宋智琴， 楊平飛， 羅 鳴， 吳明開

(貴州省現(xiàn)代中藥材研究所，貴州 貴陽 550006)

不同添加物對(duì)白及組培壯苗培養(yǎng)的影響

宋智琴， 楊平飛， 羅 鳴， 吳明開*

(貴州省現(xiàn)代中藥材研究所，貴州 貴陽 550006)

為篩選適宜白及組培壯苗的培養(yǎng)基添加物，以無菌播種取得的白及組培苗進(jìn)行轉(zhuǎn)接培養(yǎng)成組培壯苗，采用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，在壯苗培養(yǎng)基中分別添加香蕉泥、馬鈴薯泥、胡蘿卜泥、番茄泥等不同添加物，分析其對(duì)白及組培壯苗生長(zhǎng)的影響，篩選出較為適宜添加物后，再進(jìn)行添加物適宜濃度篩選試驗(yàn)。結(jié)果表明：不同添加物對(duì)白及組培苗生長(zhǎng)均有一定影響，以香蕉泥對(duì)白及組培苗的生長(zhǎng)影響最顯著，該條件下白及平均球莖1.9 mm、株高3 cm、4個(gè)須根、干鮮重比86.75%、葉綠素含量1.219 mg/g香蕉泥，濃度為30 g/L和60 g/L時(shí)組培苗生長(zhǎng)快速，苗整齊且粗壯，葉色嫩綠。結(jié)論：白及組培壯苗適宜培養(yǎng)條件為MS+1.0 mg/L NAA+30 g/L白砂糖+7.0 g/L瓊脂+30 g/L香蕉。

白及； 組織培養(yǎng)； 添加物

白及(Bletillastriata)為蘭科植物白及屬多年生珍稀瀕危草本植物，其干燥塊莖入藥，是《中國(guó)藥典》收載的中藥材品種，性微寒，味苦、甘、澀，歸肺、胃、肝經(jīng)具有收斂止血，消腫生肌的功效。主治咳血吐血，外傷出血，瘡瘍腫毒，皮膚皸裂，肺結(jié)核咳血、潰瘍病出血等[1-2]。白及被用于工業(yè)上的糊料，漿絲綢、漿紗或作涂料等原料，在化妝品、牙膏等輕工業(yè)上使用也非常廣泛，隨著白及的作用日漸被開發(fā)，市場(chǎng)上對(duì)白及的需求量也越來越大。目前，市場(chǎng)主要依賴的野生資源被采挖殆盡，種子在自然條件下萌發(fā)率極低，無性繁殖極其緩慢，人工栽培規(guī)模小，市場(chǎng)供需矛盾突出，亟需進(jìn)行規(guī)?；?guī)范化人工種植，首先解決的瓶頸問題就是要大規(guī)模生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)種苗[2-4]。近年來，已開展利用白及蒴果包含上萬粒種子進(jìn)行無菌萌發(fā)組培快繁技術(shù)研究，培育大量白及組培苗，主要涉及不同成熟度的白及種子無菌萌發(fā)、原球莖的發(fā)育、無菌苗生長(zhǎng)激素的篩選等[4-7]。為進(jìn)一步優(yōu)化白及組培育苗條件，筆者篩選白及組培苗不同階段適宜添加物及幼苗生長(zhǎng)特性，以期為白及種苗生產(chǎn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)材料為貴州省現(xiàn)代中藥材研究所資源圃白及蒴果，剖開取出種子后經(jīng)無菌播種萌發(fā)的組培苗。其原植物經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院何順志教授鑒定為蘭科白及屬植物白及(Bletillastriata)。

1.2 無菌材料的獲取

先洗凈白及蒴果，在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行如下操作：用75%酒精浸泡2～3 min，接著用無菌水沖洗5次，吹干。將消毒好的蒴果從中間剖開，將種子均勻地撒在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)發(fā)芽，用已長(zhǎng)至平均株高0.8 cm、球莖1.0 mm的苗作為無菌材料進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

