尹斯雅

（河北省保定市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，河北保定071051）

淺析食品抗菌素殘留物的篩選檢驗(yàn)

尹斯雅

（河北省保定市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所，河北保定071051）

食品；抗菌素；殘留物；篩選

動(dòng)物飼料中抗菌藥的使用必須受到嚴(yán)格的控制，在美國由FDA獸醫(yī)學(xué)中心（CVM）進(jìn)行檢測。食品性動(dòng)物在養(yǎng)殖的過程中也會(huì)或多或少地使用抗菌素。以美國為例，美國農(nóng)業(yè)部食品安全和檢查機(jī)構(gòu)（FSIS）負(fù)責(zé)檢驗(yàn)進(jìn)入市場的可食組織中藥物、農(nóng)藥、化學(xué)工業(yè)品和重金屬殘留。檢驗(yàn)食品中抗菌素殘留的方法有多種，本文淺析了目前國際上較為前沿的食品中抗菌素殘留的檢測方法，僅供參考。

1　傳統(tǒng)抗菌素篩選檢驗(yàn)法的原理

據(jù)統(tǒng)計(jì)，約80%的家禽、75%的豬、60%的肉用牛和75%的奶牛在飼喂的某個(gè)時(shí)期都曾經(jīng)被飼喂過抗菌素。傳統(tǒng)的抗菌素篩選檢驗(yàn)法是基于待測物中存在的抗菌素殘留對微生物生長的抑制，這些檢驗(yàn)程序是以擴(kuò)散過程或混濁度為基礎(chǔ)。

指示用有機(jī)體在透明液體培養(yǎng)基中的生長可以通過監(jiān)測培養(yǎng)基的混濁度隨時(shí)間而增加來進(jìn)行跟蹤檢測。在基于擴(kuò)散的檢驗(yàn)方法中，待測物通過瓊脂培養(yǎng)基擴(kuò)散，培養(yǎng)基中事先己用敏感微生物的孢子均勻接種，經(jīng)培養(yǎng)后，假如形成了生長抑制區(qū)則說明存在抑制劑，影響抑制區(qū)大小和外觀的因素有多種。微生物生長的密度取決于微生物的初始數(shù)量，因此接種在培養(yǎng)基上能存活的微生物數(shù)量是關(guān)鍵因素之一。由于微生物的生長速率和抑制劑的擴(kuò)散速率與培養(yǎng)溫度密切相關(guān)，因此必須嚴(yán)格控制培養(yǎng)的溫度。

此外擴(kuò)散速率還受到培養(yǎng)基孔徑的影響，一般來說，培養(yǎng)基中瓊脂比例越低抑制區(qū)則越大。影響抑制區(qū)的其他因素包括瓊脂層的厚度、接種菌的種齡、往平板加入樣品的技術(shù)和樣品中存在的共萃取物等?；鞚岫群蛿U(kuò)散過程的檢測可以手工操作，其他許多步驟都能實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制。

2　抗菌素殘留的微生物檢驗(yàn)法

2.1微生物檢驗(yàn)法

STOP法（當(dāng)場棉拭檢驗(yàn)）和CAST法（獸仔抗菌素和磺胺制劑試驗(yàn)）是兩個(gè)典型的抗菌素殘留的微生物檢驗(yàn)方法。用藥棉拭子對可疑組織進(jìn)行采樣，然后將藥棉拭子放在成凍膠的生長介質(zhì)上并相互接觸。如果生長介質(zhì)中接種的為枯草桿菌（ATCC 6633）孢子，在32℃下培養(yǎng)16～18h（STOP法）；如果接種的為巨大芽孢桿菌（ATCC 9885），則在44℃下培養(yǎng)（CAST）。假如結(jié)果呈陽性，隨后可采用薄層生物自顯形法進(jìn)行檢驗(yàn)。

2.2微生物檢驗(yàn)法的應(yīng)用

目前已批準(zhǔn)可用于哺乳期奶牛的藥物有近40種，其中11種已被批準(zhǔn)用于治療乳腺炎和呼吸道感染。生乳須進(jìn)行常規(guī)的抗菌素殘留篩選檢驗(yàn)，被抗菌素污染的牛乳（和乳制品）被FDA視作摻假品。最需關(guān)注的藥物殘留包括青霉素、氨芐青霉素、頭孢菌素、縮酮氨芐青霉素和阿莫西林，所有這些殘留都能引起某些消費(fèi)者的過敏反應(yīng)。酪乳及類似產(chǎn)品在制造過程中產(chǎn)生的酸和風(fēng)味產(chǎn)物、用于加工乳制品和奶酪的發(fā)酵劑中的酸性制劑，以及發(fā)酵劑在還原脫脂乳中的繁殖生長都能干擾抗菌素殘留的測定。

