禚金花，劉振軍，吳　冰，劉秀榮

(山東省交通醫(yī)院檢驗科，山東濟南 250031)

?

·臨床研究·

MEK-8222k血細胞分析儀性能驗證及評價

禚金花，劉振軍，吳冰，劉秀榮

(山東省交通醫(yī)院檢驗科，山東濟南 250031)

摘要:目的評價MEK-8222k血細胞分析儀的主要性能。方法通過本底檢測、準確度、精密度、攜帶污染率、線性范圍及WBC分類的重復性、正確度、異常標本的報警等試驗對MEK-8222k血細胞分析儀性能進行驗證。結(jié)果MEK-8222k血細胞分析儀的本底值低，WBC、RBC、Hb、HCT、PLT的批內(nèi)、批間精密度均在允許范圍以內(nèi)，攜帶污染率低，準確度高，線性范圍良好，WBC分類與顯微鏡分類的相關(guān)性隨細胞種類有差異。結(jié)論MEK-8222k全自動血細胞分析儀各方面性能良好，符合實驗室血細胞分析儀的性能要求，適用于臨床血細胞分析的檢驗。

關(guān)鍵詞:血細胞分析儀；精密度；準確度；攜帶污染率；線性范圍

MEK-8222k全自動血細胞分析儀是由日本光電公司生產(chǎn)的多功能、多參數(shù)、全自動血細胞分析儀器，該儀器應(yīng)用流式細胞技術(shù)和電阻抗技術(shù)的雙重原理進行血細胞計數(shù)，并可對幼稚細胞、異形淋巴、有核紅細胞及血小板聚集等多種異常情況進行報警和提示，具有檢測速度快、標本需要量少、檢測項目全、自動化程度高、操作維護簡便等特點。按照新版CNAS-CL43 2012《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》[1]，參考有關(guān)資料[2-6]，結(jié)合實際工作，筆者對本院的MEK-8222k全自動血細胞分析儀檢測白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白(Hb)、血小板(PLT)、紅細胞壓積(HCT)等主要項目進行性能評價，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源收集本院門診和住院患者不同濃度范圍內(nèi)標本進行檢測。

1.2儀器與試劑日本光電公司生產(chǎn)MEK 8222k全自動血細胞分析儀，以及配套試劑和配套質(zhì)控品。

1.3本底計數(shù)

1.3.1本底計數(shù)檢測要求血細胞分析儀本底計數(shù)各參數(shù)的結(jié)果應(yīng)符合以下要求：WBC≤0.5×109/L，RBC≤0.05×1012/L，Hb≤2.0 g/L，PLT≤10×109/L。

1.3.2驗證方法用稀釋液作為標本在分析儀上連續(xù)檢測3次，3次檢測結(jié)果的最大值應(yīng)在允許范圍內(nèi)。

1.4精密度評價

1.4.1批內(nèi)精密度取濃度分別處于正常和病理水平的新鮮臨床標本，按照相同的檢測方法，同批次內(nèi)檢測相同的21份混合新鮮臨床標本。剔除第一個數(shù)據(jù)，記錄后20次結(jié)果并計算均值、標準差和批內(nèi)變異系數(shù)(CV)。

1.4.2批間精密度取濃度分別處于正常和病理水平的室內(nèi)質(zhì)控品，連續(xù)檢測20 d。記錄結(jié)果，計算均值、標準差和批間精密度CV。

1.4.3結(jié)果判斷批內(nèi)、批間精密度要求相應(yīng)范圍內(nèi)，見表1。批內(nèi)精密度CV≤1/4室間質(zhì)量評價標準(EQA)，批間精密度CV≤1/3EQA，各檢測項目批內(nèi)及批間精密度若符合以上標準，代表驗證通過，可以進行該項目常規(guī)檢測。若不符合，需進一步分析儀器的批內(nèi)和批間精密度與廠家給出的相關(guān)精密比較差異有無統(tǒng)計學意義，并聯(lián)系生產(chǎn)廠家查找可能的原因。

表1　　精密度判定標準(%)

1.5準確度根據(jù)原衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評結(jié)果對血細胞分析項目進行準確度評估，成績100分的在80%以上者即為驗證通過。

1.6攜帶污染率

1.6.1試驗方案取高濃度血液標本，混合均勻后連續(xù)檢測3次，檢測值分別為H1、H2、H3；再取低濃度血液標本，連續(xù)檢測3次，檢測值分別為L1、L2、L3。按下列公式計算攜帶污染率：攜帶污染率(%)=[(L1-L3)/(H3-L3)]×100%。

