孫建鳴，徐仁芳

常州市第一人民醫(yī)院泌尿外科，江蘇常州　213000

miR-99a在泌尿系腫瘤中的研究進(jìn)展

孫建鳴，徐仁芳

常州市第一人民醫(yī)院泌尿外科，江蘇常州213000

微小RNA（miRNA）是一類內(nèi)源性非編碼小分子RNA，廣泛存在于動(dòng)植物細(xì)胞體內(nèi)，在人體內(nèi)負(fù)責(zé)調(diào)控將近1/3的基因，參與到某些人類腫瘤形成的過(guò)程中。近年來(lái)，關(guān)于微小RNA家族在多種人類腫瘤中的研究越來(lái)越頻繁。miR-99a（microRNA-99a）屬于miR-99家族，在多種人類惡性腫瘤中呈現(xiàn)低水平表達(dá)。該文簡(jiǎn)單回顧了miR-99a的近期相關(guān)研究，并主要通過(guò)文獻(xiàn)復(fù)習(xí)了其在泌尿系統(tǒng)三大腫瘤：膀胱癌、腎癌、前列腺癌中的一些研究進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)miR-99a在膀胱癌、腎癌、前列腺癌組織或其腫瘤細(xì)胞中均呈低表達(dá)，并且通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染等方法上調(diào)其在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)后發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)能抑制腫瘤的生長(zhǎng)，可展望其對(duì)于泌尿系腫瘤的診斷、治療、預(yù)后的潛能。

miR-99a；膀胱癌；腎癌；前列腺癌

微小RNA（microRNA）是一類內(nèi)源性非編碼小分子RNA，廣泛存在于動(dòng)植物細(xì)胞體內(nèi)，在人體內(nèi)負(fù)責(zé)調(diào)控將近1/3的基因，許多國(guó)內(nèi)外研究表明其參與調(diào)控人類的多種生理病理過(guò)程，其中包括某些人類腫瘤的形成［1］。目前研究已表明，相比于正常組織及細(xì)胞，miRNA在人類惡性腫瘤中的表達(dá)差異明顯，同時(shí)，超過(guò)半數(shù)的miRNA在與腫瘤形成相關(guān)的基因位點(diǎn)上，此外，miRNA還可能與腫瘤形成的信號(hào)通路密切相關(guān)，從而控制或者調(diào)解腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。我們定義在腫瘤組織中過(guò)表達(dá)的miRNA為致癌miRNA，通過(guò)負(fù)調(diào)節(jié)抑癌基因或者能控制細(xì)胞凋亡、增殖和分化的基因來(lái)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，在腫瘤組織中低表達(dá)的則為抑癌miRNA，通過(guò)抑制癌基因或者能控制腫瘤細(xì)胞增殖凋亡的基因來(lái)抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。研究中，世界上首先被確定為抑制腫瘤的miRNA是位于染色體13q14區(qū)域的miR-15和miR-16，其在B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病中的表達(dá)下調(diào)超過(guò)了一半，由于其表達(dá)下調(diào)降低了其對(duì)于腫瘤促進(jìn)因子如BCL-2，BMI-1，CCND2和CCNDl的抑制，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和腫瘤的進(jìn)展獲得相對(duì)的促進(jìn)效果。相反的，在大部分腫瘤組織中miR-21呈現(xiàn)高表達(dá)，miR-21能夠抑制前凋亡因子如PTEN或者PDCD4，從而刺激腫瘤的發(fā)生和發(fā)展［2］。miRNA家族中的miR-99a在泌尿系腫瘤中國(guó)內(nèi)外亦多有研究報(bào)道，現(xiàn)該文就miR-99a在泌尿系腫瘤中的相關(guān)研究進(jìn)展文獻(xiàn)綜述如下，以展望其對(duì)于泌尿系腫瘤的診斷、治療以及預(yù)后的潛能。