2.3微生物檢驗(yàn)法的優(yōu)缺點(diǎn)

牛乳中抗菌素殘留的篩選檢驗(yàn)法簡單快速（允許多樣品同時(shí)篩選），是有效的監(jiān)測方法。不過，這些檢驗(yàn)都屬于非特異性的，而且只對能夠抑制指示生物體生長的生物活性殘留有響應(yīng)。在1991年前，正式用于生乳中藥物殘留的檢驗(yàn)方法是嗜熱脂肪芽孢桿菌的圓盤檢驗(yàn)（BSDA）。以后，隨著檢測用試劑盒的連續(xù)開發(fā)并不斷獲得批準(zhǔn)，現(xiàn)在已經(jīng)有許多篩選用試劑盒可供選擇購買。然而，至今尚沒有理想的試劑盒可用于檢測生乳中的抗菌藥殘留。

篩選檢驗(yàn)法無法對產(chǎn)生陽性響應(yīng)的待測物進(jìn)行鑒別，也不能測定其殘留量。篩選檢驗(yàn)的陽性結(jié)論只能說明可能存在一種或多種待測物。沒有一種β-內(nèi)酰胺檢測法能夠檢到所有六種已被批準(zhǔn)使用的β-內(nèi)酰胺藥物。某些測定殘留的篩選檢驗(yàn)法的檢測限低于允許水平。因此，篩選檢驗(yàn)法可能提供錯(cuò)誤的違法結(jié)論（即對于某些殘留低于法規(guī)允許的水平，而篩選檢驗(yàn)法卻做出陽性的結(jié)論）。此外，每種試劑盒都不能在允許水平上檢測一種或多種已批準(zhǔn)使用的β-內(nèi)酰胺殘留。有時(shí)，牛乳中來自患乳腺炎奶牛自然分泌的抗病分泌物在抗菌劑篩選檢驗(yàn)中也呈陽性，甚至是對那些從未用過任何獸藥的奶牛產(chǎn)的牛乳的檢測也是如此。不過，這些自然抑制劑只有在體細(xì)胞數(shù)量高出目前法規(guī)規(guī)定的最大體細(xì)胞數(shù)量許多倍的情況下才呈陽性。此外，整個(gè)獸群似乎也不可能都被感染到使整個(gè)卡車罐中裝載的牛乳呈陽性反應(yīng)。

3　CharmⅡ檢驗(yàn)

CharmⅡ檢驗(yàn)是一個(gè)放射性同位素快速檢驗(yàn)方法，該法能夠檢測下述抗菌素族：β-內(nèi)酰胺、四環(huán)素、大環(huán)內(nèi)酯、氨基配糖、新生霉素、磺胺藥物和氯霉素。該檢驗(yàn)方法基于標(biāo)記藥物和牛乳樣品中的藥物殘留互相競爭樣品中的細(xì)菌表面上數(shù)目有限的特異性結(jié)合點(diǎn)。簡單地說，該方法是在牛乳樣品中添加放射性同位素示蹤抗菌素和用于與抗菌素結(jié)合的微生物，短時(shí)培養(yǎng)、離心、去除脂肪、微生物在閃爍液中重新懸浮和計(jì)數(shù)。抗菌素殘留濃度越大，結(jié)合在微生物上的同位素示蹤物越少。利用14C和3H示蹤抗菌素，每管可檢測兩組抗菌素。大約可在12min內(nèi)完成各種抗菌素種類的檢測，檢測限遠(yuǎn)低于比較傳統(tǒng)的擴(kuò)散檢驗(yàn)。Angenics公司已經(jīng)開發(fā)出了采用試劑盒形式檢測β-內(nèi)酰胺抗菌素殘留的快速抗體檢測法（只需6min就可完成測定），該法可在載玻片上完成，并由監(jiān)控裝置檢測。

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．10.011

尹斯雅（1982～），河北省保定市人，碩士研究生，工程師，研究方向?yàn)槭称钒踩?/p>