1.3 最適添加物的篩選

1.3.1 處理方法 采用單因素試驗(yàn)，取上述發(fā)芽的種苗作為材料，在基本培養(yǎng)基中添加不同的有機(jī)添加物香蕉泥(處理B)、馬鈴薯泥(處理C)、番茄泥(處理D)、胡蘿卜泥(處理E)，濃度分別為30 g/L，以不加任何添加物為對(duì)照(處理A)。培養(yǎng)室條件：溫度(26±1)℃，光照12 h/d，光照強(qiáng)度1 500 lx。培養(yǎng)60 d后對(duì)球莖、株高、須根數(shù)、干鮮重比和葉綠素的含量進(jìn)行測(cè)定。每處理10瓶。

1.3.2 最適添加物濃度的篩選 取發(fā)芽的種子苗作為材料，選取獲得的較適添加物，以MS+白砂糖30 g/L+NAA 0.5 mg/L為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度(30 g/L,60 g/L,90 g/L,120 g/L,150 g/L)的最適添加物，共5個(gè)處理，每處理10瓶。培養(yǎng)室條件：溫度(26±1)℃，光照12 h/d，光照強(qiáng)度1 500 lx。培養(yǎng)60 d后進(jìn)行觀察并記錄試驗(yàn)結(jié)果，篩選出最適的添加物濃度。

1.4 測(cè)定方法

葉綠素含量測(cè)定采用丙酮研磨提取，利用紫外分光光度儀測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

用Spss統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，用LDS法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 白及組培壯苗培養(yǎng)添加物的篩選

從表1可以看出，4種不同添加物對(duì)白及組培壯苗球莖、株高、須根數(shù)、干鮮重比、葉綠素含量都有影響，其中處理B的球莖達(dá)1.966 mm，株高為3.18 cm，須根為4.4根，干鮮重比達(dá)86.75%，葉綠素含量為1.219 mg/g，其組培壯苗生長(zhǎng)優(yōu)于處理C、處理D和處理E以及對(duì)照(處理A)。表明，添加香蕉泥對(duì)白及組培壯苗的生長(zhǎng)具有較好的促進(jìn)作用。

表1 不同添加物的白及組培壯苗生長(zhǎng)性狀

注：表中同列小寫字母表示差異達(dá)5%顯著水平(P<0.05)。

Note: Different lowercase letters in the same column indicate significance of difference atP<0.05 level.

表2 不同香蕉泥濃度的白及組培壯苗生長(zhǎng)情況

2.2 最適添加物濃度的篩選

由表2可知，不同濃度香蕉泥對(duì)白及生長(zhǎng)的影響比較明顯，粗壯程度并沒有完全隨著濃度的升高而增加。當(dāng)香蕉泥濃度達(dá)150 g/L時(shí)，苗的生長(zhǎng)開始不正常，部分出現(xiàn)莖葉變黃。添加30 g/L白砂糖和60 g/L香蕉泥時(shí)并沒有表現(xiàn)出明顯差異，但從經(jīng)濟(jì)、節(jié)約方面考慮，添加30 g/L香蕉泥較為合適，因此可以確定白及的生長(zhǎng)最適香蕉泥濃度為30 g/L。

3 結(jié)論與討論

植物組織培養(yǎng)中常用的天然有機(jī)添加物有椰乳、香蕉汁、馬鈴薯汁等，都是復(fù)雜的營(yíng)養(yǎng)混合物，其主要的作用可能是為植物生長(zhǎng)提供一些生理活性物質(zhì)，補(bǔ)充一些未知的微量成分。由于添加天然有機(jī)物的培養(yǎng)基容易配制，且成本低廉，對(duì)植物組培苗的生長(zhǎng)卻有明顯促進(jìn)作用，植物在其中生長(zhǎng)良好，所以適于在生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用[8]。有機(jī)添加物由于含有許多復(fù)雜、有效的成分而廣泛應(yīng)用于蘭科植物的離體培養(yǎng)[9]。研究結(jié)果表明，不同有機(jī)添加物對(duì)白及組培苗生長(zhǎng)的影響存在一定差異，香蕉泥對(duì)白及球莖的生長(zhǎng)具有顯著促進(jìn)作用，香蕉泥和馬鈴薯泥對(duì)白及的株高具有顯著促進(jìn)作用，各處理對(duì)白及須根數(shù)的增長(zhǎng)沒有明顯作用，對(duì)干鮮重比也沒有明顯促進(jìn)作用，香蕉泥對(duì)白及葉綠素的積累有顯著促進(jìn)作用，而番茄汁對(duì)葉綠素的積累沒有作用，這與肉眼觀察添加番茄汁培養(yǎng)的白及苗呈黃綠色相符。初步確定了香蕉泥較適合白及組培苗的生長(zhǎng)。綜合考察各項(xiàng)指標(biāo)表明，白及組培苗的培養(yǎng)基中添加香蕉能顯著促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育，起到壯苗增大球莖的作用，其中又以添加30 g/L香蕉泥較為合適。白及組培壯苗適宜培養(yǎng)條件為MS+0.5 mg/L NAA+30 g/L白砂糖瓊脂+30 g/L香蕉。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出社，2010.

