溫錦益 廖子鴻 戴冠東 黃健

膝關(guān)節(jié)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中脂聯(lián)素水平與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系

溫錦益 廖子鴻 戴冠東 黃健

目的探究膝關(guān)節(jié)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者關(guān)節(jié)液中脂聯(lián)素水平與病情嚴(yán)重程度的關(guān)系。方法120例關(guān)節(jié)炎患者,其中經(jīng)臨床確診為膝關(guān)節(jié)RA患者60例(觀察組),普通骨性關(guān)節(jié)炎患者60例 (對照組)。給予患者相同的非對照處理方式包括護(hù)理等手段,通過同位素標(biāo)記相對和絕對定量(iTRAQ) 技術(shù)檢測患者體內(nèi)脂聯(lián)素的含量,分析病情嚴(yán)重程度與脂聯(lián)素含量的關(guān)系。結(jié)果經(jīng)過iTRAQ技術(shù)發(fā)現(xiàn),2個月后觀察組脂聯(lián)素濃度明顯高于對照組(P＜0.05),且隨著患者RA的病情程度加重患者體內(nèi)的脂聯(lián)素含量呈增加趨勢(P＜0.05),相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),關(guān)節(jié)液脂聯(lián)素水平與RA分級呈正相關(guān)(rs=0.525,P＜0.05)。結(jié)論脂聯(lián)素在膝關(guān)節(jié)RA患者中高度表達(dá),脂聯(lián)素與患者的病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)關(guān)系。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；脂聯(lián)素；病情嚴(yán)重程度

RA在大多數(shù)情況下是指人體中的一種自身免疫性疾病,是一種由于具有相同過敏原而引起的慢性綜合征,是一種常發(fā)生在外周關(guān)節(jié)處的非特殊免疫性疾病。疾病多引起患者的病變關(guān)節(jié)處及其周圍的組織發(fā)生進(jìn)行性破壞,從而引起關(guān)節(jié)的功能障礙,嚴(yán)重者會累及鄰近部位病變,如肌肉、韌帶、滑液等的病變［1］。目前有研究表明,脂聯(lián)素的濃度與RA病變程度有著密切的聯(lián)系［2,3］。但是近年來有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)［2］,脂聯(lián)素可以在很多情況下拮抗炎癥介質(zhì),并且提出了脂聯(lián)素參與了骨的代謝以及關(guān)節(jié)病的發(fā)生,但仍然存在很多的爭議,為了驗證這一說法的正確性以及脂聯(lián)素與RA病變程度的關(guān)系,為以后疾病治療提供準(zhǔn)確的方向,現(xiàn)就本院2013年5月～2015年5月的120例患者進(jìn)行調(diào)查分析,具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2013年5月～2015年5月的120例關(guān)節(jié)炎患者,其中臨床確診為膝關(guān)節(jié)RA患者60例(觀察組),普通骨性關(guān)節(jié)炎患者60例(對照組)。觀察組中女32例,男28例,年齡35～63歲,平均年齡(43.5±9.2)歲；對照組中女31例,男29例,年齡39～61歲,平均年齡(42.8±8.6)歲。觀察組患者分為RA 2級9例、RA 3級28例、RA 4級23例。觀察組與對照組患者均只因患相應(yīng)單一疾病而入院,患者所在的家族中遺傳因素對疾病的發(fā)生無明顯影響。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。120例患者均已簽署手術(shù)知情同意書。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)按照西醫(yī)的診斷,參照美國風(fēng)濕病學(xué)會(ARA)1987年修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)［4,5］：在具備下面7項中4項及以上的患者診斷為RA,符合3項的判斷為有可能患有RA。其中第2項和第5項必須得到醫(yī)生的觀察確診。①清晨起床時身體僵硬時間持續(xù)＞1 h(患者病程＞6周)；②有≥3個的關(guān)節(jié)發(fā)生腫大(病程持續(xù)時間≥6周)；③腕關(guān)節(jié)、掌指關(guān)節(jié)以及近指關(guān)節(jié)出現(xiàn)腫大時間＞6周；④對稱性關(guān)節(jié)腫大＞6周；⑤在皮膚下面發(fā)現(xiàn)結(jié)節(jié)樣硬性物,判斷為風(fēng)濕樣結(jié)節(jié)；⑥對手進(jìn)行X光照射時發(fā)現(xiàn)有骨質(zhì)疏松和關(guān)節(jié)間隙狹窄；⑦類風(fēng)濕性因子的滴度＞1∶32(檢測呈陽性)。如未滿足上述7項條件,而符合下面的2項及以上標(biāo)準(zhǔn)的患者可判斷為可疑的RA。①晨僵(時長與頻數(shù)不確定)；②持續(xù)反復(fù)的關(guān)節(jié)壓痛或活動時疼痛≥6周；③現(xiàn)在或過去有關(guān)節(jié)腫大出現(xiàn)過；④發(fā)現(xiàn)皮下硬性結(jié)節(jié)；⑤血沉速度加快或C反應(yīng)蛋白試驗陽性。

