甘雨，于新發(fā)，周成宇，羅美華，黃維，呂偉標，董嘉堯，林欣琪，陳思東

(1.廣東藥學院，廣東 廣州 510310；2.佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院，廣東 佛山 528300；3.南方醫(yī)科大學，廣東 廣州 510515)

甲胎蛋白在原發(fā)性肝癌的診斷和預后判斷中的臨床價值

甘雨1，于新發(fā)2，周成宇2，羅美華2，黃維2，呂偉標2，董嘉堯3，林欣琪1，陳思東1

(1.廣東藥學院，廣東 廣州 510310；2.佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院，廣東 佛山 528300；3.南方醫(yī)科大學，廣東 廣州 510515)

目的 探討癌組織和血清中的甲胎蛋白(AFP)水平與原發(fā)性肝癌(PHC)的臨床特點和預后關系，為臨床診治提供依據。方法選取2004年11月至2014年6月期間順德人民醫(yī)院收治的均經組織學病理證實為新發(fā)PHC患者62例，分別應用免疫組化S-P法和化學發(fā)光免疫分析法檢測所有患者的AFP，分析不同AFP水平患者的臨床特點和生存時間的差異。結果PHC患者中，肝癌組織中AFP的表達程度與血清中AFP的濃度之間呈正相關的(χ2=22.71，P＜0.001，r=0.488)；PHC患者血清中AFP濃度高低與腫瘤大小有關(χ2=7.83，P=0.025)；組織中AFP表達程度與有無HBV感染有關(χ2=4.08，P=0.043)；PHC組織中AFP陽性組生存時間長于陰性組(39.0個月vs 24.9個月)，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.90，P＞0.05)。結論血清中甲胎蛋白的濃度與原發(fā)性肝癌腫瘤大小有關；HBV感染影響肝癌患者甲胎蛋白的表達量，定期監(jiān)測甲胎蛋白濃度變化，有助于早期肝癌的發(fā)現(xiàn)。肝癌組織中AFP陽性患者生存期高于陰性，但差異無統(tǒng)計學意義，今后可加大樣本量進行進一步的探討。

原發(fā)性肝癌；甲胎蛋白；臨床特點；預后

我國是原發(fā)性肝癌(Primary hepatic carcinoma，PHC)的高發(fā)地區(qū)，肝癌的死亡人數(shù)占世界的一半以上。我國肝癌的發(fā)病率位列惡性腫瘤疾病譜的第四，病死率位列惡性腫瘤死因譜的第二[1]，且呈持續(xù)上升趨勢。肝癌起病隱匿，發(fā)展迅速，大部分患者被發(fā)現(xiàn)時已是晚期，無法實施根治性手術，預后差。即使是部分中晚期患者實施了根治術，復發(fā)率也較高。因此，肝癌的早發(fā)現(xiàn)和早治療，對降低肝癌的病死率，延長患者的生存期至關重要。

甲胎蛋白(Alpha fetoprotein，AFP)是用于診斷PHC最主要的特異性標志物[2]，臨床上也常使用AFP作為PHC患者治療效果的監(jiān)測指標。但40%早期肝癌患者AFP往往正常[3]，甚至有些患者從發(fā)病到死亡AFP一直持續(xù)陰性，使肝癌患者得不到早期診斷和救治。目前影響AFP升高的因素尚不明確，對肝癌組織和血清中的AFP關系的研究也相對較少。AFP與PHC預后的關系，國內外報道也不一致。本研究在我國肝癌四大高發(fā)區(qū)之一(廣東省佛山市順德區(qū))，對原發(fā)性肝癌患者組織中AFP的表達與血清中的濃度之間的關系進行探討，分析其與臨床特點、預后的關系，以期提高PHC患者的診斷率，延長生存期，同時為肝癌患者治療提供可用的評估預后的標志物和監(jiān)測物。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2004年11月至2014年6月期間順德人民醫(yī)院收治的PHC患者62例，所有患者均經組織學病理證實，且入院前均未行全身或者局部放化療和手術治療，均為順德當?shù)鼐用瘛Ｆ渲?，男?4例，年齡28～80歲，平均年齡54.54歲(標準差SD= 13.61)；女性8例，年齡31～60歲，平均(45.75±12.00)歲。62例中行手術治療者47例。對納入的62例病例均進行電話隨訪，從入院時間開始計算，每半年隨訪一次，終點為死亡日期或末次隨訪時間，末次隨訪時間為2014年11月30日。生存時間為確診肝癌起至死亡或末次隨訪時間。其中，失訪4例。

