史鴻志，李麗瑋，殷秀榮，董麗霞，李偉偉，劉佳佳，宋琪

(秦皇島市婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)科，秦皇島　066000)

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混合抗球蛋白反應(yīng)試驗(yàn)與宮腔內(nèi)人工授精妊娠率關(guān)系的研究

史鴻志*，李麗瑋，殷秀榮，董麗霞，李偉偉，劉佳佳，宋琪

(秦皇島市婦幼保健院生殖醫(yī)學(xué)科，秦皇島066000)

【摘要】目的探討精子混合抗球蛋白反應(yīng)(MAR)檢測在宮腔內(nèi)人工授精(IUI)治療中的意義。方法在進(jìn)行IUI治療之前常規(guī)進(jìn)行MAR檢測，根據(jù)MAR檢測結(jié)果分為兩組，<10%組和10%～50%組。比較兩組間的精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子數(shù)、精子正常形態(tài)率、臨床妊娠率等方面有無顯著性差異。結(jié)果兩組間精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子數(shù)、精子正常形態(tài)率、臨床妊娠率等比較均無顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論當(dāng)精子MAR檢測結(jié)果<50%時(shí)，患者采用IUI治療是有效的，MAR檢測結(jié)果并不影響IUI治療的有效性。

【關(guān)鍵詞】混合抗球蛋白反應(yīng)試驗(yàn)；抗精子抗體；人工授精

目前，精子膜表面抗體對輔助生殖技術(shù)的影響還存在爭議，本文以宮腔內(nèi)人工授精(IUI)技術(shù)為切入點(diǎn)，分析在進(jìn)行IUI治療中混合抗球蛋白反應(yīng)(MAR)檢測結(jié)果與周期妊娠率的關(guān)系，探討MAR檢測在IUI治療中的預(yù)測價(jià)值。

一、資料與方法

1. 研究對象及分組：選擇2013年3月至2014年12月期間在我院生殖醫(yī)學(xué)科接受IUI治療的不孕癥患者195例，IUI適應(yīng)癥嚴(yán)格遵守輔助生殖技術(shù)規(guī)范的要求，在治療前常規(guī)進(jìn)行MAR檢測，根據(jù)MAR的檢測結(jié)果進(jìn)行分組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審查批準(zhǔn)，所有患者均知情同意。

2. 研究方法：(1)IUI前的準(zhǔn)備：陰道超聲檢查卵泡直徑達(dá)到18～20 mm，或監(jiān)測到尿LH值>45 U/L時(shí)，肌肉注射絨毛膜促性腺激素(HCG，珠海麗珠)5 000～10 000 U。男方禁欲2～7 d，手淫法采集精液至無菌取精杯中，置于熱板上待其液化。精液處理采用密度梯度離心法，具體方法為在15 ml錐形離心管的底部加入1 ml 80%濃度梯度液(Quinn’s，美國)，上層緩緩加入1 ml 40%濃度梯度液，再將液化的精液緩緩加在最上層，以100 r/min離心20 min；棄上層液體，將沉淀物吸入含3 ml精子沖洗培養(yǎng)基(Quinn’s，美國)的離心管中混勻，再次以400 r/min離心5 min；棄上清液，加入新鮮培養(yǎng)液至0.5 ml，將沉淀混勻制成精子懸液，將此混懸液用于人工授精。(2)妊娠診斷：術(shù)后2周查血β-HCG水平，4周后經(jīng)陰道B超檢查顯示宮內(nèi)孕囊者，確定為臨床妊娠。(3)MAR檢測及分組：按照MAR試劑盒(深圳華康)的檢測步驟進(jìn)行，并按照世界衛(wèi)生組織(WHO)男科實(shí)驗(yàn)室手冊(第5版)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。先用微量移液器加5 μl致敏微球于載玻片上，然后加5 μl液化后的精液標(biāo)本，用吸頭充分混勻，再加入5 μl抗體，用吸頭充分混勻，蓋上蓋玻片，3 min后觀察。當(dāng)精液中無抗精子抗體存在時(shí)，精子可自由游動(dòng)，而致敏微球凝聚成團(tuán)，說明試劑本身是可靠的；當(dāng)精液中存在抗精子抗體時(shí)，致敏微球會成團(tuán)附著在精子表面，計(jì)數(shù)200條以上活動(dòng)精子，記錄附著致敏微球的活動(dòng)精子百分率，尾尖結(jié)合的不記錄。

根據(jù)MAR檢測結(jié)果將IUI周期分成2個(gè)組：<10%組和10%～50%組。分別比較兩組間男方精子濃度、活力、形態(tài)，以及周期妊娠率的差異。由于MAR>50%的患者較少，而且MAR>50%的患者都經(jīng)過了臨床治療，故沒有直接進(jìn)入周期，所以暫時(shí)缺少這方面的數(shù)據(jù)。