1.3 方法 對120例患者進(jìn)行膝關(guān)節(jié)置換取出時,所有軟骨組織均從脛骨平面取出,包括負(fù)重區(qū)域的內(nèi)側(cè)和外側(cè)。所有患者的脂聯(lián)素提取均采取同樣的方法從病變部位的關(guān)節(jié)液中提取,避光減少脂聯(lián)素變質(zhì)。兩組患者均采用iTRAQ對患者的脂聯(lián)素進(jìn)行分析,具體方法如下：在病變關(guān)節(jié)抽取出關(guān)節(jié)液后,放置于離心機(jī)中離心棄掉細(xì)胞殘渣和關(guān)節(jié)液內(nèi)其他的殘余物后,迅速放置于-70℃的冷藏箱中存儲直到需要檢測,保藏時注意密封以及避光,避免離心液變質(zhì)。用酶標(biāo)板操作,做雙孔重復(fù),每孔加入顯色工作液200 μl。具體步驟如下：稀釋標(biāo)準(zhǔn)品,配制0～2000 μg/ml濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。根據(jù)待用離心液數(shù)量,配制適量顯色液,充分混勻。稀釋待測離心液至合適濃度(5～10倍的稀釋度)并加入酶標(biāo)孔中,每孔加入20 μl待檢樣本及200 μl BCA顯色液。37℃溫育30 min,選擇酶標(biāo)儀波長為562 nm,測定各孔的吸光值。以蛋白標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)曲線作為對照,Excel做出擬合曲線,根據(jù)所測樣品的吸光值,即可得到相應(yīng)的待檢樣本的蛋白濃度(C待測液×稀釋倍數(shù)=實際濃度)。

1.4 觀察指標(biāo) iTRAQ技術(shù)得到關(guān)節(jié)液中脂聯(lián)素的濃度,比較各級程度患者關(guān)節(jié)液內(nèi)的脂聯(lián)素濃度差異,觀察膝關(guān)節(jié)RA患者的病情嚴(yán)重程度與脂聯(lián)素濃度的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗 ；應(yīng)用Spearman法對脂聯(lián)素濃度與膝關(guān)節(jié)RA病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性進(jìn)行分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 經(jīng)過iTRAQ技術(shù)發(fā)現(xiàn),2個月后觀察組脂聯(lián)素濃度明顯高于對照組(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組脂聯(lián)素濃度比較(±s,ng/ml)

表1 兩組脂聯(lián)素濃度比較(±s,ng/ml)

注：與對照組比較,aP＜0.05

組別 例數(shù) 關(guān)節(jié)液脂聯(lián)素濃度觀察組 60 4287.36±1578.52a對照組 60 1195.64±355.64t14.800P＜0.05

2.2 經(jīng)過iTRAQ技術(shù)發(fā)現(xiàn),觀察組RA 2級患者的關(guān)節(jié)液脂聯(lián)素濃度為(3604.33±801.45)ng/ml,RA 3級患者的關(guān)節(jié)液脂聯(lián)素濃度為(4752.54±585.48)ng/ml,RA 4級患者的關(guān)節(jié)液脂聯(lián)素濃度為(6343.28±696.68)ng/ml。RA 4級患者的關(guān)節(jié)液脂聯(lián)素水平明顯高于RA 3級和RA 2級患者(P＜0.05),RA 3級患者的脂聯(lián)素水平高于RA 2級患者(P＜0.05)。