1.2 方法 應用免疫組化S-P法檢測肝癌組織中AFP表達，實驗步驟按照說明書進行；采用化學發(fā)光免疫分析法檢測血清AFP水平。

1.3 結果判定 AFP濃度均為首次確診肝癌時檢測的濃度，將AFP的濃度分為陰性組(＜20 μg/L)和陽性組，陽性組分為20～400 μg/L和＞400 μg/L兩組。測定正常值為AFP＜20 μg/L，＞20 μg/L為升高。AFP在肝癌組織中的表達結果由2位病理科醫(yī)生共同判定，以細胞質或細胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSSV20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據分析。血清中AFP的濃度與組織中AFP表達的關系采用Spearman相關；臨床特點各組資料率的比較采用χ2或Fisher概率法；組織和血清中AFP各組應用Kaplan-Meier方法計算總的1、3、5年生存率，并繪制生存曲線，對其生存分布采用Log-Rank方法檢驗。所有統(tǒng)計學檢驗均為雙側概率檢驗，檢驗水準為0.05。

2 結 果

2.1 PHC患者血清中AFP濃度與肝癌組織中表達的關系 在PHC患者中，肝癌組織中AFP的表達程度與血清中AFP的濃度之間呈正相關(χ2=22.71，P＜0.001，r=0.488)，見表1。

表1 血清中AFP的濃度與肝癌組織中AFP表達的關系[例(%)]

2.2 PHC組織和血清中AFP臨床特點的關系 在62例肝癌患者中，血清中AFP濃度＜20 μg/L者33例(53.2%)，20～40 μg/L者16例(25.8%)，＞400 μg/L者13例(20.9%)。血清中AFP濃度高低與腫瘤大小之間存在相關性(χ2=7.83，P=0.025)；但與HBV感染史、肝硬化史、是否侵犯門靜脈、有無淋巴結轉移和遠處轉移無關。肝癌組織中AFP表達呈陰性者43例(69.4%)，陽性者19例(30.6%)。組織的AFP表達僅與有無HBV感染有關(χ2=4.08，P=0.043)，見表2。

2.3 PHC患者AFP血清濃度、組織表達程度與預后的關系 62例肝癌組織中AFP陽性者的中位生存期為39.0個月，高于AFP陰性者的中位生存期(24.9個月)，但兩組生存時間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。不同血清AFP濃度的患者之間生存時間比較差異也無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表3和圖1。

表2 PHC組織和血清中的AFP臨床特點的關系[例(%)]

表3 肝癌組織中AFP表達程度、血清中濃度和生存期的關系

圖1 PHC患者組織中AFP表達程度與生存期的關系

3 討 論

正常情況下，成人血清中僅有微量的甲胎蛋白。當發(fā)生原發(fā)性肝癌時，AFP基因被重新激活而表達AFP，使得血清中AFP濃度升高，其診斷作用已被肯定并長期應用于臨床。目前雖然開發(fā)了許多肝癌的血清學標志物，但仍局限于某些實驗室中應用并未大規(guī)模用于普查之中，AFP依然是診斷原發(fā)性肝癌應用最廣泛的血清標志物。本文研究結果顯示：AFP在原發(fā)性肝癌患者血清和組織中的關系是呈正相關(r= 0.488，P＜0.05)。血清中AFP濃度的高低與腫瘤直徑大小有關。在原發(fā)性肝癌早期，特別是腫瘤直徑≤3 cm時，血清中AFP水平往往為陰性，利用AFP可能無法有效發(fā)現(xiàn)直徑較小的肝癌[4]，而不利于肝癌患者的早期檢出、救治和預后。本文中肝癌患者血清中AFP的陽性率為46.8%，低于文獻70%的報導，也可能與納入的部分患者腫瘤直徑較小有關。同時，AFP濃度升高可伴隨著腫瘤體積的增大和臨床病程的演進。吳孟超等[5]對1 000例肝細胞癌的臨床病理研究發(fā)現(xiàn)，≤3 cm以下肝癌患者的5年術后生存率可以達到82.4%，而肝癌總體5年生存率僅為27.5%。相對于AFP陽性患者來說，AFP陰性的臨床癥狀也較輕，更容易造成漏診[6]。因此，為了早期發(fā)現(xiàn)肝癌、降低病死率，在臨床需要聯(lián)合多個血清學標志物或來檢測PHC[7]。

