周理　葛波

摘要：Polycomb group（PcG）蛋白是一組參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控且進(jìn)化極為保守的轉(zhuǎn)錄抑制子，其表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系，而果蠅zeste基因增強(qiáng)子同源物2（EZH2）是其核心成分。近期有研究表明，EZH2在多種腫瘤組織中高表達(dá)，并與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。EZH2的高表達(dá)使其在基因靶向治療研究中受到越來(lái)越多的關(guān)注，可能為泌尿系統(tǒng)腫瘤的治療提供新的分子靶點(diǎn)。

關(guān)鍵詞：果蠅zeste基因增強(qiáng)子同源物2；泌尿系統(tǒng)腫瘤；高表達(dá)；基因治療

中圖分類號(hào)：R737.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-2409（2016）05-0139-04

腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因、多步驟的演進(jìn)過(guò)程。近年來(lái)隨著人們對(duì)腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究和分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展的深入，基因靶向治療在臨床中受到越來(lái)越多的關(guān)注，因此，尋找治療腫瘤的分子靶點(diǎn)具有十分重要的意義。EZH2（enhaneer of zeste homolog 2）是果蠅zeste基因增強(qiáng)子的人類同源基因，是多梳基因家族（polycomb group，PcG）的主要成員，通過(guò)介導(dǎo)調(diào)控相關(guān)基因參與細(xì)胞周期調(diào)控、衰老、細(xì)胞分化等過(guò)程從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。大量研究顯示EZH2與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系，在乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌等惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)EZH2高表達(dá)，EZH2的高表達(dá)維持著腫瘤的高增殖與高轉(zhuǎn)移能力，與腫瘤的惡性程度以及預(yù)后不良密切相關(guān)，這使其可能成為一個(gè)重要的腫瘤治療的新靶點(diǎn)。筆者現(xiàn)對(duì)EZH2基因的生物學(xué)功能以及與泌尿系統(tǒng)腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展作一綜述。

1 EZH2基因的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能

2000年Cardoso等[6]在對(duì)EZH2基因結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)該基因定位于人染色體7q35位置上，EZH2基因在基因組結(jié)構(gòu)中覆蓋了近40 kb，包含20個(gè)外顯子和19個(gè)內(nèi)含子，外顯子長(zhǎng)度為41～323 bp，開(kāi)放讀碼框分布在19個(gè)外顯子上，內(nèi)含子長(zhǎng)度為0.15～17.7 kb。cDNA全長(zhǎng)2.7 kb，含有一個(gè)編碼613個(gè)氨基酸的開(kāi)放閱讀框架。PcG蛋白通過(guò)形成異質(zhì)多聚體而發(fā)揮作用，目前已發(fā)現(xiàn)兩種多聚體復(fù)合物PRCl（Polycomb Repressive Complexl）和PRC2（P0lvcomb Repressive Complex2）。PRC1由超過(guò)10個(gè)亞體組成，包括癌基因BMI、HPC、HPH2和SCML等，PRC2由EZH2、EED、SUZl2和組蛋白結(jié)合蛋白R(shí)bAp46組成。EZH2是PRC2催化活性的關(guān)鍵部位，在它的C端有一個(gè)由Su（vat）3-9、Enhancer of zeste、Trithorax 3種蛋白質(zhì)共同結(jié)構(gòu)域而命名的進(jìn)化高度保守的SET結(jié)構(gòu)域。EZH2介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄抑制需要依賴完整的SET結(jié)構(gòu)域，假如該結(jié)構(gòu)域丟失的話就不能產(chǎn)生抑制表現(xiàn)，甚至在一些情況下可能使基因去抑制化。EZH2的SET結(jié)構(gòu)域具有組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶的活性，可以對(duì)核小體組蛋白H3的27位賴氨酸進(jìn)行甲基化修飾，從而調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄。EZH2還具有DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性，可以使特定基因甲基化，從而沉默靶基因表達(dá)。此外，EZH2在干細(xì)胞自我更新和維持分化潛能以及腫瘤的形成中均起著重要作用。