[2] 吳明開，劉作易.貴州珍稀藥材白及[M].貴陽：貴州科技出版社，2013.

[3] 李 嶸，王拮之.白及的研究概述及其資源利用對(duì)策[J].中草藥，2006，37(11)：1751-1755.

[4] 張永為，蔣福升，王 寅，等.白及產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及可持續(xù)發(fā)展的探討[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2012，30(10)：2264-2266.

[5] 李雨晴，楊嘉偉，王康才，等.白芨種子無菌萌發(fā)特性[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43(4)：253-255.

[6] 張 燕，黎 斌，李思鋒.不同培養(yǎng)基上白芨的種子萌發(fā)與幼苗形態(tài)發(fā)生[J].西北植物學(xué)報(bào)，2009，29(8)：1584-1589.

[7] 葉 靜，鄭曉君，管常東，等.白芨的無菌萌發(fā)與組織培養(yǎng)[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，32(S1)：422-425.

[8] 趙海紅，貝麗霞，陳祥梅.不同附加物對(duì)馬鈴薯脫毒試管苗快繁的影響[J].黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，19(2)：17-20.

[9] 張 超，張茜茜，樓楠男，等.有機(jī)添加物對(duì)大花蕙蘭原球莖及幼苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(19)：8866-8868，8903.

(責(zé)任編輯： 孫小嵐)

Effect of Different Additives on Sound Plantlets ofBletillastriata

SONG Zhiqin, YANG Pingfei, LUO Ming, WU Mingkai*

(GuizhouInstituteofModernChineseMedicalMaterials,Guiyang,Guizhou550006,China)

The sterileB.striataplantlets were cultured on media plus different additives of mashed banana, mashed potato, mashed carrot and mashed tomato with different concentration to study the effect of different additives on sound plantlets and to screen suitable medium additives for culturing soundB.striataplantlets. Results: Four tested additives all have a certain effect on growth ofB.striataplantlets and the mashed banana has the most significant effect on growth ofB.striataplantlets among four tested additives. The average bulb diameter, height, fibrous root number, dry weight-fresh weight ratio and chlorophyll content ofB.striataplantlets cultured on the medium plus mashed banana are 1.9 mm, 3 cm, four, 86.75% and 1,219 mg/g respectively.B.striataplantlets cultured on the medium plus mashed banana with 30 g/L and 60 g/L concentration grow rapidly, unanimously and healthily.In conclusion, the optimum medium to culture soundB.striataplantlets is MS+1.0 mg/L NAA + 30 g/L white sugar+7.0 g/L agar + 30 g/L mashed banana.

Bletillastriata; tissue culture; additive

2015-08-28； 2016-02-28修回

2015年中醫(yī)藥行業(yè)專項(xiàng)中藥類項(xiàng)目“白及品種選育與高產(chǎn)栽培技術(shù)熟化提升及應(yīng)用示范”(201507002-1-11),“貴州珍稀藥材石斛、白及品種選育及其產(chǎn)業(yè)化”[黔農(nóng)科院自主創(chuàng)新科研專項(xiàng)字(2014)017]；施秉中藥材產(chǎn)業(yè)科技合作專項(xiàng)“白及組培球莖馴化及種苗大田高產(chǎn)栽培技術(shù)研究與示范”[施中藥科合專項(xiàng)(2014)]； 貴州省農(nóng)業(yè)委員會(huì)項(xiàng)目“貴州省中藥材現(xiàn)代產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)”(GZCYTX2014-0202)

宋智琴(1982-)，女，助理研究員，從事中藥材資源、品質(zhì)研究。E-mail：815638495@qq.com

*通訊作者：吳明開(1969-),男，研究員，從事中藥材資源、育種與栽培工作。E-mail：bywmk1999@163.com

1001-3601(2016)03-0132-0138-03

S682.31； Q813.1

A