曹錦梅，王兵

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 淮安 223300)

·經(jīng)驗(yàn)交流·

EDTA依賴性假性血小板減少原因分析及糾正方法

曹錦梅，王兵

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 淮安 223300)

目的 分析偶爾發(fā)生在血常規(guī)檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)乙二胺四乙酸鹽(EDTA)依賴性假性血小板減少癥(EDTA-PTCP)的現(xiàn)象和糾正措施。方法分別使用末梢血稀釋法、抗凝劑替換法、網(wǎng)織紅細(xì)胞通道計(jì)數(shù)法、外周血涂片染色法等檢測(cè)方法，對(duì)淮安市一院2例EDTA-PTCP患者的標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果EDTA抗凝常規(guī)通道檢測(cè)血小板數(shù)減少，分別為14×109/L和7×109/L、枸櫞酸鈉抗凝法分別為122×109/L，99×109/L、末梢血稀釋法分別為116× 109/L，95×109/L、網(wǎng)織紅細(xì)胞通道計(jì)數(shù)法分別為127×109/L，105×109/L，血小板計(jì)數(shù)基本正常，直接外周血涂片染色血小板分布正常。結(jié)論EDTA依賴性假性血小板減少現(xiàn)象，可通過(guò)末梢血稀釋法、抗凝劑替代法、網(wǎng)織紅細(xì)胞通道計(jì)數(shù)法、外周血涂片染色法等方法加以糾正。

乙二胺四乙酸鹽；枸櫞酸鈉；血小板計(jì)數(shù)；血小板假性減少癥

血小板是血液的重要形態(tài)之一，在止血和凝血過(guò)程中發(fā)揮重要作用。因此，血小板的數(shù)量及功能在疾病診斷中顯得相當(dāng)重要。目前血小板計(jì)數(shù)臨床各實(shí)驗(yàn)室普遍使用的是全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，其具有操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛普及。EDTA在實(shí)驗(yàn)室血常規(guī)檢查中被定為首選的抗凝劑，其對(duì)血細(xì)胞的形態(tài)和血小板的計(jì)數(shù)影響都很小，因此，被廣泛使用。但近年來(lái)，由此抗凝劑引起的假性血小板減少的現(xiàn)象時(shí)有報(bào)道，淮安市一院從2015年7月至12月就發(fā)現(xiàn)2例，本文分析其原因并探討其糾正方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例1：女，26歲，2015年7月2日卵巢囊腫術(shù)后來(lái)我院復(fù)查。輔助檢查：(1)無(wú)肝脾，淋巴及腫大；(2)心電圖正常；(3)超聲：子宮的大小和形態(tài)正常，子宮肌層光點(diǎn)均勻分布，附件無(wú)異常；(4)肝腎功能正常，血象檢查結(jié)果：白細(xì)胞3.59×109/L，血紅蛋白96 g/L，紅細(xì)胞3.47×1012/L，血小板18×109/L。病例2：男，85歲,糖尿病住院患者，2015年12月2日血常規(guī)檢查結(jié)果：白細(xì)胞5.57×109/L，血紅蛋白93 g/L，紅細(xì)胞3.17×1012/L，血小板5×109/L。全身無(wú)出血癥狀，其他輔助檢查：(1)無(wú)肝脾，淋巴及腫大；(2)心電圖正常；(3)凝血功能正常，肝腎功能正常，治療后血糖也控制在正常范圍內(nèi)，為4.8 mmol/L。2例患者血小板檢測(cè)結(jié)果與臨床癥狀不符，在征得患者同意的情況下分別用末梢血稀釋法、抗凝劑替代法、網(wǎng)織紅細(xì)胞通道法、外周血涂片瑞氏染色法等方法予以糾正。

1.2 儀器與材料 采用日本SysmesXE-2100全自動(dòng)血球分析儀及配套試劑，奧林巴斯雙筒顯微鏡；草酸銨稀釋液，瑞氏染液，清潔干燥無(wú)塵無(wú)油脂載玻片、EDTA-K2抗凝管、枸櫞酸鈉抗凝管。

1.3 方法 兩例患者分別EDTA-K2抗凝負(fù)壓管，枸櫞酸鈉抗凝負(fù)壓管抽取靜脈血2 mL，顛倒混勻后放置10 min分別用常規(guī)通道和網(wǎng)織紅通道各計(jì)數(shù)3次。同時(shí)各吸取末梢血20 μL加添到0.38 mL草酸銨稀釋液中，混勻后沖入計(jì)數(shù)池靜置15 min，顯微鏡下分別計(jì)數(shù)3次。另外再次末梢血直接涂片，EDTA-K2抗凝血涂片，瑞氏染色后顯微鏡觀察。