2 EZH2在泌尿系統(tǒng)腫瘤中的表達(dá)

2.1 EZH2與膀胱癌

膀胱癌是我國(guó)最常見(jiàn)的泌尿生殖系惡性腫瘤，其發(fā)病率居全身惡性腫瘤前列，其中90%以上為移行上皮腫瘤。Wang等使用81例膀胱尿路上皮癌患者的組織標(biāo)本制備成組織芯片，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)其EZH2的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)浸潤(rùn)性高級(jí)別膀胱尿路上皮癌中EZH2的表達(dá)與相鄰正常膀胱組織、非浸潤(rùn)性低級(jí)別膀胱尿路上皮癌、原位癌相比顯著增加；而且原位癌和非浸潤(rùn)性低級(jí)別膀胱尿路上皮癌與相鄰正常膀胱組織相比EZH2的表達(dá)也顯著增加；但是EZH2的表達(dá)和行根治性膀胱切除術(shù)后復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)聯(lián)。李海波等用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和免疫熒光法對(duì)12例正常膀胱組織和68例經(jīng)外科手術(shù)切除并證實(shí)為膀胱尿路上皮癌患者的膀胱組織進(jìn)行EZH2表達(dá)檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)免疫熒光法測(cè)得在正常膀胱組織和膀胱癌組織中EZH2的表達(dá)率為33.3%、79.4%，低分級(jí)和高分級(jí)尿路上皮癌的表達(dá)率為65.0%、100.0%，表淺性與浸潤(rùn)性尿路上皮癌的表達(dá)率為68.9%、100.0%。RT-PCR的結(jié)果為25.0%、84.2%；70.0%、100.0%；72.7%、100.0%。這說(shuō)明EZH2在膀胱尿路上皮癌中明顯高表達(dá)，并且與其病理分級(jí)、臨床分期密切相關(guān)。由此可見(jiàn)，EZH2與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，其很可能成為一個(gè)有價(jià)值的生物標(biāo)志物。

2.2 EZH2與前列腺癌

前列腺癌好發(fā)于老年人，在歐美國(guó)家發(fā)病率極高，現(xiàn)已成為第一位危害男性健康的腫瘤。在我國(guó)，前列腺癌的發(fā)病率雖低于西方發(fā)達(dá)國(guó)家，但近年來(lái)呈迅速增加趨勢(shì)。Tolkach等研究調(diào)查相關(guān)基因在前列腺癌中的作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，EZH2與前列腺癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。蘇燕勝等采用免疫組化法分別檢測(cè)100例前列腺癌組織和30例前列腺良性增生組織中EZH2的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)EZH2在前列腺癌組織中表達(dá)率為80.0%（80/100），在前列腺良性增生組織中表達(dá)率為16.7%（5/30），EZH2在癌組織中的表達(dá)水平明顯高于良性增生組織，根據(jù)前列腺癌Gleason評(píng)分分為高、中、低分化3級(jí)，EZH2表達(dá)率分別為27.3%（9/33）、60.6%（20/33）、97.0%（33/34），由此說(shuō)明EZH2表達(dá)水平與Gleason評(píng)分呈正相關(guān)。仇玲玲等的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EZH2表達(dá)強(qiáng)度與前列腺癌臨床分期、病理分級(jí)以及有無(wú)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性，但與患者年齡和術(shù)前血清前列腺特異抗原（PSA）水平無(wú)相關(guān)性。這說(shuō)明EZH2可作為前列腺癌診斷和預(yù)后的一個(gè)重要參考指標(biāo)。

