鐘偉球

博羅中等專業(yè)學校 廣東博羅 516100

液相色譜-質譜法測定酒中甜蜜素含量的研究

鐘偉球

博羅中等專業(yè)學校 廣東博羅 516100

甜蜜素是我國廣泛使用的甜味劑，過多食用會對人體產生不良影響，因此需要嚴格控制甜蜜素的含量。本文研究測定酒中甜蜜素的含量，通過對液相色譜－質譜/質譜法這一標準進行反復研究，并進一步優(yōu)化，結果表明，優(yōu)化后的該方法測定甜蜜素的含量既簡單易行，又大大減少假陽性，提高分子結果的準確性。

液相色譜-質譜法;甜蜜素；測定

一、引言

甜蜜素（Sodium Cyclamate）學名環(huán)己基氨基磺酸鈉，是食品生產中常用的添加劑，其口感好、價格低廉，甜度是蔗糖的30～40倍，而價格僅為蔗糖的3倍，若經常食用甜蜜素含量超標的飲料或其他食品，就會因攝入過量對人體的肝臟和神經系統(tǒng)造成危害。因此，許多國家禁止或限制使用甜蜜素，我國食品安全國家標準GB2760-2011中對甜蜜素的使用范圍和最大使用量做了限制。除了在配制酒中可以使用甜蜜素，而且最大使用量為0.65g/ kg外，在蒸餾酒和發(fā)酵酒中均不得使用甜蜜素。為保障人們身體健康，研究能夠準確、快速測定酒中甜蜜素的方法是十分必要和具有現實意義的。目前我國酒中甜蜜素含量的測定主要依據SN/ T1948-2007進出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測方法∶液相色譜－質譜/質譜法，該方法中，兩對離子對通過兩種離子模式進行采集，相對較繁瑣。本實驗將對此方法進行優(yōu)化，使得該方法測定酒中甜蜜素的含量更為簡便、高效。

二、材料與方法

（一）材料與試劑

酒，監(jiān)督抽檢；乙酸、甲醇均為色譜純；甜蜜素標準物質：純度≥99.8%；試驗用水為超純水。

（二）儀器與設備

Agilent-1260高效液相色譜-4500QTRAP質譜儀，美國AB公司；S205DU分析天平。

（三）方法

1、對照品儲備液。準確稱取甜蜜素501.08mg，置50mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，即得甜蜜素對照品儲備液，濃度為10.00mg/mL。

2、對照品工作液。精密量取對照品儲備液0.1ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻(濃度為100.0μg/ml)，精密量取該溶液1ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得對照品工作液(濃度為1.000μg/ml)。

3、標準曲線。取5個10mL容量瓶，分別加入對照品工作液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL，加水定容至刻度，搖勻，即得曲線L1、L2、L3、L4、L5，甜蜜素濃度分別為10.00、20.00、50.01、100.0、200.0ng/mL。

4、色譜條件。色譜柱∶AgilentSB-Aq4.6mm×100mm，2.7μm；流動相組成為∶A-0.1%乙酸水溶液，B-甲醇，流速∶0.7mL/min；柱溫30℃；進樣量∶5μL。等度洗脫，比例為50∶50。

表1 甜蜜素檢測的質譜條件

5、質譜條件。離子源∶電噴霧離子源；檢測方式∶MRM；氣簾氣流速∶35L/min；離子源溫度∶550℃；碰撞氣流速∶6L/min；噴霧電壓∶-4500V；輔助氣流速∶50L/min；其余質譜條件見表1。

6、供試品溶液制備。取10mL量瓶，精密加入供試品10mL，用水浴加熱氮吹儀除去乙醇，冷卻后，用水定容至刻度，搖勻，然后用0.22μm濾膜過濾，濾液待上機分析。

7、加標回收率實驗。取10mL比色管，精密加入供試品10mL，并稱其重量，共9份，在氮吹儀上吹至無乙醇味。于1-3份中精密加入對照工作液0.2mL,作為加樣回收1，于4-9份中精密加入對照工作液1.0mL,作為加樣回收2，用水定容至刻度，混勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液上機分析。