對肝癌組織中AFP的表達與HBV感染間的關系國內外研究報道較少。本研究結果表明AFP在肝癌組織中的表達與HBV感染有關。HBV可能通過某種途徑促進AFP在肝癌組織的表達，其原因可能與HBx基因變異和HBV基因與宿主肝細胞DNA整合有關。變異的HBx基因與p53結合，影響p53對細胞周期的控制作用，導致肝細胞過度增殖，促使AFP合成增加[8]；隨著肝細胞反復變性壞死及增生后，病變肝組織中的錯誤復制的概率明顯增高進而導致基因突變的幾率大增，最終導致癌基因及相關生長因子激活概率升高從而誘發(fā)肝癌。在HBV相關的PHC中，AFP可先于PHC的發(fā)生而表達。在我國HBV已被證實是原發(fā)性肝癌發(fā)生的最主要的危險因素[9]。國內一項報道顯示對AFP陽性的PHC患者來說，HBV的感染率可達到98.57%[10]。因此，針對HBV感染者來說，定期監(jiān)測AFP的濃度變化有利于肝癌的早期發(fā)現(xiàn)。

一項對108例進行肝癌手術治療的患者研究發(fā)現(xiàn)，組織中AFP表達高者預后好，生存時間較長[11]。一方面可能是由于AFP高表達者在術后隨訪時血液中AFP再次顯著增高，并往往先于影像學發(fā)現(xiàn)肝癌復發(fā)，而利于早期檢出和治療；另一方面可能與AFP在組織中的表達程度與細胞分化程度有關Ⅳ級肝癌細胞分化極差，已經失去了合成AFP的能力，預后差。另有研究指出AFP陰性表達者預后好，生存時間較長[12-13]。其原因可能是由于AFP在PHC的發(fā)生、發(fā)展過程中起到了一定的生物學作用。相關研究表明AFP與免疫功能抑制有關，AFP可作用于免疫系統(tǒng)協(xié)助腫瘤逃逸免疫攻擊和促進肝癌細胞的生長[14]。王興旺等[15]指出AFP基因的異常高表達可能是維持肝癌細胞惡性生長的分子基礎。AFP在肝癌的生物學進程中可能具有促進侵襲、轉移和增殖的作用[16-19]，AFP可通過多個環(huán)節(jié)影響PHC的預后。本文中，組織AFP陽性患者生存期高于陰性者，但差異沒有統(tǒng)計學意義，可能與納入的樣本量較少有關，今后可加大樣本量進行進一步的研究。

綜上所述，對PHC的早期發(fā)現(xiàn)應聯(lián)合多個腫瘤標記物和影像學進行檢測，以防發(fā)生漏診。針對HBV感染者來說，應密切關注AFP濃度的變化以早期發(fā)現(xiàn)肝癌，增加生存時間。AFP在肝癌的發(fā)展、發(fā)展進程中扮演著一個復雜的角色，對AFP在原發(fā)性肝癌中所起的作用還需要進行更加深入的探討。

[1]陳萬青,鄭榮壽,張思維.中國惡性腫瘤的動態(tài)變化[J].科技導報, 2014(26):65-71.

[2]Baig JA,Alam JM,Mahmood SR,et al.Hepatocellular carcinoma (HCC)and diagnostic significance of A-fetoprotein(AFP)[J].J Ayub Med CollAbbottabad,2009,21(1):72-75.

[3]Malaguarnera M,Di Rosa M,Nicoletti F,et al.Molecular mechanisms involved in NAFLD progression[J].J Mol Med(Berl),2009, 87(7):679-695.

[4]Carr BI,Guerra V,Giannini EG,et al.Significance of platelet and AFP levels and liver function parameters for HCC size and survival [J].Int J Biol Markers,2014,29(3):e215-e223.

[5]吳孟超,叢文銘,張曉華,等.1000例肝細胞癌的臨床病理研究[J].腫瘤防治研究,1993,20(3):137-139.

[6]白飛.AFP陰性肝細胞癌的臨床特點及預后分析[D].長沙:中南大學,2010.

[7]陶嵐.血清AFP、CEA、CA-199、CA-50聯(lián)合檢測對消化道惡性腫瘤的篩查價值[J].海南醫(yī)學,2011,22(23):12-14.

[8]Ogden SK,Lee KC,Barton MC.Hepatitis B viral transactivator HBx alleviates p53-mediated repression of alpha-fetoprotein gene expression[J].J Biol Chem,2000,275(36):27806-27814.