2.3 EZH2與腎癌

腎癌又稱腎細(xì)胞癌，是泌尿系統(tǒng)常見(jiàn)的腫瘤之一，在成人惡性腫瘤中占2%～3%。腎癌在我國(guó)泌尿生殖系惡性腫瘤中占第二位，發(fā)病率僅次于膀胱癌，但有資料顯示其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。有學(xué)者研究分析了165例腎細(xì)胞癌組織和80例癌旁正常組織，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EZH2在癌組織中的表達(dá)明顯升高，并與腫瘤的臨床分期、病理分級(jí)、有無(wú)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，EZH2表達(dá)陽(yáng)性的患者術(shù)后5年生存率較差，而且還發(fā)現(xiàn)YB1與EZH2兩者的表達(dá)水平呈正相關(guān)，因此，YB1與EZH2二者結(jié)合可能為腎癌的發(fā)展和預(yù)后評(píng)估提供重要參考價(jià)值。劉飛等用Western blot法檢測(cè)12例腎癌和正常腎組織以及正常腎小管上皮細(xì)胞HK-2、人腎癌細(xì)胞ACHN和786-0中EZH2的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EZH2在正常腎組織和細(xì)胞中表達(dá)極低，甚至不表達(dá)，而在腎癌組織和細(xì)胞中高表達(dá)。另外，使用免疫組織化學(xué)法對(duì)64例腎癌和12例正常腎組織進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示EZH2的表達(dá)水平隨臨床分期的增高而增加，在不同病理分級(jí)和是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而在不同性別和年齡中表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。由此說(shuō)明EZH2與腎癌的臨床進(jìn)展有著密切關(guān)系。

3 EZH2與泌尿系統(tǒng)腫瘤的靶向基因治療

RNA干擾技術(shù)（RNAi）是近年發(fā)展起來(lái)的新興技術(shù)，RNAi引發(fā)的基因沉默作用是特異的和有效的，且具有抑制作用強(qiáng)、穩(wěn)定性高、細(xì)胞攝取相對(duì)容易等優(yōu)點(diǎn)，所以它成為當(dāng)前基因治療研究領(lǐng)域應(yīng)用最廣泛的技術(shù)。Wang等采用RNAi技術(shù)體外合成靶向EZH2基因的小干擾RNA（EZH2siRNA），將其轉(zhuǎn)染到膀胱癌T24細(xì)胞株中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EZH2 siRNA能有效地抑制EZH2 mRNA和蛋白的表達(dá)，并顯著降低膀胱癌T24細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移能力，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。由此可見(jiàn)RNA干擾技術(shù)可成功敲低膀胱癌T24細(xì)胞EZH2的表達(dá)，并抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，誘導(dǎo)凋亡。王國(guó)棟等將EZH2 siRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)腎癌769-P細(xì)胞株中，EZH2 siRNA可下調(diào)腎癌769-P細(xì)胞中EZH2的表達(dá)，且使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，并抑制腫瘤細(xì)胞的增殖能力。隨著研究的深入，RNA干擾技術(shù)在腫瘤治療方面的應(yīng)用前景得到了越來(lái)越多的認(rèn)可，但尋找安全有效的基因轉(zhuǎn)運(yùn)載體變得至關(guān)重要。Wu等使用一種新穎的納米顆粒（mPEG-PEI）作為載體將靶向EZH2的小發(fā)夾RNA（EZH2shRNA）轉(zhuǎn)運(yùn)到前列腺癌PC3細(xì)胞中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)mPEG-PEI/EZH2 shRNA可有效地抑制前列腺癌PC3細(xì)胞EZH2的表達(dá)，并具有高轉(zhuǎn)染效率和低細(xì)胞毒性。隨著RNA干擾技術(shù)不斷發(fā)展，其可能成為泌尿系腫瘤治療的一種新方法。

綜上所述，隨著人們對(duì)EZH2基因在腫瘤中的作用及其作用機(jī)制的進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)EZH2基因與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，其可能成為腫瘤新的分子標(biāo)志物和特異性治療靶點(diǎn)。RNA干擾技術(shù)對(duì)基因沉默的特異性和有效性，使其逐漸成為腫瘤治療的一種新方案，因此，泌尿系統(tǒng)腫瘤應(yīng)用以EZH2基因?yàn)榘悬c(diǎn)基因治療的前景是令人期待的。