朱鋒，彭啟松，居蓉

(南京市江寧醫(yī)院檢驗科，江蘇 南京 211100)

VEGF、MMP-2和MMP-9檢測在子宮內(nèi)膜異位癥診斷中的應(yīng)用價值

朱鋒，彭啟松，居蓉

(南京市江寧醫(yī)院檢驗科，江蘇 南京 211100)

目的 檢測子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)患者血清及腹腔液中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的濃度，并探討其與EMs的診斷及分期的意義。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)定量測定2012年1月至2014年12月于我院婦科住院的64例EMs患者血清和腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度，并與30例子宮肌瘤患者(非EMs組)進行比較分析。結(jié)果EMs組患者血清中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度分別為(235.7±61.2)ng/L、(196.3±51.8)μg/L和(231.6±44.0)μg/L，腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度分別為(856.2±260.5)ng/L、(45.1±13.6)μg/L和(53.4±19.0)μg/L。EMs組患者血清及腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度顯著高于非EMs組，Ⅲ～Ⅳ期濃度顯著高于Ⅰ～Ⅱ期和非EMs組(P＜0.01)；Ⅰ～Ⅱ期中VEGF濃度顯著高于非EMs組(P＜0.01)。結(jié)論在EMs患者血清及腹腔液中高濃度的VEGF、MMP-2和MMP-9與EMs的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)，檢測VEGF、MMP-2和MMP-9濃度有助于EMs的診斷與分期評估。

子宮內(nèi)膜異位癥；血管內(nèi)皮生長因子；基質(zhì)金屬蛋白酶-2；基質(zhì)金屬蛋白酶-9

子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EMs)是指具有生長功能的子宮內(nèi)膜組織出現(xiàn)在子宮腔被覆黏膜以外的身體其他部位而形成異位病灶，本疾病是生育年齡女性的常見病和多發(fā)病，嚴重影響患者的生活質(zhì)量。EMs發(fā)病機制較為復雜，包括內(nèi)分泌因素、免疫因素和血管生成因子等相互作用，共同參與了EMs的發(fā)生及發(fā)展[1]。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在破壞和降解細胞外基質(zhì)和血管生成中起著重要的作用。筆者采用聯(lián)合檢測EMs患者、子宮肌瘤患者血清和腹腔液中的VEGF、MMP-2和MMP-9的濃度，并探討其與EMs的診斷及分期的意義，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 EMs患者和子宮肌瘤患者均為2012年1月至2014年12月我院婦科住院的患者，EMs組64例，年齡21～45歲，平均(31.5±8.0)歲。按美國生育學會修正分期法[2]分期，Ⅰ～Ⅳ期患者分別為4例、29例、26例和5例。由于Ⅰ、Ⅳ組病例較少，故將Ⅰ～Ⅱ組和Ⅲ～Ⅳ期組合并分組。30例同期住院的子宮肌瘤患者(非EMs組)，年齡22～43歲，平均(30.0±7.5)歲，兩組年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 抽取患者空腹外周靜脈血3 ml，離心10 min，取血清-20℃冰箱保存。EMs和非EMs患者在手術(shù)時腹腔鏡抽吸沒被血液污染的腹腔液，離心10 min，取上清液-20℃冰箱保存。

1.2.2 檢測方法 采用ELISA方法檢測VEGF、MMP-2和MMP-9濃度，檢測試劑盒由深圳晶美生物工程有限公司提供，嚴格按說明書進行操作。定值標準品均做復孔，取均值計算直線相關(guān)方程系數(shù)，建立標準方程。每份樣品均做復孔，取均值代入上述回歸方程計算各樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者血清中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度比較 EMs組患者血清中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度顯著高于非EMs組，兩組結(jié)果比較差異均具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，見表1。

2.2 EMs組和非EMs組患者腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度比較 EMs組腹腔液中VEGF、 MMP-2和MMP-9濃度顯著高于非EMs組，兩組結(jié)果比較差異均具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，見表2。

表1 兩組患者血清中VEGF、MMP-2及MMP-9濃度比較(±s)