3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對資料進(jìn)行分析，計(jì)量資料組間比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1. 兩組患者一般情況比較：本研究中，MAR<10%組女方平均年齡(29.5±3.5)歲，不育年限(3.9±2.7)年；MAR 10%～50%組女方平均年齡(30.3±3.2)歲，不育年限(4.1±2.8)年，組間比較無顯著性差異(P>0.05)。

2. 兩組男性精液參數(shù)比較：MAR<10%和10%～50%兩組男方的精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子率、正常形態(tài)百分率比較，無顯著性差異(P>0.05)(表1)。

表1　兩組間男方精液參數(shù)的比較 (x-±s)

3. 兩組患者周期妊娠率的比較：共317個(gè)周期，獲得妊娠45個(gè)周期，周期妊娠率14.2%。MAR<10%組266個(gè)周期，妊娠38個(gè)周期，周期妊娠率14.3%；MAR 10%～50%組51個(gè)周期，妊娠7個(gè)周期，周期妊娠率13.7%，組間妊娠率比較無顯著性差異(P>0.05)(表2)。

表2　兩組間周期妊娠率的比較 (n，%)

三、討論

抗精子抗體(AsAb)是免疫性不育的重要病因之一，其可存在于人類血液及生殖系統(tǒng)中，通常是由于各種機(jī)制導(dǎo)致血-睪屏障破壞，使得精子免疫性抗原暴露于免疫系統(tǒng)中，最終誘發(fā)免疫反應(yīng)而產(chǎn)生[1]。AsAb可能通過直接阻礙精子運(yùn)動(dòng)和精-卵結(jié)合，甚至可能干擾胚胎著床過程，最終對生育造成不良影響[2]。WHO人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(第5版)推薦了兩種檢測精子包被抗體的方法，分別為混合抗球蛋白反應(yīng)(MAR)試驗(yàn)和直接免疫珠(IB)試驗(yàn)，其中IB法采用洗滌過的精子進(jìn)行試驗(yàn)，需要耗費(fèi)更多的時(shí)間，而MAR試驗(yàn)則采用新鮮精液標(biāo)本，是一項(xiàng)廉價(jià)、快速且敏感的篩查試驗(yàn)[3]，因此被廣泛開展。

目前，關(guān)于精子膜表面抗體對輔助生殖技術(shù)影響的研究較少，并且結(jié)論也并不一致，如van Weert等[4]研究表明，精液AsAb陽性(臨界值20%)對體外受精受精率及妊娠情況均產(chǎn)生負(fù)面影響。而Vujisic等[5]的研究顯示精子膜表面抗體凝集>20%和<20%的分組比較，受精率分別為73.2% vs. 71.5%，妊娠率為28.9% vs. 28.57%，組間比較無顯著性差異，提示膜表面抗體可能并不影響精卵的結(jié)合。Zini等[6]也報(bào)道，精液AsAb陽性組(MAR>50%)與陰性組間的IVF受精率、臨床妊娠率比較均無顯著性差異。

本研究結(jié)果顯示雖然MAR檢測結(jié)果不同，但兩組間的精子濃度、前向運(yùn)動(dòng)精子百分率、精子正常形態(tài)率、臨床妊娠率等比較均無顯著性差異，與孫源等[7]的研究結(jié)果相似。雖然有學(xué)者發(fā)現(xiàn)隨著MAR檢測結(jié)果的升高，精子的活動(dòng)率、前向運(yùn)動(dòng)和精子正常形態(tài)率都會隨之下降[8]，但本研究發(fā)現(xiàn)兩組間精子參數(shù)比較沒有顯著性差異，這可能是由于行IUI治療的男性群體多為輕、中度少和(或)弱精子癥患者，與普通人群的分布不同所致。精子經(jīng)過優(yōu)選處理后[9-10]，精子參數(shù)之間的差異可能被進(jìn)一步縮小；此外，梯度離心的過程中去除了大部分粘著精子頭部的抗體復(fù)合物[11]，可能都是兩組間妊娠率沒有顯著性差異的主要原因。

綜上所述，本研究表明，MAR<10%和10%～50%兩組行IUI治療時(shí)周期妊娠率比較沒有顯著性差異，提示當(dāng)MAR<50%時(shí)，患者采用IUI治療是有效的，但是，由于缺乏MAR>50%的數(shù)據(jù)資料，MAR>50%對周期妊娠率是否存在影響還不好做出判斷。

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[編輯：侯麗]

·臨床實(shí)踐·

【作者簡介】史鴻志，男，河北秦皇島人，碩士，主管檢驗(yàn)師，主要從事輔助生殖實(shí)驗(yàn)室技術(shù).(*通訊作者)

【收稿日期】2015-07-20；【修回日期】2015-09-24

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.2.013