丁楓蕓　賈彥博　馬潔清　趙　凱　肖海龍

(1.杭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測院，杭州 310019；2.杭州市食品藥品檢驗研究院，杭州 310022)

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頂空氣相色譜法測定乳鐵蛋白脂質(zhì)體中乙醚和氯仿的殘留量

丁楓蕓1賈彥博2*馬潔清1趙凱1肖海龍2

(1.杭州市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測院，杭州 310019；2.杭州市食品藥品檢驗研究院，杭州 310022)

摘要：采用AgilentHP-5毛細管柱(30 m× 0.32mm，涂膜厚0.25μm )、氫火焰離子化檢測器，采用程序升溫，柱溫起始溫度為50℃，保持2 min，以10℃/min的升溫速率升至100 ℃，保持5min；進樣口與檢測器溫度均為250℃；頂空瓶平衡溫度90℃，平衡時間30min。以二氯甲烷為內(nèi)標物，直接進樣測定乳鐵蛋白脂質(zhì)體中乙醚和三氯甲烷的殘留量。結(jié)果表明各個峰的分離效果良好，乙醚濃度在9.98~149.5μg/mL的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(R2=0.9995)，三氯甲烷濃度在9.92~149.2μg/mL的范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(R2=0.9994)，最低檢測限分別為0.025μg/mL和0.15μg/mL，平均回收率在95.36%~100%之間 ，3批樣品中有機溶劑乙醚和氯仿的殘留量均符合規(guī)定。頂空氣相法操作簡便，準確可靠，可用于乳鐵蛋白脂質(zhì)體中乙醚和氯仿殘留量的測定。

關(guān)鍵詞：氣相色譜法脂質(zhì)體乙醚氯仿

納米脂質(zhì)體是極具開發(fā)潛力的納米載體系統(tǒng)之一，被廣泛應(yīng)用于食品和藥物等領(lǐng)域[1-3]，磷脂本身是細胞膜成分，進入人體內(nèi)不會引起免疫反應(yīng)[4]。制備得到的乳鐵蛋白脂質(zhì)體可以有效的提高其在體內(nèi)的半衰期，提高機體的免疫功能與藥物產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，同時脂0質(zhì)體的膜結(jié)構(gòu)進入體內(nèi)不會引起免疫反應(yīng)[5]。但是，脂質(zhì)體的制備時用到的膜材磷脂和膽固醇是溶于乙醚和氯仿中，而乙醚和氯仿屬于有毒試劑。因此需要確保有機溶劑的殘留量低于國家標準的0.006%[5]，從而保證脂質(zhì)體的安全性。目前，關(guān)于脂質(zhì)體中乙醇和氯仿殘留量的檢測方法已有報道[6-8]，但是關(guān)于乙醚和氯仿的至今未見報道。

1材料與方法

1.1試劑與儀器

乳鐵蛋白脂質(zhì)體(自制)；三氯甲烷(分析純)和乙醚(分析純)購自杭州嘉辰化工有限公司；

Agilent 7890型氣相色譜儀，Agilent G1888頂空進樣系統(tǒng)(美國Agilent 公司)，氫火焰離子化檢測器( FID)； 高純氫氣( 99. 99%)； 高純氮氣( 99. 99%)； 鋼瓶空氣。

1.2溶液的配制

1.2.1內(nèi)標儲備液的配制

精密稱取二氯甲烷50mg置于50mL容量瓶中，加超純水稀釋至刻度。

1.2.2對照品溶液的配制

精密移取乙醚50mg、三氯甲烷50mg，分別置于50mL容量瓶中，加超純水定容至刻度，搖勻，即為對照品儲備液。分別取上述對照品儲備液5mL和內(nèi)標儲備液5mL，置于50mL容量瓶中，加超純水稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。精密量取對照品溶液5mL置于20mL頂空瓶中，密封，搖勻。

1.2.3樣品溶液的制備

量取乳鐵蛋白脂質(zhì)體5mL和5mL內(nèi)標儲備液5mL，置于50mL容量瓶中，加超純水稀釋至刻度，搖勻。精密量取樣品溶液5mL置于20mL頂空瓶中，密封，搖勻。

1.3色譜條件

色 譜 柱 ：Agilent 毛 細 管 柱(30m×0.32mm，涂膜厚0.25μm)；柱流速為1.2mL/min；

載氣：氮氣，分流比：30∶1 ；程序升溫：柱溫起始溫度為50℃，保持2 min，以10℃/min的升溫速率升至100 ℃，保持5min；進樣口溫度250℃； 檢測器溫度250 ℃；頂空瓶平衡溫度90℃ ，平衡時間30min。

1.4線性關(guān)系考察

分別精密量取對照品儲備液0.5mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、7.5mL，置于50mL容量瓶中，每個容量瓶分別加入5mL內(nèi)標儲備液，加超純水稀釋至刻度。分別進樣5mL，記錄色譜圖，以待測物的峰面積與內(nèi)標峰面積的比值對對照品溶液的濃度進行線性回歸。

1.5檢測限與定量限的確定

采用逐步稀釋法，以信噪比S/N=3 計，計算各待測組分(乙醚及三氯甲烷)的檢測限；以信噪比S/N=10計，計算各待測組分的定量限。

1.6方法精密性驗證

取對照品溶液，連續(xù)進樣5次，密封進樣，記錄色譜圖，按內(nèi)標法計算待測組分的平均濃度和RSD值。

1.7回收率實驗

采用加樣回收率測定方法，按高、中、低濃度法分別精密吸取一定量的乙醚和三氯甲烷對照品溶液，加入已知乙醚和三氯甲烷殘留量的乳鐵蛋白脂質(zhì)體液中，密封進樣，記錄色譜圖，按內(nèi)標法計算回收率及RSD值。