表1 兩組患者血清中VEGF、MMP-2及MMP-9濃度比較(±s)

例數(shù)組別VEGF(ng/L)MMP-2(μg/L)MMP-9(μg/L) 64 30 EMs組非EMs組t值P值235.7±61.2 118.4±35.1 10.26＜0.01 196.3±51.8 125.0±29.5 6.13＜0.01 231.6±44.0 142.9±28.6 7.04＜0.01

表2 兩組患者腹腔液中VEGF、MMP-2及MMP-9濃度比較(±s)

表2 兩組患者腹腔液中VEGF、MMP-2及MMP-9濃度比較(±s)

組別 例數(shù)VEGF(ng/L)MMP-2(μg/L)MMP-9(μg/L) EMs組非EMs組t值P值64 30 856.2±260.5 273.6±55.2 13.37＜0.01 45.1±13.6 19.2±8.8 9.61＜0.01 53.4±19.0 23.9±7.6 7.52＜0.01

2.3 不同分期EMs患者血清中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度比較 血清中VEGF濃度Ⅲ～Ⅳ期組＞Ⅰ～Ⅱ期組＞非EMs組，組間比較差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，而MMP-2和MMP-9只有Ⅲ～Ⅳ期組顯著高于Ⅰ～Ⅱ期組(P＜0.01)，見表3。

表3 不同分期EMs患者血清中VEGF、MMP-2及MMP-9濃度比較(±s)

表3 不同分期EMs患者血清中VEGF、MMP-2及MMP-9濃度比較(±s)

注：與非EMs組比較，aP＜0.01；與Ⅰ～Ⅱ期組比較，bP＜0.01。

臨床分期 例數(shù)VEGF(ng/L)MMP-2(μg/L)MMP-9(μg/L)Ⅲ～Ⅳ期組Ⅰ～Ⅱ期組非EMs組31 33 30 298.6±84.3b171.2±45.8a118.4±35.1 250.4±73.3b132.3±34.6 125.0±29.5 302.5±53.6b151.8±35.2 142.9±28.6

2.4 不同分期EMs患者腹腔液VEGF、MMP-2和MMP-9濃度比較 腹腔液中VEGF濃度Ⅲ～Ⅳ期組＞Ⅰ～Ⅱ期組＞非EMs組，組間比較差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，而MMP-2和MMP-9只有Ⅲ～Ⅳ期組顯著高于Ⅰ～Ⅱ期組(P＜0.01)，見表4。

表4 不同分期EMs患者腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度比較(±s)

表4 不同分期EMs患者腹腔液中VEGF、MMP-2和MMP-9濃度比較(±s)

注：與非EMs組比較，aP＜0.01；與Ⅰ～Ⅱ期組比較，bP＜0.01。

臨床分期 例數(shù)VEGF(ng/L)MMP-2(μg/L)MMP-9(μg/L)Ⅲ～Ⅳ期組Ⅰ～Ⅱ期組非EMs組31 33 30 1170.4±323.9b641.3±195.0a273.6±55.2 63.6±18.7b20.5±9.1 19.2±8.8 78.1±26.4b25.7±8.2 23.9±7.6

2.5 VEGF、MMP-2及MMP-9的濃度在EMs組Ⅲ～Ⅳ期、Ⅰ～Ⅱ期與非EMs組比值 VEGF在血清及腹腔液中Ⅲ～Ⅳ期組/非EMs組和Ⅰ～Ⅱ期組/非EMs組均較大，MMP-2和MMP-9在Ⅲ～Ⅳ期組/非EMs組較大，見表5。

表5 不同期別VEGF、MMP-2及MMP-9與非EMs組中相應(yīng)指標的比較(±s)

表5 不同期別VEGF、MMP-2及MMP-9與非EMs組中相應(yīng)指標的比較(±s)

比值血清腹腔液Ⅲ～Ⅳ期組/非EMs組Ⅰ～Ⅱ期組/非EMs組VEGF 2.52±0.32 1.45±0.29 MMP-2 2.00±0.26 1.06±0.09 MMP-9 2.12±0.36 1.06±0.14 VEGF 4.28±0.53 2.34±0.41 MMP-2 3.3±0.21 1.07±0.73 MMP-9 3.26±0.14 1.08±0.11