1　miR-99a的近期相關(guān)研究

目前國(guó)內(nèi)外已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iR-99a在人類惡性腫瘤中呈現(xiàn)低水平表達(dá)，這意味著其可能是一個(gè)潛在的腫瘤抑制因子。已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道在多種人類惡性腫瘤中表達(dá)水平下調(diào)，起著腫瘤抑制因子的作用。有研究發(fā)現(xiàn)miR-99a在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)下調(diào)，而且miR-99a表達(dá)水平越低，患者的預(yù)后越差，說(shuō)明miR-99a與其患者的預(yù)后負(fù)相關(guān)。該研究還通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的方式研究了上調(diào)miR-99a可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，同時(shí)還能促進(jìn)食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的凋亡［3］。Turcatel G［4］等通過(guò)研究正常小鼠乳腺上皮細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)miR-99a參與調(diào)解TGF-β誘發(fā)的上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的過(guò)程，促進(jìn)了乳腺癌的形成。Gu W等［5］通過(guò)檢測(cè)肺癌組織和肺癌細(xì)胞中miR-99a表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)miR-99a明顯呈低表達(dá)，同時(shí)將miR-99a的表達(dá)水平與臨床病理因素進(jìn)行相關(guān)性進(jìn)分析，認(rèn)為miR-99a表達(dá)水平與肺癌患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Tortes A等［6］通過(guò)研究46例子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本中miR-99a的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，miR-99a在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)水平較正常癌旁組織明顯降低。此外，miR-99a還在肝癌［7］、頭頸鱗細(xì)胞癌［8］、口腔鱗癌［9］等人類腫瘤中低表達(dá)，并且明顯抑制這些腫瘤的發(fā)生發(fā)展，預(yù)示著miR-99a可能作為一個(gè)潛在的腫瘤抑制因子，有早期診斷腫瘤的潛能。然而，miR-99a并非在所有惡性腫瘤中都呈低表達(dá)，有文獻(xiàn)顯示miR-99a可能在某些惡性腫瘤中起著致癌因子的作用。Li X等［10］發(fā)現(xiàn)在胃癌組織標(biāo)本中，miR-99a的表達(dá)水平高于正常組織兩倍以上。Zhang L等［11］通過(guò)68例兒童急性髓性白血病、8例慢性髓性白血病和12例正常對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)，miR-99a在兒童髓性白血病中的表達(dá)明顯上調(diào)，同時(shí)通過(guò)研究其機(jī)制發(fā)現(xiàn)miR-99a可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，具有致癌作用。因此，miR-99a在人類惡性腫瘤中究竟是作為抑癌因子還是致癌因子尚值得進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究與討論近年研究發(fā)現(xiàn)miR-99a亦在膀胱癌，前列腺癌，腎癌，兒童腎上腺皮質(zhì)腫瘤［12］等泌尿系統(tǒng)腫瘤中呈低表達(dá)，因此，miR-99a可能是泌尿系腫瘤的潛在治療靶點(diǎn)。該文就miR-99a在部分泌尿系腫瘤中的作用機(jī)制及意義進(jìn)行綜述。

2　miR-99a與泌尿系統(tǒng)腫瘤

目前已有相關(guān)研究報(bào)道證實(shí)miR-99a參與膀胱癌、腎癌、前列腺癌、兒童腎上腺皮質(zhì)腫瘤等疾病的發(fā)生及發(fā)展。miR-99a表達(dá)的高低與腫瘤分期分級(jí)方面也有一定的相關(guān)性，通過(guò)一些外源性方法提高miR-99a在泌尿系腫瘤中的表達(dá)可抑制腫瘤的病理進(jìn)程，提示miR-99a對(duì)泌尿系腫瘤的發(fā)展具有重要的調(diào)節(jié)作用。

2.1miR-99a與膀胱癌

膀胱癌目前是中國(guó)泌尿系惡性腫瘤中發(fā)病率最高的腫瘤，亦是全身十大常見(jiàn)腫瘤之一，膀胱癌中最常見(jiàn)的是膀胱尿路上皮癌（Urothelial carcinoma of the bladder，UCC），約占膀胱癌患者總數(shù)的90%以上。目前UCC的生物學(xué)機(jī)制尚不清楚，使該病的臨床治療存在一定的困難。最新的研究表明，miRNA在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要的調(diào)控作用。國(guó)外有通過(guò)研究72例正常膀胱樣本與6組膀胱腫瘤細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)在低分化的UCC中有眾多miRNA分子呈低表達(dá)，特別是miRNA-99a。miRNA-99a的缺失可以引起成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3（FGFR3）的上調(diào)從而導(dǎo)致個(gè)體基因突變。而且miRNA的改變導(dǎo)致的FGFR3上調(diào)發(fā)生在基因突變之前。這為尋找低分化膀胱腫瘤早期診斷的標(biāo)志物提供了新的理論基礎(chǔ)。大量的遺傳及表觀遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，P53基因的缺失與高分化的UCC密切相關(guān)。