2 結(jié) 果

末梢血直接涂片瑞氏染色鏡檢顯示血小板形態(tài)、分布正常；EDTA-K2抗凝血涂片瑞氏染色鏡下看到血小板分布不均，片尾有微弱聚集，還可見(jiàn)到衛(wèi)星現(xiàn)象[1]；EDTA-K2抗凝法實(shí)驗(yàn)結(jié)果：常規(guī)通道血小板數(shù)異常；網(wǎng)織紅通道血小板數(shù)正常；枸櫞酸鈉抗凝計(jì)數(shù)結(jié)果：常規(guī)通道、網(wǎng)織紅通道血小板數(shù)基本正常；末梢血草酸銨稀釋法結(jié)果基本在正常范圍，結(jié)果見(jiàn)表1，血小板數(shù)正常參考范圍(100～300×109/L)。EDTA-K2抗凝血涂片瑞氏染色鏡下可看到衛(wèi)星現(xiàn)象，見(jiàn)圖1；外周血直接涂片瑞氏染色鏡檢可見(jiàn)正常分布的血小板，見(jiàn)圖2(×1 000倍)。

表1 兩例患者不同檢測(cè)通道的PLT計(jì)數(shù)結(jié)果(×109/L)

圖1 血小板圍繞在白細(xì)胞周?chē)男l(wèi)星現(xiàn)象

圖2 正常散在分布的血小板

3 討 論

全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀利用電阻抗法或化學(xué)發(fā)光法原理來(lái)計(jì)數(shù)血小板，由于EDTA二鉀抗凝劑基本不影響細(xì)胞形態(tài)，對(duì)細(xì)胞數(shù)目及大小也無(wú)改變等優(yōu)點(diǎn)，被國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)認(rèn)定并廣泛普及使用。而此抗凝劑所致的血小板假性減少現(xiàn)象屢見(jiàn)報(bào)道，引起人們廣泛關(guān)注。對(duì)患者發(fā)生EDTA-PTCP的可能原因，有資料表明是一種隱蔽性抗原存在于血小板的表面，EDTA可促進(jìn)血小板活化，使血小板表面的隱蔽抗原和血漿中的自身抗體相結(jié)合產(chǎn)生一些活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)具有活化血小板纖維蛋白原受體的功能，從而使血小板聚集成一團(tuán)[2]。血細(xì)胞分析儀常規(guī)通道計(jì)數(shù)原理是：不同大小體積的細(xì)胞，通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)電阻值增加，從而引起電壓改變產(chǎn)生一個(gè)脈沖，根據(jù)脈沖的振幅大小來(lái)區(qū)分細(xì)胞大小，根據(jù)產(chǎn)生脈沖的數(shù)目來(lái)計(jì)數(shù)細(xì)胞多少。儀器只能辨別細(xì)胞大小，而辨別不了細(xì)胞類型，從而導(dǎo)致多個(gè)聚集成一團(tuán)的血小板被當(dāng)成了單個(gè)細(xì)胞計(jì)數(shù)或被劃入其他細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍，導(dǎo)致血小板數(shù)目減少。

臨床上此類患者的發(fā)病率較低，為0.09%～0.21%[3]，這個(gè)現(xiàn)象可見(jiàn)于健康的人群中，也可見(jiàn)于某些疾病如癌癥、自身免疫性疾病、糖尿病、肝病及一些原因不明的病癥[4]。以上列舉了4種臨床上便于接受、操作簡(jiǎn)單的糾正EDTA-PTCP的方法，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)是可行的，雖也出現(xiàn)過(guò)個(gè)別病例枸櫞酸鈉抗凝后也發(fā)生血小板聚集現(xiàn)象的報(bào)道[5]，但總體上枸櫞酸鈉抗凝作為糾正EDTA-PTCP的方法之一仍比較常用。另外在末梢血草酸銨稀釋法計(jì)數(shù)血小板時(shí)，使用的器材必須規(guī)范，混懸液滴入計(jì)數(shù)池后應(yīng)靜置15 min后再計(jì)數(shù)，并在1 h內(nèi)完成。時(shí)間過(guò)短，血小板未完全沉下；時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，血小板被破壞，都會(huì)使結(jié)果偏低[6]。EDTA-K2抗凝血在SysmesXE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀網(wǎng)織紅細(xì)胞通道檢測(cè)的血小板數(shù)結(jié)果更為可靠[7]。這是由于核酸染液對(duì)血小板進(jìn)行了染色，再經(jīng)熒光散射判斷，即可較為準(zhǔn)確的得到血小板的數(shù)量。此法既不會(huì)把大血小板算成紅細(xì)胞中,也不易將破碎紅細(xì)胞誤認(rèn)為血小板。因此,網(wǎng)織紅通道檢測(cè)的血小板數(shù)可作為EDTA-PTCP患者實(shí)際血小板數(shù)量。臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員，對(duì)于單純性血小板減少患者，應(yīng)結(jié)合患者的病情、病史、凝血功能等實(shí)驗(yàn)室報(bào)告綜合分析，發(fā)現(xiàn)可疑結(jié)果應(yīng)及時(shí)與患者或醫(yī)生溝通，了解患者具體狀況，及時(shí)復(fù)檢，對(duì)于選擇何種糾正方法，視實(shí)驗(yàn)室及患者具體情況而定，一定要保證檢測(cè)質(zhì)量，為臨床醫(yī)生提供準(zhǔn)確可靠的診斷依據(jù)。

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R558+.2

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1003—6350（2016）11—1881—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.11.055

2015-12-24)

曹錦梅。E-mail：1114737825@qq.com