[9]Chen J G,Zhang S W.Liver cancer epidemic in China:past,present and future[J].Semin Cancer Biol,2011,21(1):59-69.

[10]符文鋒.210例AFP陽性原發(fā)性肝癌血清HBV抗原抗體模式分析[J].海南醫(yī)學,2003,14(3):25-26.

[11]劉勝榮,刁平,黃曉紅.AFP在原發(fā)性肝癌組織和血清中的表達與臨床、病理的相關性研究[J].中國腫瘤外科雜志,2012,4(4): 223-226.

[12]錢光陽,徐敏暉,李建軍,等.肝細胞癌甲胎蛋白表達與肝祖細胞激活狀態(tài)及患者預后的關系[J].第二軍醫(yī)大學學報,2012,33(2): 136-139.

[13]畢新宇,閻濤,趙宏,等.甲胎蛋白水平與肝細胞癌預后的相關性分析[J].中華醫(yī)學雜志,2014,94(34):2645-2649.

[14]Evdokimova V N,Liu Y,Potter D M,et al.AFP-specific CD4+helper T-cell responses in healthy donors and HCC patients[J].J Immunother,2007,30(4):425-437.

[15]王興旺,胥彬.針對甲胎蛋白異常研究抗肝癌物質[J].中華腫瘤雜志,1998(2):78-79.

[16]Kojima K,Takata A,Vadnais C,et al.MicroRNA122 is a key regulator of α-fetoprotein expression and influences the aggressiveness of hepatocellular carcinoma[J].Nature Communications,2011,2:338.

[17]Kamiyama T,Yokoo H,Kakisaka T,et al.Multiplication of alpha-fetoprotein and protein induced by vitamin K absence-Ⅱis a powerful predictor of prognosis and recurrence in hepatocellular carcinoma patients after a hepatectomy[J].Hepatol Res,2014,45(10):E21-31.

[18]Wang L,Huang J,Jiang M,et al.AFP computational secreted network construction and analysis between human hepatocellular carcinoma(HCC)and no-tumor hepatitis/cirrhotic liver tissues[J].Tumour Biol,2010,31(5):417-425.

[19]朱明月,李孟森.甲胎蛋白:治療肝癌的新靶點[J].海南醫(yī)學,2014, 25(1):1-4.

Application of alpha-fetoprotein in the diagnosis of primary hepatic carcinoma and prediction of the patients'prognosis.

GAN Yu1,YU Xin-fa2,ZHOU Cheng-yu2,LUO Mei-hua2,HUANG Wei2,LV Wei-biao2,DONG Jia-yao3,LIN Xin-qi1,CHENG Si-dong1.1.Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510310,Guangdong, CHINA;2.The First People's of Shunde District of Foshan,Foshan 528300,Guangdong,CHINA;3.Southern Medical University,Guangzhou 510515,Guangdong,CHINA

Objective To investigate the relationship between the clinical characteristics and prognosis of primary hepatic carcinoma(PHC)and alpha-fetoprotein(AFP)in cancer tissue and serum.MethodsAtotal of 62 patients diagnosed as PHC in the First People′s of Shunde District of Foshan from November 2004 to June 2014 was enrolled.AFP in the cancer tissue and serum were detected by immunohistochemically and chemoluminescence immunoassay,respectively. The clinical characteristics and survival time in patients with different levels of AFP were analyzed.ResultsIn patientswith PHC,the expression level of AFP in cancer tissue was positively correlated serum AFP level(χ2=22.71，P＜0.001，r= 0.488),and the serum AFP level was significantly associated with the tumor size(χ2=7.83,P=0.025).The tissue AFP expression was correlated to the status of HBV infection(χ2=4.08,P=0.043).The survival time of the patients with positive AFP was longer than that of the AFP-negative patients(39.0 months vs 24.9 months),but without significant difference(χ2=1.90,P＞0.05).ConclusionIn patients of PHC,the serum AFP level is significantly associated with the tumor size,and HBV infection influences the expression of AFP.Regular monitoring of the AFP changes could help detect primary hepatic carcinoma early.The survival time is longer in AFP-positive patients than AFP-negative patients,but with no statistically significant difference.

Primary hepatic carcinoma(PHC);Alpha-fetoprotein(AFP);Clinical characteristic;Prognosis

R735.7

A

1003—6350（2016）06—0891—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.06.011

2015-08-30)

陳思東。E-mail:chensidong1@126.com