黃輝　趙丹洋　劉美蓮　蔣宏玲

摘要：目的：分析在正常宮頸上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌組織中Ki-67的表達(dá)并探討Ki-67與宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)系。方法：經(jīng)免疫組化法定量檢測(cè)20例正常宮頸上皮、20例宮頸上皮內(nèi)瘤變及40例宮頸癌中Ki-67的表達(dá)，結(jié)合宮頸癌患者臨床資料分析其與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：Ki-67在正常宮頸上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌組織中的陽(yáng)性率分別為15.0%、45.0%、75.0%，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。生存分析顯示年齡、Ki-67、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期均為預(yù)后影響因素。結(jié)論：Ki-67可能參與宮頸組織的癌變過(guò)程，可作為宮頸癌預(yù)后的影響因素之一。

關(guān)鍵詞：官頸腫瘤；Ki-67；預(yù)后

中圖分類號(hào)：R737.33 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008-2409（2016）05-0044-04

長(zhǎng)期以來(lái)，宮頸癌威脅著全球女性的生命健康。雖然國(guó)內(nèi)外普及宮頸刮片篩查，同時(shí)結(jié)合多種治療方式，但宮頸癌發(fā)病率仍不斷上升，并且近年來(lái)已成為癌癥致死的首要原因。Ki-67是一種衡量惡性腫瘤細(xì)胞增殖活性的敏感指標(biāo)，與多種惡性腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)；其中與宮頸癌預(yù)后的相關(guān)性研究，已作為國(guó)際婦科腫瘤學(xué)研究進(jìn)展的十大熱點(diǎn)之一。本研究通過(guò)檢測(cè)Ki-67在各宮頸組織中的表達(dá)，結(jié)合患者的隨訪情況進(jìn)行分析，研究Ki-67與宮頸癌預(yù)后的關(guān)系，探討其在宮頸癌生物學(xué)行為中的意義。

1對(duì)象與方法

1.1對(duì)象

收集我院病理科于2008年1月至2011年1月存檔的宮頸蠟塊共560例，包括正常宮頸組織（Normal cervical epithelia，NCE）75例、宮頸上皮內(nèi)瘤變（Cervieal intraepithelial neoplasm，CIN）113例、宮頸癌（Invasive cervix carcinoma，ICC）372例。NCE組以宮頸錐形切除術(shù)或全子宮切除術(shù)并具備較完整的隨訪資料為標(biāo)準(zhǔn)，篩選出20例。CIN組同NCE組篩選條件選出20例。ICC組按以下條件篩選出40例：行根治性子宮切除術(shù)+雙側(cè)盆腔淋巴結(jié)切除術(shù)，術(shù)前未經(jīng)放化療，術(shù)后全程規(guī)范化同期放化療；隨訪資料要求同NCE。按2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation 0fGynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）進(jìn)行臨床分期：Ⅰ B/ⅡA期18例，ⅡB期10例，Ⅲ/Ⅳ期12例；組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)12例，Ⅱ級(jí)14例，Ⅲ14例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例。

1.2方法

1.2.1免疫組化法 SP染色試劑盒110 ml（通用型，PV-6000，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），鼠抗人Ki-67單克隆抗體0.1ml（濃縮型，ZM-0166，南寧市金墨醫(yī)療科技有限公司）1：300比例稀釋。陰性對(duì)照片采用PBS液代替一抗進(jìn)行操作，陽(yáng)性對(duì)照片采用乳腺癌陽(yáng)性切片。高倍鏡下任取5個(gè)視野，陽(yáng)性結(jié)果為腫瘤細(xì)胞核染為棕黃色；計(jì)數(shù)每個(gè)視野下，每100個(gè)腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量，以百分比形式計(jì)數(shù)。

1.2.2同期放化療方案 ①采用三維適形放療與腔內(nèi)后裝放療：美國(guó)瓦里安UNIQUE直線加速器6 MV X線照射，上至第4腰椎間隙，下至閉孔下緣，前至恥骨聯(lián)合前緣，后至第2椎間隙，左右至真骨盆外1.5 cm。照射劑量：50 Gy/2 Gy/25次，1次/d，5次/周。4周后，給予腔內(nèi)后裝治療：?jiǎn)卧鱼?192 Micro Selectron HDR型后裝機(jī)照射，A點(diǎn)照射量30 Gy/6 Gy/5次，1次/周，其等效劑量為90 Gy。從放療之日起至放療后第5周定期陰道沖洗，預(yù)防治療部位感染。②單藥順鉑30 mg·（m²）^-1·次^-1，1次/周，靜脈滴注。期間出現(xiàn)消化道不良反應(yīng)，行鹽酸格拉司瓊注射液對(duì)癥治療。

1.3預(yù)后情況

定期以門診復(fù)查、電話隨診等方式對(duì)出院后宮頸癌患者進(jìn)行隨訪。截止于2015年12月31日，預(yù)后評(píng)價(jià)的起始時(shí)間為手術(shù)日期，隨訪時(shí)間中位數(shù)為61個(gè)月。無(wú)病生存期（disease-free survival，DFS）即從手術(shù)之日起至首次復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或死亡的時(shí)間。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析；臨床病理特征分析采用X²檢驗(yàn)，采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行預(yù)后多因素分析，Log-rank法進(jìn)行DFS的生存分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 Ki-67與宮頸癌病理特征間的關(guān)系