1.6.2要求各參數(shù)攜帶污染率結(jié)果必須符合相關(guān)要求[2]：WBC≤3.0%，RBC≤2.0%，Hb≤2.0%，PLT≤4.0%。

1.6.3臨床標本的要求不同檢測項目所選高、低濃度標本的濃度水平應(yīng)符合相關(guān)要求，見表2。

表2　　攜帶污染率驗證標本的濃度要求

1.7線性范圍

1.7.1試驗方案收集臨床上各參數(shù)的高值標本(也可以用商業(yè)線性品替代)，要求高值越接近儀器線性高限越好，使用配套稀釋液分別按照100%、80%、60%、40%、20%的濃度進行稀釋，每個濃度測試3次，取測試均值，將測試均值與理論值進行比較，計算r2和回歸方程式。

1.7.2判定標準r2≥0.95，斜率在1.00±0.05范圍內(nèi)，則判斷為線性范圍驗證通過。

1.8WBC分類的鑒定

1.8.1重復性取1份抗凝血在MEK 8222k重復檢測10次，計算CV值。

1.8.2正確度取20份住院患者的抗凝血分別在MEK 8222k儀器上檢測，每份標本重復檢測2次取均值。同時每份血液標本推2張符合質(zhì)控要求的血片，染色后由2位有經(jīng)驗的技師在體尾交界處進行WBC分類，分為中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞，每張血片油鏡分類計數(shù)200個WBC，共計400個WBC取均值，再與MEK 8222k儀器的WBC分類值進行比較。以MEK 8222k儀器WBC分類值為X軸、顯微鏡WBC分類值為Y軸，進行線性回歸，計算20份非白血病標本2種方法的MEK 8222k結(jié)果。

1.8.3異常細胞的檢測取40份顯微鏡下WBC分類異常血液標本，將這些標本在MEK 8222k儀器上檢測，檢測是否有相應(yīng)報警信息。

2結(jié)果

2.1本底值用稀釋液作為標本在分析儀上連續(xù)檢測3次，3次檢測結(jié)果的最大值分別為WBC:0×109/L，RBC：0×1012/L，Hb：0 g/L，PLT：1×109/L，結(jié)果均在允許范圍內(nèi)。

2.2精密度批內(nèi)精密度CV≤1/4EQA，批間精密度CV≤1/3EQA，各檢測項目批內(nèi)及批間精密度均符合標準，精密度試驗驗證通過。見表3(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

2.3準確度準確度驗證結(jié)果均在室間質(zhì)評允許范圍內(nèi)，PT得分均為100%，見表4(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網(wǎng)站主頁“論文附件”)。

2.4攜帶污染率MEK 8222k攜帶污染率檢測結(jié)果見表5。

表5　　MEK 8222k攜帶污染率檢測結(jié)果

2.5線性范圍各參數(shù)的線性范圍見表6。WBC:y=0.986 8x+3.273 6;RBC:y=0.998 3x+0.123 2;Hb:y=0.979 5x+2.291 1;HCT:y=0.999 5x+1.083 9;PLT:y=0.975 1x+15.053。

表6　　MEK-8222K線性范圍

2.6WBC分類的鑒定

2.6.1重復性1份抗凝血重復檢測10次，中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞重復檢測的CV分別為1.93%、1.51%、6.47%、8.91%和19.98%。

2.6.2正確度以MEK 8222k儀器WBC分類值為X軸、顯微鏡WBC分類值為Y軸，進行線性回歸，中性粒細胞：y=0.985 6x+9.131 9，r=0.988 7；淋巴細胞：y=1.034x-4.541 2，r=0.975 8；嗜酸性粒細胞：y=0.939 9x-0.100 4，r=0.831 9；單核細胞：y=0.843 3x+1.662 3，r=0.878 7；嗜堿性粒細胞：y=0.898 7x+0.062，r=0.431 9。

2.6.3異常細胞的檢測40份顯微鏡下WBC分類異常血標本中，異型淋巴細胞比例增高(7%～25%)6份、嚴重感染和腫瘤放化療中出現(xiàn)核左移(晚幼粒細胞1%～7%)14份、白血病初診20份。這些標本在MEK 8222k儀器上檢測，異型淋巴細胞比例升高，嚴重感染和腫瘤放化療中出現(xiàn)核左移的標本既有WBC散點圖異常，又有報警提示；有幼稚細胞的白血病標本均有1個或/和多個報警提示及異常散點圖顯示。