2.2miR-99a與腎癌

腎細(xì)胞癌（Renal Cell Carcinoma，RCC），簡(jiǎn)稱腎癌，在泌尿系惡性腫瘤中的發(fā)病率逐年上升，目前占到全部泌尿系惡性腫瘤的3%左右，腎癌患者的早期診斷較為困難，文獻(xiàn)顯示大約1/3的患者在已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的情況下才明確診斷，同時(shí)腎癌患者術(shù)后出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的比列在30%～40%。腎癌生物學(xué)行為極為多變，至今尚未明確闡明其發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移的機(jī)制，同時(shí)放療、化療以及激素治療對(duì)于腎癌的效果均不能讓人滿意。Cui L等［13］研究發(fā)現(xiàn)在腎癌細(xì)胞中miR-99a能使細(xì)胞周期抑制于G1期同時(shí)能抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲。哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）是一類絲/蘇氨酸激酶，可接收生長(zhǎng)因子、營(yíng)養(yǎng)、能量等多種信號(hào)，并通過(guò)PI3K/AKT或Ras/ERK信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮作用，對(duì)mTOR信號(hào)通路的抑制可以使細(xì)胞停滯在G1期而觸發(fā)細(xì)胞凋亡［14］通過(guò)生物信息搜索（Targetscan，Pictar，MICROCOSM）及熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)（Luciferase activity assay）可以證明miR-99a下游中的直接靶點(diǎn)蛋白包括mTOR，而且mTOR的相對(duì)蛋白水平與miR-99a的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，對(duì)mTOR下游相關(guān)蛋白的檢測(cè)結(jié)果顯示通過(guò)miR-99a mimics轉(zhuǎn)染可抑制mTOR通路（mTOR/P70S6K/ 4E-BP1），下調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白（cyclin D1，cyclin D3，cyclin E）在腎癌786-0細(xì)胞系中的表達(dá)，從而阻滯細(xì)胞周期G1期。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體（insulin-like growth factor 1 receptor，IGF-1R）是一跨膜受體，屬于受體絡(luò)氨酸激酶。生物信息搜索（Targetscan，miRanda）顯示IGF-1R 3'-UTR上包含高度保守的假定的miR-99a結(jié)合位點(diǎn)，提示IGF-1R可能是miR-99a的直接靶點(diǎn)蛋白。IGF-1R可誘導(dǎo)IRS1/IRS2、Shc等底物磷酸化，同時(shí)啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)PI3K/ AKT和RAS/ERK信號(hào)通路，活化下游的mTOR等靶蛋白，最終完成各種生物學(xué)效應(yīng)［15］。多項(xiàng)研究顯示，IGF-1R在腎癌中高表達(dá)并誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生，但具體調(diào)節(jié)機(jī)制目前尚未明確［16］。對(duì)20例腎癌及癌旁組織標(biāo)本組織檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IGF-1R表達(dá)明顯上調(diào)，推測(cè)除直接抑制mTOR通路，上調(diào)miR-99a表達(dá)通過(guò)直接下調(diào)腎癌細(xì)胞中IGF-1R表達(dá)，間接抑制mTOR通路，阻滯細(xì)胞周期G1期，從而顯著抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