本研究共收集80例宮頸組織，根據(jù)Ki-67指數(shù)將樣本分為Ki-67≤5%組（圖1，A）和Ki-67>5%組（圖1，B），其中Ki-67≤5%組38例，Ki-67>5%組42例。NCE組陽(yáng)性率為15.0%（3/20），CIN為45.0%（9/20）），ICC為75.0%（30/40），呈逐漸上升趨勢(shì)。Ki-67陽(yáng)性率在NCE組、CIN組、ICC組之間、不同分化程度之間、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；其他指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。詳見(jiàn)表1。

2.2預(yù)后生存分析

宮頸癌組共40例，Ki-67≤5%組死亡3例，病死率30.0%；Ki-67>5%組死亡7例，病死率23.3%，兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）?？傮w中位DFS為65.3個(gè)月（95%可信區(qū)間：54.5～68.5月），其中Ki-67≤5%組10例，中位DFS為90個(gè)月（95%可信區(qū)間：85.7～92.7月）；Ki-67>5%組30例，中位DFS為63個(gè)月（95%可信區(qū)間：53.1～70.3月）；兩組中位DFS比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X²=3.733，P=0.046），且Ki-67>5%組較Ki-67≤5%組偏低。

2.3預(yù)后影響因素分析

Ki-67≤5%組共1例局部復(fù)發(fā)，無(wú)區(qū)域轉(zhuǎn)移，1例遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，局部控制率為90.0%；Ki-67>5%組共7例局部復(fù)發(fā)，1例區(qū)域轉(zhuǎn)移，2例遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，局部控制率為78.1%，兩組局部控制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X²=3.605，P=0.047）。Cox回歸模型分析結(jié)果顯示：年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Ki-67表達(dá)均為預(yù)后的影響因素。詳見(jiàn)表2。

3討論

Ki-67是一種參與調(diào)控細(xì)胞有絲分裂周期的DNA結(jié)合蛋白，是國(guó)際上公認(rèn)的表示細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)，其敏感性優(yōu)于增殖細(xì)胞核抗原指數(shù)和DNA指數(shù)。腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，Ki-67幾乎參與了腫瘤生物學(xué)行為的全部過(guò)程，并且與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和預(yù)后有關(guān)。Rokita等研究發(fā)現(xiàn)Ki-67有助于鑒別和篩選不典型增生的鱗狀上皮與CIN，同時(shí)可作為評(píng)估患者預(yù)后的參考指標(biāo)。張燕等研究表明，Ki-67與p16的聯(lián)合檢測(cè)可明確診斷不易識(shí)別的間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞和微小浸潤(rùn)灶。

本研究結(jié)果顯示，Ki-67在NCE組、CIN組、ICC組之間呈逐漸上升趨勢(shì)表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與國(guó)內(nèi)外諸多研究結(jié)果基本一致。劉嶸等研究得出早期ICC中Ki-67陽(yáng)性率Ⅱ期高于I期（P<0.05），但其與組織學(xué)分級(jí)不相關(guān)；馬莉娟研究顯示：Ki-67與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及分化程度呈正相關(guān)（P<0.05）。本研究結(jié)果表明，Ki-67陽(yáng)性率在I臨床分期≤ⅡA、ⅡB、Ⅲ/Ⅳ3組中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而在分化程度各級(jí)別之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。此外，Ki-67陽(yáng)性率淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與馬莉娟等研究結(jié)果基本一致。常麗琴等研究證實(shí)：Ki-67陽(yáng)性率在早期宮頸癌存活率>5年組與存活率<5年組分別為75%和95%，兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。本研究結(jié)果顯示：宮頸癌患者Ki-67≤5%組的中位DFS為90個(gè)月（95%可信區(qū)間：85.7～92.7月）；Ki-67>5%組的中位DFS為63個(gè)月（95%可信區(qū)間：53.1～70.3月），兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Suzuki等通過(guò)晚期宮頸癌細(xì)胞有絲分裂指數(shù)（MI）與Ki-67標(biāo)記指數(shù)（Ki-67-LI）相結(jié)合，按照公式pMI=MI/Ki-67-LI計(jì)算出增殖細(xì)胞群有絲分裂指數(shù)，結(jié)果顯示pMI對(duì)腫瘤的局部控制率影響最大。Agoff等嘗試采用Ki-67定量分析患者的預(yù)后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ki-67的表達(dá)指數(shù)對(duì)判斷惡性腫瘤患者的預(yù)后有很大意義。Hanprasertpong等研究表明：Ki-67≥30%組預(yù)后比Ki-7<30%組差。本研究結(jié)果顯示，Ki-67≤5%組的局部控制率高于瞄67>5%組，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。經(jīng)預(yù)后影響因素分析顯示，Ki-67為預(yù)后的影響因素之一。

綜上所述，Ki-67可能參與了ICC的演變過(guò)程，但具體機(jī)制尚不清楚，需經(jīng)大樣本、多種蛋白因子研究得以驗(yàn)證，并且以前瞻性隨機(jī)對(duì)照研究方法作為首選，以求研究結(jié)果更具說(shuō)服力。