3 討 論

VEGF主要來源于腹腔內(nèi)活化的巨噬細胞，由兩個相同的亞基以二硫鍵交聯(lián)結(jié)合形成的二聚體糖蛋白，具有高度保守性。VEGF是現(xiàn)在大家公認的最重要的促血管形成因子及血管形成的先決條件，其功能主要有促進血管內(nèi)皮細胞增殖和遷移生長，它還能增加微血管通透性，加速血管生長。高濃度的VEGF可促使子宮內(nèi)膜異位癥患者的子宮內(nèi)膜中病灶處生成新生血管，使其易于在腹膜表面種植和生長[3]。Fujii等[4]發(fā)現(xiàn)EMs患者中高表達的VEGF能維持異位內(nèi)膜的血管保持較高的活性，加速異位內(nèi)膜在該部位進一步增生和浸潤至盆腔和腹膜內(nèi)組織，擴大病灶的深度及范圍，形成腹腔的異位灶。高濃度的VEGF還能作用于內(nèi)皮細胞，促進內(nèi)皮增生和增加血管通透性，促進包括纖維蛋白原在內(nèi)的血漿蛋白的滲出，加速異位內(nèi)膜的種植和生長[5]。劉淑艷[6]報道EMs組各期術(shù)前血清及腹腔液中VEGF濃度均高于對照組，隨著分期的增加，其濃度顯著升高(P＜0.05)，手術(shù)后VEGF濃度顯著下降，但仍高于對照組(P＜0.05)。

MMP-2和MMP-9是含Zn2+的參與降解細胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)及基底膜的最重要的蛋白酶，主要由巨噬細胞、單核細胞、破骨細胞、成纖維細胞、血管內(nèi)皮細胞以及各種腫瘤細胞產(chǎn)生，是降解ECM的主要酶類之一。MMP-2和MMP-9在異位內(nèi)膜中高表達，能降解ECM，有利于細胞遷移，促進新生血管生成和重建，同時與整合素相互作用來加強細胞之間的粘附作用[7]。袁國平等[8]研究表明，EMs組MMP-2和MMP-9表達水平顯著高于健康對照組，且Ⅲ～Ⅳ期EMs患者表達顯著高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.001)。黃麗霞等[9]報道EMs組MMP-9和VEGF的表達較治愈組和對照組明顯升高(P＜0.05)，治愈后其表達與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，并進一步證實MMP-9和VEGF的表達呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.805)。

本研究結(jié)果表明，血清和腹腔液VEGF濃度為Ⅲ～Ⅳ期＞Ⅰ～Ⅱ期＞非EMs組，各組間均有非常顯著性差異。而血清和腹腔液中MMP-2和MMP-9均為Ⅲ～Ⅳ期顯著高于Ⅰ～Ⅱ期和非EMs組，但Ⅰ～Ⅱ期和非EMs組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，與文獻報道的結(jié)果基本一致[7]。提示血清和腹腔液中的VEGF、MMP-2和 MMP-9濃度可作為EMs分期依據(jù)，即血清和腹腔液中單純的VEGF升高可能為Ⅰ期或Ⅱ期EMs患者，VEGF、MMP-2和MMP-9三者均升高可能為Ⅲ或Ⅳ期EMs患者。本研究還發(fā)現(xiàn)EMs組和非EMs組腹腔液中VEGF濃度顯著高于血清濃度，而MMP-2和MMP-9血清中的濃度顯著高于腹腔液(P＜0.01)，表明VEGF、MMP-2和MMP-9在循環(huán)和局部的分布不同，其生理和病理意義也不同。VEGF、MMP-2和MMP-9濃度變化與EMs患者的病理分期也具有一定的意義，Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期EMs患者VEGF分別升高2倍及4倍以上，因此，血清和腹腔液中VEGF、MMP-2及MMP-9濃度升高有助于EMs的輔助診斷及臨床分期，腹腔液中的VEGF、MMP-2和MMP-9升高的幅度越大越有參考價值。但是腹腔液標本難于獲取，從患者的安全角度考慮，采用血清檢測風險更小，更易于臨床推廣應(yīng)用。

[1]Szenajch J,Wcislo G,Jeong JY,et al.The role of erythropoietin and its receptor in growth,survival and therapeutic response of human tumor cells from clinic to bench:a critical review[J].Biochim Biophys Acta,2010,1806(1):82-95.