2.3miR-99a與前列腺癌

前列腺癌是美國(guó)診斷率最高的惡性腫瘤，在男性腫瘤中，其死亡率高達(dá)第二位。起初，前列腺癌的發(fā)生發(fā)展依賴于雄激素的作用，因此，最初的前列腺癌的治療都是通過(guò)睪丸切除或者雄激素的內(nèi)分泌阻斷治療來(lái)達(dá)到阻斷雄激素的目的。但是前列腺癌常常發(fā)展到雄激素抵抗轉(zhuǎn)移期，從而導(dǎo)致了治療的困難。因此，研究了解前列腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制將更好的針對(duì)晚期前列腺癌進(jìn)行有效的治療。有研究發(fā)現(xiàn)在高級(jí)別前列腺癌細(xì)胞系C4-2中miR-125b與miR-99家族（miR-99a，-99b，-100）均呈現(xiàn)低表達(dá)。經(jīng)過(guò)病毒轉(zhuǎn)染后的前列腺癌細(xì)胞系WPE1-NB26較之于未轉(zhuǎn)染的親代細(xì)胞系RWPE1中，miR-99家族同樣呈低表達(dá)。所有以上四組miR分子相對(duì)于正常人前列腺組織，均在人前列腺癌組織中低表達(dá)。miR-99a，-99b、-100通過(guò)轉(zhuǎn)染入前列腺癌細(xì)胞中可抑制前列腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)以及前列腺特異性抗原（PSA）的表達(dá)，提示miR-99家族可能起到抑制前列腺癌發(fā)生發(fā)展的作用。

3　展望

科技的進(jìn)步日新月異，同時(shí)醫(yī)療器械的發(fā)展也與日俱進(jìn)，隨著對(duì)腫瘤的研究不斷的深入，泌尿系腫瘤更加微創(chuàng)化、個(gè)體化的治療的時(shí)代必將到來(lái)。在目前看來(lái)，為了治療腫瘤，我們不僅要改進(jìn)外科手術(shù)、規(guī)范手術(shù)操作，更重要的是要有綜合治療的理念以及注重多學(xué)科的協(xié)作。然后現(xiàn)在的問(wèn)題仍然在于如何挑選出合適的腫瘤的耐藥基因，同時(shí)發(fā)現(xiàn)對(duì)于該基因治療敏感的患者，從而最終有效的提高治療效率以及實(shí)現(xiàn)治療方案的個(gè)體化。當(dāng)代科學(xué)技術(shù)的告訴發(fā)展為我們提供了高效篩選基因的技術(shù)，該技術(shù)能夠在一定程度在幫助患者發(fā)現(xiàn)針對(duì)其自身敏感性相對(duì)高的靶基因，從而最終實(shí)現(xiàn)個(gè)體化的腫瘤治療。因此，尋找新的治療靶點(diǎn)對(duì)新型腫瘤特異性治療藥物的開(kāi)發(fā)有著重要的臨床意義。miR-99a參與了膀胱癌、腎癌、前列腺癌、兒童腎上腺皮質(zhì)腫瘤等多種泌尿系腫瘤的發(fā)生發(fā)展，其高表達(dá)對(duì)多種腫瘤具有潛在的治療作用，并且在泌尿系腫瘤的早期診斷、腫瘤分期分級(jí)方面也有一定的意義。然而，miR-99a及其相關(guān)通路在泌尿系腫瘤中的作用機(jī)制尚未完全明確，進(jìn)一步闡明其作用機(jī)制并作為泌尿系腫瘤治療靶點(diǎn)的研究對(duì)其臨床應(yīng)用具有重要的作用。

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Research progress of miR-99a in Urologic Oncology

SUN Jian-ming，XU Ren-fang
Changzhou First People's Hospital Urology，Changzhou，Jiangsu Province，213000 China

Micro RNA（miRNA）are a class of endogenous non-coding small molecule RNA，widelyfound in plant and animal cells in vivo，being responsible for the regulation of genes in nearly a third inhuman and participating in certain processes in human tumor formation.In recent years，research on micro-RNA family in a variety of human tumors becomes more frequent.MicroRNA-99a belongs to miR-99 family which shows a low level expression in a variety of human malignancies.This article simply reviews recent studies of miR-99a and studied its progress in three major urological tumors：bladder cancer，kidney cancer，prostate cancer，through literature review.We found that miR-99a also shows a low expression in these tomors and its high expression（by plasmid transfection）is able to inhibitthe progress of these tomors，which prospects for urinary tract cancer diagnosis，treatment and prognosis of potential.

miR-99a；Bladder Cancer；Kidney Cancer；Prostate Cancer

R737

A

2096-1782（2016）09－0162-04

10.19368/j.cnki.2096-1782.2016.09.162

2016-06-15）

孫建鳴（1989.1-），男，江蘇無(wú)錫人，碩士在讀，主院醫(yī)師，研究方向：泌尿系腫瘤。