2.3 應(yīng)用iTRAQ技術(shù)對脂聯(lián)素濃度與膝關(guān)節(jié)RA病情嚴(yán)重程度的相關(guān)分析時發(fā)現(xiàn),關(guān)節(jié)液脂聯(lián)素水平與RA分級呈正相關(guān)(rs=0.525,P＜0.05)。見表2。

表2 關(guān)節(jié)液脂聯(lián)素水平和病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性

3 討論

有研究者認(rèn)為炎癥因子引發(fā)RA相關(guān)骨質(zhì)改變的機(jī)制可能是通過NF-κB途徑使炎癥細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的炎癥因子以及基質(zhì)降解酶,同時也能使細(xì)胞核因子κB受體活化以及子配體(RANKL)活化,從而引起骨質(zhì)代謝失調(diào),發(fā)生RA［6］。然而,有學(xué)者近期研究認(rèn)為,脂聯(lián)素能下調(diào)軟骨細(xì)胞白細(xì)胞介素-1,誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶-13的表達(dá),上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2的表達(dá),提示脂聯(lián)素作為抗炎介質(zhì),對關(guān)節(jié)軟骨可能有保護(hù)作用［7］。故此,在脂聯(lián)素聯(lián)系患者的病情嚴(yán)重程度上存在著較大的爭論。

為了驗證脂聯(lián)素與RA患者的病情嚴(yán)重程度是否存在關(guān)系,本次試驗選取120例關(guān)節(jié)炎患者。研究發(fā)現(xiàn),RA患者關(guān)節(jié)液中的脂聯(lián)素水平明顯增高,提示在患者體內(nèi)脂聯(lián)素高度表達(dá),說明脂聯(lián)素的水平影響到RA發(fā)病。同時對于分級結(jié)果顯示,RA 2級和RA 3級患者體內(nèi)的脂聯(lián)素水平明顯低于RA 4級患者,RA 2級患者的脂聯(lián)素水平相比于RA 3級患者明顯降低,提示脂聯(lián)素的濃度能反映RA的病情嚴(yán)重程度。

綜上所述,脂聯(lián)素在RA患者中的高度表達(dá)以及與RA患者病情嚴(yán)重程度的密切關(guān)系提示降低脂聯(lián)素水平對于治療RA可能是一個較好的突破口。

［1］王維新.脂聯(lián)素和脂聯(lián)素抗體通過殼聚糖水凝膠對骨關(guān)節(jié)炎的影響研究.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2012.

［2］駱家偉,方斌.透明質(zhì)酸對膝骨關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中脂聯(lián)素和瘦素水平的影響.中華關(guān)節(jié)外科雜志(電子版),2015,9(1):55-59.

［3］趙新秀,寇永鋒.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎證候診斷標(biāo)準(zhǔn)的研究.中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2010(3):500-502.

［4］鄭潔,郭海英,潘思京,等.脂肪細(xì)胞因子與骨關(guān)節(jié)炎研究進(jìn)展.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2014,34(4):562-565.

［5］鄭雙,徐建華,丁長海,等.血清脂聯(lián)素水平與膝骨關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度相關(guān)性研究.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2014,49(12):1792-1795.

［6］李雪,王俊祥.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清同型半胱氨酸和脂聯(lián)素的表達(dá)及其意義.中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志,2012,6(3): 177-180.

［7］左偉,吳志宏,邱貴興.脂聯(lián)素在骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病中作用的研究進(jìn)展.中國骨與關(guān)節(jié)外科,2013,6(1):83-86.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.12.027

2016-04-07］

坪山新區(qū)醫(yī)療衛(wèi)生發(fā)展孵化資助基金項目(項目編號：201504)

518118 深圳市坪山新區(qū)人民醫(yī)院骨科(溫錦益 廖子鴻 戴冠東)； 陽江市人民醫(yī)院外四科(黃健)

戴冠東