陳　麗

（河南省開(kāi)封市食品藥品檢驗(yàn)所，開(kāi)封　475000）

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高效液相法測(cè)定鹽酸小檗堿片含量的不確定度評(píng)定

陳麗

（河南省開(kāi)封市食品藥品檢驗(yàn)所，開(kāi)封475000）

摘要：目的建立以高效液相法測(cè)定鹽酸小檗堿片含量的不確定度評(píng)定的方法。方法通過(guò)對(duì)各分量的分析，計(jì)算各分量的不確定度，最后計(jì)算出合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴(kuò)展不確定度。結(jié)論本文所建立的方法可用于該制劑的不確定度的評(píng)定。關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；不確定度；評(píng)定；鹽酸小檗堿片；含量測(cè)定

不確定度是表征被測(cè)量物質(zhì)真值所處的量值范圍的評(píng)定結(jié)果，是對(duì)實(shí)驗(yàn)測(cè)量結(jié)果的可信度評(píng)定，隨著人們對(duì)中藥質(zhì)量要求的進(jìn)一步提高，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性要求也在不斷提高，不確定度的測(cè)量也被大家所重視，本文用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸小檗堿片含量，并根據(jù)《化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》CNAS—GL06有關(guān)規(guī)定對(duì)其含量的測(cè)定不確定度進(jìn)行評(píng)定。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試藥島津LC-2010C高效液相色譜儀；Sartorius CP225D分析天平、Agela Promosil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm粒徑5 μm）、紫外檢測(cè)器、水為去離子純化水、鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所、批號(hào)：110713-200911含量：86.8%）、分析純磷酸二氫鉀、庚烷磺酸鈉、色譜純乙腈。

1.2色譜條件用十八烷基硅烷基鍵合硅膠為填充劑；用磷酸鹽緩沖溶液-乙腈（60∶40）作為流動(dòng)相、進(jìn)樣量：10 μl、柱溫：36℃、紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：263 nm、流速：1 ml/min。

1.3對(duì)照品溶液的制備取鹽酸小檗堿對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置250 ml量瓶中，加沸水溶解，放冷，用水稀釋至刻度（制成每1 ml中約含鹽酸小檗堿40 μg的溶液），搖勻。

1.4供試品溶液的制備取本品20片，精密稱定，置100 ml量瓶中，加沸水適量使鹽酸小檗堿溶解，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5 ml置50 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取上述兩種溶液各10 μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

2　結(jié)果

2.1數(shù)學(xué)模型①含量測(cè)定不確定度：在實(shí)際操作中，對(duì)照品精密稱取2份，每份經(jīng)稀釋后進(jìn)樣3次，經(jīng)過(guò)回歸計(jì)算確定校正系數(shù)f值，同時(shí)精密稱取供試品2份，每份經(jīng)稀釋后進(jìn)樣2次，根據(jù)峰面積由校正系數(shù)f求得濃度值，以濃度平均值求得供試品的百分含量。根據(jù)藥典規(guī)定，含量計(jì)算公式為：X= (f×AT×M×mR×1/VR) /(Ai×mT×1/ VT1×VT2/VT3×50×1000)。X為鹽酸小檗堿占標(biāo)示量的百分含量（%）；f為校正系數(shù)；AT為供試品溶液色譜峰面積；M為鹽酸小檗堿的平均片重；mR為對(duì)照品稱樣量；1/VR為對(duì)照品的稀釋倍數(shù)；Ai為對(duì)照品溶液色譜峰面積；mT為供試品的稱樣量；1/VT1×VT2/VT3為供試品的稀釋倍數(shù)，50為鹽酸小檗堿的規(guī)格。②稱量帶入的不確定度：根據(jù)天平附帶資料，天平的分辨率為0.01 mg，按矩形分布計(jì)算（k=31/2），則稱量不確定度u (m1) =0.01×10-3/31/2=5.8× 10-6g，天平稱量重復(fù)性誤差為0.02，則重復(fù)性帶入的不確定度u (m2) =0.02×10-3/31/2=1.15×10-5g。天平的標(biāo)準(zhǔn)不確定度（u(m)=（u(m1)2+ u(m2)2）1/2=1.29×10-5。③玻璃儀器的不確定度：本法使用儀器為250 ml、100 ml、50 ml量瓶及5ml移液管，250 ml量瓶容量允差為±0.1 ml；100 ml量瓶容量允差為±0.1 ml；50 ml量瓶（A級(jí)）容量允差為± 0.05 ml，5 ml移液管容量允差為±0.015 ml。按三角分布計(jì)算（k=61/2），則250 ml、100 ml量瓶校正帶入的不確定度urel(V1) urel(V4)分別為0.10/61/2=0.0408；50 ml量瓶校正帶入的不確定度urel(V2)為0.05/61/2=0.0204 ml，5 ml移液管其標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(V3)為0.015/61/2=0.00612 ml。溫度：實(shí)驗(yàn)室溫度在（20±3）℃范圍內(nèi)波動(dòng)，水的體積膨脹系數(shù)為2.1×10-4℃-1，假設(shè)為均勻分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為2.1×10-4×3×100/31/2=0.00115；2.1×10-4×3×50/ 31/2=0.00182；2.1×10-4×3×5/31/2=0.00182 2.1×10-4×3×250/ 31/2=0.0909。以上兩種分量合成得：urel(V1)（0.04082+ 0.001152）1/2=0.00424。urel(V2)（0.02042 +0.001822）1/2= 0.00273。urel(V3)（0.0006122+0.001822）1/2=0.000638。urel(V4) （0.04082+0.09092）1/2=0.0996。