[2]樂杰.婦產(chǎn)科學[M].6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004,354-362.

[3]Taylor RN,Yu J,Torres PB,et al.Mechanistic and therapeutic implications of angiogenesis in endometriosis[J].Reprod Sci,2009,16 (2):140-146.

[4]Fujii EY,Nakayama M,Nakagawa A.Concentrations of receptor for advanced glycation end products,VEGF and CML in plasma,follicular fluid and peritoneal fluid in women with and without endometriosis[J].Reprod Sci,2008,15(10):1066-1074.

[5]姚紅梅,郭靜,石秀玲.VEGF、CD44v6、MMP-9在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達及臨床意義[J].濟寧醫(yī)學院學報,2013,36(2): 124-126.

[6]劉淑艷.子宮內(nèi)膜異位癥患者外周血和腹腔液中血管生成素-2和血管內(nèi)皮細胞生長因子水平的檢測及臨床意義[J].海南醫(yī)學, 2010,21(10):86-87.

[7]李璐,鐘惠珍.MMP-9、bFGF在子宮內(nèi)膜異位癥患者血清與腹腔液中表達的相關(guān)性研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2012,50(34):63-64.

[8]袁國平,陳俊杰,謝芳.MMP-2、MMP-9及其組織抑制因子在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2014,24(9): 1267-1268.

[9]黃麗霞,馬利國,蔡如玉,等.子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜的MMP-9和VEGF的表達[J].海南醫(yī)學,2015,26(23):3478-3480.

Application value of testing VEGF,MMP-2 and MMP-9 in the diagnosis of endometriosis.

ZHU Feng,PENG Qi-song,JU Rong.Department of Clinical Laboratory,the Jiangning Hospital of Nanjing,Nanjing 211100,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo detect the levels of vascular endothelial growth factor(VEGF),matrix metalloproteinase-2(MMP-2)and matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in sera and peritoneal fluid,and to study their relationship with the diagnosis and staging of endometriosis(EMs).MethodsThe concentrations of VEGF,MMP-2 and MMP-9 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)in sera and peritoneal fluid from 64 patients with EMs(EMs group)from Jan.2012 to Dec.2014 in the Department of Gynaecology in our hospital.The results were compared with those of 30 patients with hysteromyoma(non-EMs group).ResultsThe concentrations of VEGF,MMP-2,MMP-9 were (235.7±61.2)ng/L,(196.3±51.8)μg/L,(231.6±44.0)μg/L in sera in EMs group and(856.2±260.5)ng/L,(45.1±13.6)μg/L and(53.4±19.0)μg/L in peritoneal fluid in EMs group.The concentrations of VEGF,MMP-2 and MMP-9 in sera and peritoneal fluid in EMs group were significantly higher than those of the non-EMs group,and the concentrations were significantly higher in EMs patients ofⅢ～Ⅳstage than those in EMs patients ofⅠ～Ⅱstage and non-EMs group(P＜0.01),and also in EMs patients ofⅠ～Ⅱstage than those in non-EMs group(P＜0.01).ConclusionThe higher expression of VEGF, MMP-2 and MMP-9 in serum and peritoneal fluid in EMs patients suggested that they were associated with the occurrence and development of EMs.Detecting the concentrations can be helpful for the diagnosis and stage evaluation.

Endometriosis(EMs);Vascular endothelial growth factor(VEGF);Matrix metalloproteinase-2 (MMP-2);Matrix metalloproteinase-9(MMP-9)

R711.71

A

1003—6350（2016）06—0880—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.06.007

2015-08-20)

朱鋒。E-mail：924243146@qq.com