frequencies of B1 and B2 were respectively 62.16%,37.84%in EH group,and 65.12%,34.88%in control group.Pairwise comparisons of all of the above indicators between the two groups had no statistical significance(P＞0.05).There was no statistically significant difference between the two groups in the B1B1,B1B2 and B2B2 genotype,B1/B2 allele frequency distribution on the TaqΙB locus of CETP gene(P＞0.05).ConclusionThere is no significant correlation between the TaqΙB polymorphism of CETP gene and essential hypertension(EH)in Hainan Han population.

Essential hypertension;CETP gene;Hainan Han population;Genetic polymorphism;Single nucleotide polymorphism(SNP)

R544.1

A

1003—6350（2016）13—2077—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.13.004

2015-12-23)

海南省自然科學(xué)基金（編號(hào)：814364）；海南醫(yī)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目（編號(hào)：HYCX2014040）

張?jiān)葡?。E-mail：zhangyunxia1977@qq.com

*共同第一作者