3討論

選擇性能良好的檢測系統(tǒng)是保證患者檢測結(jié)果可靠性的前提[7]。根據(jù)美國臨床實驗室改進法案修正案(CLIA′88)規(guī)定，參加認可的實驗室，在開展某一檢測項目前，需提供并保留相關(guān)的方法學驗證實驗數(shù)據(jù)[8]。本實驗室參考相關(guān)資料，對MEK-8222k全自動血細胞分析儀主要性能進行驗證。

通過本次試驗表明，MEK-8222k全自動血細胞分析儀本底計數(shù)均在允許范圍內(nèi)。高、中、低濃度的標本批內(nèi)精密度均小于1/4EQA，批間精密度均小于1/3EQA，說明儀器的重復性良好，這是進行其他方法學驗證的前提。本試驗采用室間質(zhì)評的數(shù)據(jù)作為評價檢測結(jié)果準確性的標準，各檢測項目結(jié)果均在室間質(zhì)評的允許范圍內(nèi)，說明該儀器測得結(jié)果準確可靠。攜帶污染率是反映高值標本對低值標本檢測結(jié)果影響程度的指標，本次試驗各檢測項目的攜帶污染率均在規(guī)定的允許范圍內(nèi)。WBC、RBC、Hb、HCT、PLT線性良好，各檢測參數(shù)在各稀釋度時的實測值與理論值之間密切相關(guān)(r>0.95)。對WBC分類進行驗證的結(jié)果表明，中性粒細胞、淋巴細胞檢測的重復性好，單核細胞、嗜酸性粒細胞重復性較好，而嗜堿性粒細胞重復差，可能與其在血中數(shù)量太少，計數(shù)誤差大有關(guān)。顯微鏡WBC分類與儀器WBC分類對比，中性粒細胞、淋巴細胞相關(guān)性較好(r>0.97),單核細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿粒細胞r小，可能與單核細胞在血涂片中分布不均勻，嗜酸性粒細胞、嗜堿粒細胞數(shù)量少有關(guān)。儀器異常細胞報警功能真陽性率高，可結(jié)合復檢規(guī)則做好鏡檢復查工作，基本不影響臨床醫(yī)生對結(jié)果的判斷。

日本光電MEK-8222k全自動血細胞分析儀采用電阻抗法進行細胞計數(shù)，使用流式細胞技術(shù)進行WBC分類。儀器使用簡單直觀的觸摸屏操作，自帶質(zhì)控程序，試劑用量少，成本低。經(jīng)過驗證表明該儀器空白值低、準確度高、精密度好、攜帶污染率低、線性好，WBC分類的重復性及正確度較好，報警信息真陽性率高。

綜上所述，MEK-8222k全自動血細胞分析儀性能良好，可對批量標本快速準確處理，能較好地滿足實驗室需求。

參考文獻

[1]中國合格評定國家認可委員會.ISO15189 2012醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則[S].北京：中國合格評定國家認可委員會,2012.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部.WS/T 406-2012 臨床血液學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求[S].北京：中華人民共和國衛(wèi)生部，2012.

[3]National Committee for Clinical Laboratory Standards.EP15-A User demonstration of performance for precision and accuracy[S].Wayne,PA,USA:NCCLS,2001:1-15.

[4]National Committee for Clinical Laboratory Standards.EP6-A Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:a statistical approach[S].Wayne,PA,USA:NCCLS,2003:1-47.

[5]National Committee for Clinical Laboratory Standards.EP10-A2 Preliminary evaluation of quantitative clinical laboratory methods,approved guideline[S].2nd ed.Wayne,PA,USA:NCCLS,2002:1-47.

[6]張莉,吳炯.醫(yī)學檢驗檢測系統(tǒng)應(yīng)用前的性能評價[J].檢驗醫(yī)學,2006,21(6):560-563.

[7]楊有業(yè)，張秀明.臨床檢驗方法學評價[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2008.

[8]Department of Health and Human Services，Centers for Medicare & Medicaid Services．Medicare,medicaid and CLIA programs;regulations implementing the clinical laboratory improvement amendments of 1988 (CLIA)--HCFA.Final rule with comment period[J]．Federal Register,1992,57(40):105-107.

(收稿日期：2015-11-20)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.03.049

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)03-0397-03