吳　飛

(蘭陵縣中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東臨沂 277700)

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·論著·

兩種方法驗(yàn)證乙型肝炎病毒標(biāo)志物室間質(zhì)量控制結(jié)果分析

吳飛

(蘭陵縣中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東臨沂 277700)

摘要:目的對比酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和膠體金免疫層析法(GIGA)檢測乙肝五項(xiàng)指標(biāo)的結(jié)果差異，驗(yàn)證HBV標(biāo)志物室間質(zhì)量控制的方法選擇。方法使用ELISA檢測試劑和GIGA試條對420份標(biāo)本檢測乙肝五項(xiàng)指標(biāo)，并對兩種方法檢測均陽性的標(biāo)本做1∶256倍稀釋后檢測相關(guān)抗原抗體，對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果兩種方法結(jié)果除乙肝表面抗原結(jié)果無顯著差異外，其他指標(biāo)均有顯著差異，稀釋后結(jié)果差異更加明顯。結(jié)論GIGA法檢測乙肝五項(xiàng)指標(biāo)較ELISA法靈敏度低，有一定的漏檢率，不適用于室間質(zhì)量控制檢測，應(yīng)用ELISA法加以確證。

關(guān)鍵詞:酶聯(lián)免疫吸附法；膠體金免疫層析法；乙肝五項(xiàng)；質(zhì)量控制

乙型肝炎病毒(HBV)是嚴(yán)重危害人類健康的常見傳染病之一，我國又是乙型肝炎(以下簡稱“乙肝”)乙肝大國，官方報(bào)導(dǎo)感染率約10%，全國將近1億人感染乙肝病毒[1]。乙肝五項(xiàng)指標(biāo)的檢查是現(xiàn)在普遍應(yīng)用的確診和療效觀察指標(biāo)，也是室間質(zhì)量控制的基本檢測項(xiàng)目。目前，用于乙肝五項(xiàng)檢測的方法主要有凝集試驗(yàn)、放射免疫測定(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫層析測定以及化學(xué)發(fā)光免疫測定(TR-FLA)等，其中又以膠體金免疫層析法(GIGA)和ELISA應(yīng)用最為廣泛[2]，特別是一些基礎(chǔ)條件較差的實(shí)驗(yàn)室，這兩種方法的應(yīng)用較有普遍性。在檢測靈敏度和特異度方面，ELISA 已被臨床所公認(rèn)是較可靠且可以信賴的方法[3]，而GIGA法因具有操作簡便、結(jié)果快速、特異度較高、試劑保存方便有效期長和不需特殊儀器等優(yōu)點(diǎn)，被臨床檢驗(yàn)科室廣泛應(yīng)用[4]。本院在乙肝五項(xiàng)檢測中，曾長時間應(yīng)用GIGA法，但是在參加室間質(zhì)量控制后，成績一直不理想，經(jīng)常會質(zhì)控不達(dá)標(biāo)。后應(yīng)用ELISA法參加室間質(zhì)控活動，獲得了滿意的效果，由此可以看出GIGA法在檢測乙肝五項(xiàng)的過程中存在一定的偏差，GIGA法不能單獨(dú)應(yīng)用于HBV標(biāo)志物的室間質(zhì)量控制[5]。本研究用ELISA法和GIGA法聯(lián)合檢測乙肝五項(xiàng)，以驗(yàn)證GIGA法檢測乙肝五項(xiàng)的可靠性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源血清標(biāo)本420份，來自本院2014年門診及住院患者，部分為乙肝患者及乙肝病毒攜帶者，部分為常規(guī)體檢者，均檢測了乙肝五項(xiàng)指標(biāo)。其中男286例，占68.1%，女134例，占31.9%，年齡8～52歲。

1.2儀器與試劑膠體金測試卡采用廈門英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)，ELISA試劑采用北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，兩種試劑均在有效期內(nèi)，且包裝完好。儀器采用上海科華ST-360酶標(biāo)儀。

1.3方法兩種方法均嚴(yán)格按照試劑使用說明書操作，420份血清標(biāo)本兩種方法平行測定，考慮到室間質(zhì)控品制備時會有不同程度稀釋，特將兩種方法檢測都為陽性的標(biāo)本用無菌生理鹽水做了稀釋，早期1∶10和1∶20倍稀釋后，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，為減少工作量增加同時增加操作的可比性，后統(tǒng)一做1∶256倍比稀釋，再次用兩種方法檢測，分別統(tǒng)計(jì)比較分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

