雷蕾（遼寧省沈陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧沈陽(yáng)110000）

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沈陽(yáng)地區(qū)豬瘟病毒免疫抗體水平監(jiān)測(cè)及分子流行病學(xué)調(diào)查

雷蕾
（遼寧省沈陽(yáng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，遼寧沈陽(yáng)110000）

豬瘟是由豬瘟病毒引起的對(duì)養(yǎng)豬行業(yè)危害較大的傳染病，每年該病的流行均給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)較大的經(jīng)濟(jì)損失，遼寧是我國(guó)的養(yǎng)豬大省，為了了解遼寧省沈陽(yáng)地區(qū)豬瘟病毒的免疫水平，以及豬瘟病毒的流行情況，于2015年對(duì)沈陽(yáng)市規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)及重點(diǎn)散養(yǎng)戶的豬瘟病毒免疫抗體水平進(jìn)行了監(jiān)測(cè)，同時(shí)應(yīng)用熒光RT-PCR方法對(duì)豬瘟的分子流行病學(xué)進(jìn)行了調(diào)查研究。

1　材料與方法

1.1材料

2015年上、下半年各對(duì)全市開(kāi)展一次定點(diǎn)監(jiān)測(cè)和集中監(jiān)測(cè)工作，共采集豬血清樣品8700份，屠宰場(chǎng)組織病料180份。豬瘟阻斷ELISA試劑盒購(gòu)自IDEXX公司，豬瘟病毒核酸熒光RT-PCR試劑盒購(gòu)自生科尚儀公司。

1.2方法

豬瘟病毒免疫抗體檢測(cè)應(yīng)用阻斷ELISA方法，將豬血清離心后取清亮上清分裝冷凍保存，試驗(yàn)按照豬瘟阻斷ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)方法進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：陰性對(duì)照的平均OD450大于0.500，陽(yáng)性對(duì)照的的阻斷率＞50%，該實(shí)驗(yàn)成立。樣品的阻斷率≥40%時(shí)，該樣本可判定為陽(yáng)性；樣本阻斷率≤30%時(shí)，判定為陰性；當(dāng)樣本阻斷率在30%～40%之間時(shí)，判定為可疑，應(yīng)數(shù)日后對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行重新檢測(cè)。

豬瘟分子流行病學(xué)調(diào)查應(yīng)用熒光RT-PCR方法進(jìn)行，首先研磨組織臟器，離心后取上清，用Trizol方法提取病料的核酸，將核酸加入熒光RT-PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)體系及程序按照熒光RT-PCR試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。判定標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)Ct值＜30時(shí)，且曲線為對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線，判定為陽(yáng)性，Ct值＞30時(shí)判定為陰性。

2　結(jié)果

2.1豬瘟病毒免疫抗體合格率

共檢測(cè)豬血清樣品8700份，合格7531份，合格率為86.56%，其中規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)檢測(cè)血清樣品7700份，合格6756份，合格率為87.74%，重點(diǎn)散養(yǎng)戶檢測(cè)血清樣品1000份合格775份，合格率為77.5%，可以看出規(guī)?；i場(chǎng)的豬瘟免疫抗體水平高于散養(yǎng)戶。

2.2豬瘟病毒熒光RT-PCR檢測(cè)

共檢測(cè)組織臟器樣品180份，經(jīng)豬瘟熒光RT-PCR方法檢測(cè)，結(jié)果表明豬瘟病毒核酸熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果均為陰性。

3　討論

由于豬瘟對(duì)養(yǎng)豬業(yè)巨大的危害性，豬瘟被OIE（國(guó)際獸疫局）定為A類(lèi)傳染病，我國(guó)將其列為一類(lèi)傳染病，該病是目前危害我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要傳染病。我國(guó)目前對(duì)豬瘟采取強(qiáng)制免疫的預(yù)防措施，各獸醫(yī)主管部門(mén)積極對(duì)豬瘟進(jìn)行免疫預(yù)防，近年來(lái)取得了較好的效果，有效的預(yù)防了豬瘟的流行。豬瘟免疫抗體的水平與疫苗質(zhì)量，母源抗體水平，免疫程序以及豬個(gè)體的免疫應(yīng)答有關(guān)，本研究結(jié)果表明該地區(qū)規(guī)?；i場(chǎng)的抗體水平較高，而散養(yǎng)戶由于免疫工作開(kāi)展較難，散養(yǎng)戶免疫意識(shí)薄弱等原因抗體水平相對(duì)較低，因此未來(lái)應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)散養(yǎng)戶的免疫。

本研究2015年全年采集的組織臟器病料樣品，豬瘟熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果均為陰性，說(shuō)明該地區(qū)由于免疫水平較高，未發(fā)生豬瘟病毒的流行。本研究為該地區(qū)進(jìn)一步預(yù)防和控制本地區(qū)豬瘟的流行提供了參考。

DOI:10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．02.013