1.8樣品的測定

取同個批號的脂質(zhì)體，按照1.2.3的方法制成樣品溶液，密封進樣，記錄色譜圖，同法測定樣品溶液以待測物與內(nèi)標峰面積比計算樣品中有機溶劑的殘留量。

2結(jié)果

2.1保留時間的確定

量取對照品溶液5mL，按色譜條件進樣檢測，色譜圖如1所示。

圖1　乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷的色譜分離圖

由圖1可看出，乙醚、二氯甲烷和三氯甲烷的分離度良好，保留時間分別為2.427min、2.506和2.851min。

2.2方法的線性關(guān)系

對照品色譜峰面積與內(nèi)標峰面積的比值(y)與對照品溶液的濃度(x)呈良好的線性關(guān)系，見表1。

表1　回歸方程和線性范圍(n=7)

2.3方法的檢測限與定量限

通過逐級降低濃度，進樣測定，確定檢測限，性噪比=3，乙醚和三氯甲烷的檢測限分別為0.025μg/mL和0.15μg/mL。定量限以性噪比=10，乙醚和三氯甲烷的定量限為0.08μg/mL和0.5μg/mL。

2.4方法的精密性

對照品連續(xù)進樣5次，進樣量為5mL，測得乙醚與三氯甲烷和二氯甲烷的峰面積比的RSD分別為4.677%、2.257%，所得被測物與內(nèi)標物峰面積之比的相對標準偏差(RSD)小于5%。結(jié)果表明，該方法的精密度良好。

2.5回收率實驗

采用加樣回收率測定方法，按高、中、低濃度分別精密量取一定量的對照品儲備液加入到已知乙醚和三氯甲烷殘留的5mL乳鐵蛋白脂質(zhì)體中，按“樣品溶液的制備”方法處理，分別進樣3次，結(jié)果見表2。

表2　回收率實驗結(jié)果(n=9)

由表2可知，乙醚和三氯甲烷的平均回收率在95.36%~100%之間，RSD值在0.47%~4.69%之間，結(jié)果表明該方法準確可靠。

2.6樣品的測定

精密吸取3個不同批次的乳鐵蛋白脂質(zhì)體樣品，得到3個脂質(zhì)體樣品溶液，每個樣品測3次，進樣量5mL，測定峰面積，根據(jù)回歸方程計算含量，結(jié)果見表3。

表3　樣品含量測定結(jié)果　%

3討論

實驗結(jié)果表明，本方法靈敏度高、色譜分離度好，且重現(xiàn)性、回收率好，操作簡便，可用于乳鐵蛋白脂質(zhì)體口服液中氯仿和乙醚殘留量的測定。待測樣品經(jīng)檢測后氯仿和乙醚的殘留量低于0.006%。線性實驗中，乙醚和氯仿的相關(guān)系數(shù)大于規(guī)定的0.999，從而可看出本實驗的線性關(guān)系良好，同時，在加樣回收率的實驗中，被檢測物質(zhì)的平均回收率在95.36%~100%之間，符合要求。以上結(jié)果表明，乳鐵蛋白脂質(zhì)體中有機溶劑殘留量的分析方法具有可行性，能有效的控制乳鐵蛋白脂質(zhì)體中乙醚和氯仿的殘留限量。

參考文獻

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Residues determination of ether and chloroform in lactoferrin lipid by headspace gas chromatography.DingFengyun1，JiaYanbo2*，MaJieqing1，ZhaoKai1，XiaoHailong2

(1.HangzhouInstituteofCalibrationandTestingforQualityandTechnicalSupervision，Hangzhou，Zhejiang310019,China;2.HangzhouInstituteforFoodandDrugControl，Hangzhou，Zhejiang310022,China)

Abstract:The detector was FID， and CH2Cl2was used as internal standard substance. The column was AgilentHP-5 capillary column(30 m×0.32 mm , 0.25μm). The column temperature was programmed as follows: initial column temperature was 50℃, maintained for 2 min. The temperature was then increased by 10℃/min to 100℃, held for 5min. The injector temperature was 250℃, and the detector temperature was 250℃.The equilibration temperature of headspace vial was 90℃, the equilibrium time was 30min.The results showed that two residual solvents, namely ether and chloroform were completely separated. Ether concentration showed a good linearity in the range of 9.98-149.5μg/mL (R2=0.9995), chloroform concentration showed a good linearity in the range of 9.92-149.2μg/mL (R2=0.9994).The detection limits were 0.025μg/mL and 0.15μg/mL. The average recovery rate was between 95.36% and 100%. The residues of ether and chloroform in three samples were in accordance with the provisions . The method can be used for analysis of ether and chloroform residues in lactoferrin.

Key words:gas chromatography；ether；chloroform；lactoferrin

收稿日期：2015-06-16

DOI:10.3936/j.issn.1001-232x.2016.01.006

作者簡介：丁楓蕓，女，1987出生，助理工程師，主要從事食品安全檢測分析。* 通訊作者：賈彥博，女，1979出生，博士，高級工程師，主要從事食品及農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全等方面的研究工作，E-mail：jiaboshi2002@126.com。

基金項目：浙江省重大科技專項(乳制品中重要風(fēng)險因子檢測及安全評價研究2012C12013-1)