兩種方法檢測不稀釋血清420份，檢測結(jié)果見表1。GIGA法檢測乙肝五項(xiàng)陽性率均小于ELISA法，與ELISA陽性符合率分別為：HBsAg 98.1%、HbsAb 85.7%、HbeAg 86.4%、HbeAb 92.1%和HbcAb 87.1%，除HBsAg陽性率差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P>0.05)，其他各項(xiàng)指標(biāo)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

對上述兩種方法檢測均為陽性的標(biāo)本做1∶256倍比稀釋，檢測結(jié)果見表2。

表1　　兩種方法檢測結(jié)果比較(原倍血清)

表2　　兩種方法檢測結(jié)果比較(1∶256稀釋)

由表2看出，經(jīng)過稀釋的血清標(biāo)本，GIGA法檢測乙肝五項(xiàng)各指標(biāo)陽性率均大幅度下降，與ELSIA法陽性符合率降為：HBsAg 82.4%、HbsAb 65.8%、HbeAg 78.2%、HbeAb 59.7%和HbcAb 75.4%，各指標(biāo)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3討論

HBV是威脅人類健康的重要病原體，我國的HBV感染情況尤為嚴(yán)重，在臨床實(shí)踐中，各科均對HBV的檢測有較高的要求希望快速準(zhǔn)確地得到HBV檢測結(jié)果。乙肝五項(xiàng)作為臨床常用的診斷治療HBV的檢測指標(biāo)，具有重要的應(yīng)用價(jià)值[6-7]，目前，各級實(shí)驗(yàn)室都有開展[8]。在室間質(zhì)量控制中，條件較好的實(shí)驗(yàn)室已應(yīng)用放射免疫和化學(xué)發(fā)光等更敏感的實(shí)驗(yàn)方法，但以ELISA應(yīng)用較普遍，部分實(shí)驗(yàn)室依然應(yīng)用GIGA法檢測。GIGA法檢測乙肝五項(xiàng)，以其快速、簡便、不需特殊儀器、可單人份檢測、便于保存、特異度和準(zhǔn)確度較高等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于臨床對乙型肝炎的初篩、急診和無償獻(xiàn)血等場所，為各級實(shí)驗(yàn)室，特別是實(shí)驗(yàn)條件較差的初級實(shí)驗(yàn)室所廣泛采用。但是由于方法學(xué)和制造工藝等因素，GIGA法又有其自身的缺點(diǎn)，如檢測底限為1 ng/mL，較ELISA法底限的0.1 ng/mL檢測靈敏度差，特別是對一些抗原抗體滴度不高的標(biāo)本，容易造成漏檢[9]。在室間質(zhì)評活動中，因質(zhì)控品的制備方法和使用基質(zhì)等問題，各抗原抗體的滴度都會有不同程度的稀釋，更易造成結(jié)果的假陰性，測定中應(yīng)與普通血清標(biāo)本相區(qū)別，實(shí)踐證明，用GIGA法做室間質(zhì)控不能得到滿意結(jié)果[10]。ELISA法以其成熟的技術(shù)，超高的檢測靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，彌補(bǔ)了GIGA法的不足，建議在臨床試驗(yàn)過程中，不應(yīng)單純以GIGA法結(jié)果判定患者感染情況，應(yīng)以ELISA法或更靈敏的如化學(xué)發(fā)光等方法加以驗(yàn)證，為臨床提供更確切的診斷依據(jù)。

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Analysis of external quality control results of two methods for verifying HBV markers

WuFei

(DepartmentofClinicalLaboratory,LanlingCountyHospitalofTraditional

ChineseMedicine,Linyi,Shandong277700,China)

Abstract:ObjectiveTo compare the difference of hepatitis B 5-index results detected by the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and colloidal gold immunochromatographic assay (GIGA) for verifying the method selection of HBV markers inter-laboratory quality control.MethodsThe ELISA reagent and GIGA strip were used to detect five indexes in 420 samples.The positive samples detected by both two methods were diluted by 1:256 times were performed the related antigen and antibody detection.The detection results were analyzed statistically.ResultsExcept the result of hepatitis B surface antigen had no significant difference,other indexes all had significant differences,the result differences were more significant after dilution.ConclusionThe GIGA method for detecting hepatitis B 5 indexes has lower sensitivity than the ELISA method and has certain missed diagnosis rate,and is unsuitable for the detection of the external quality control,the ELISA method should be used to confirm.

Key words:enzyme linked immuno sorbent assay;colloidal gold immunochromatographic;hepatitis B five indexes；quality control

(收稿日期：2015-07-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.01.020

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)01-0047-02

作者簡介：吳飛，男，主管技師，主要從事醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)研究。