8、檢出限溶液制備。取10mL量瓶，精密加入空白供試品10mL，用水浴加熱氮吹儀除去乙醇，冷卻后，加入0.1mL對照品工作液，并用水定容至刻度，搖勻，然后用0.22μm濾膜過濾，濾液待上機分析。

9、樣品測定方法。將處理好的待測液放入自動進樣器的樣品盤上，進樣器自動進樣1μL，數據采集采用Analyst Software工作站進行采集處理，采用Quantitative Analysis軟件進行數據處理，使用外標法進行數據分析，得出樣品溶液中甜蜜素的質量濃度。再根據以下公式得出檢測結果。

結果計算用公式(1)，回收率計算用公式(2)，檢出限計算用公式(3)∶

W=C×V/M (1)

回收率(%)=測得濃度×稀釋倍數×100/加標量 (2)

檢出限(μg/kg)=進樣濃度×稀釋倍數×3/取樣量/信噪比 (3)

式中，W為樣品中甜蜜素的含量(μg/kg)；C為測得濃度/(ng/ mL)；V為稀釋倍數；M為樣品取樣量(g)。

三、結果與分析

表1 甜蜜素標準曲線圖

（一）質譜與色譜條件的選擇

將含有1μg/mL的甜蜜素標準溶液分別在正離子和負離子模式下進行全掃描，找到最佳的電離模式。結果表明在正負離子模式下，各有兩對離子響應相對較強，不過正離子模式下，基線響應較高，綜合離子對響應及離子對之間的豐度比等因素，選擇負離子模式作為掃描模式，選擇[M-Na]作為母離子，進行碰撞能量的優(yōu)化。以178/79.8離子對作為定量離子，178/96離子對作為定性離子。質譜條件見表1。

（二）線性關系

把標準品曲線注入液相質譜聯用儀，以峰面積為(Y)軸，相對質量濃度為(X)軸建立標準曲線，并求出回歸方程，結果見圖1。結果顯示

，該方法的線性范圍為∶10ng/mL～200ng/mL，標準曲線線性良好，其回歸方程及相關系數R分別為∶Y=87602X+62876，R=0.9999。

（三）回收率及精密度結果

圖2 負離子模式下甜蜜素質譜圖及信噪比

表2 回收率及精密度結果

回收率實驗結果表明，低濃度回收率為103，RD值為3.8%，高濃度回收率為99.1%，RD值為2.1%。結果見表2。從表中結果可看出，改方法對酒中甜蜜素的檢測回收率較高，精密度好，能滿足酒中甜蜜素的測定。

（四）樣品檢測結果

按照(1.3.6)對樣品進行前處理，然后進樣分析，外標法進行定量，并通過定性定量離子風度比對結果進行判定，結果見表3。

表3 酒中甜蜜素的測定結果

（五）方法檢出限

在本實驗條件下，在空白樣品中添加標準溶液進行測定，以質譜儀3倍信噪比計算目標物組分的檢出限為4.2μg/kg。結果見圖2及表4。

表4 酒中甜蜜素檢出限結果

四、結論

綜上所述，在食品安全形勢嚴峻的大局下，把好食品安全檢測關非常重要，為了做好酒中甜蜜素的測定工作，通過優(yōu)化檢測手段，研究快速、高效和靈敏度高的檢測方法，將成為甜蜜素檢測的發(fā)展方向。本文主要針對SN/T1948-2007進出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測方法液相色譜-質譜/質譜法中的測定方法進行了研究，把其中的正負離子模式各對一組離子對進行掃描，優(yōu)化成只通過負離子模式對兩組離子對進行掃描，并通過豐度比對結果進行判定。結果表明，該方法在測定酒中甜蜜素時，準確度高，回收率高，檢出限低，而且該方法便于操作、重現性良好，大大減少假陽性，提高了結果的準確性。

[1]章海平．食品中甜蜜素含量測定方法探討與改進[J]．中國衛(wèi)生產業(yè),2015．12(34):191-192．

[2]石敏,呂世玲,李彩霞．利用氣相色譜儀進行白酒中甜蜜素的檢測方法的研究[J]．釀酒,2016．43(3):77-79．

[3]張衛(wèi)軍,毛周平．高效液相色譜法對白酒中甜蜜素含量的測定[J]．釀酒,2016(05)．