2.2對(duì)照品溶液的相對(duì)不確定度urel(A1)對(duì)照品稱樣u (RM)和溶液色譜峰面積u (A1)引起的不確定度。兩份對(duì)照品稱樣分別為0.01098 g和0.01082 g；稱樣的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：u(RM)=【（u(m)/0.01098）2+（u(m)/0.01082）2】1/2=0.00167。兩份對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣3次，重復(fù)測(cè)量的峰面積分別為：A1：2549410、2548394、2549145和A2：2538467、2539613、2539306 u (RA)的產(chǎn)生主要由重復(fù)性進(jìn)樣引起，由儀器給出的進(jìn)樣峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差為隨機(jī)測(cè)量，按每一次的重復(fù)次數(shù)n=3，用A1的RSD計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)不確定度。A1的RSD值為0.0207%。對(duì)照品溶液色譜峰面積引起的不確定度u (A1) = RSD/31/2=0.000120。鹽酸小檗堿對(duì)照品含量為86.6%，未提供不確定度，則將其視為真值，引入的不確定度為0。合成：urel(A1)=[ u(RM)2+ urel(V4)2+ u(A1)2]1/2=0.0996。

2.3供試品溶液的相對(duì)不確定度分別稱取兩份供試品分別為0.3723g和0.3738g，供試品稱量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度= u(TM)=【（u(m)/0.3723）2+（u(m)/0.3738）2+（u(m)/1.4068）2】1/2=4.97×10-5。兩份供試品溶液分別進(jìn)樣3次，重復(fù)測(cè)量的峰面積分別為：Y1:2348211、2348250、2348267和Y2：2342437、2342468、2342483用Y1的RSD計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)不確定度。Y1的RSD為：0.00122%。供試品溶液色譜峰面積引起的不確定度u (Y1) = RSD/31/2=7.04×10-6。合成：urel(Y1)=[ u(TM)2+ urel(V2)2+ urel(V3)2+ u(Y1)2]1/2=0.00694。

3　合成不確定度U (x)

urel(X)=[ urel(Y1)2+ urel(A1)2]1/2=0. 326。實(shí)驗(yàn)中測(cè)得x= 96.00%。U (x) = urel(X)×x=0. 326×96.00%=0.31%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果一般以擴(kuò)展不確定度來(lái)表示，取包含因子k=2 (置信概率為95%)，則含量測(cè)定擴(kuò)展不確定度U=k×U (x) =2×0.31% =0.62%則含量測(cè)定結(jié)果可表示為96.00%±0.62%（k=2）。

4　總結(jié)

藥品檢驗(yàn)結(jié)果是判定藥品是否合格的重要依據(jù)，《中國(guó)藥典》對(duì)于不確定度的評(píng)定沒(méi)有明確要求，但實(shí)際上在藥品檢驗(yàn)工作中推行不確定度的評(píng)定有一定價(jià)值，它為評(píng)價(jià)分析方法、評(píng)定實(shí)驗(yàn)室及檢測(cè)人員的技術(shù)水平和藥品質(zhì)量的準(zhǔn)確判定都提供了較為客觀的依據(jù)。

本文通過(guò)對(duì)鹽酸小檗堿含量測(cè)定過(guò)程中各步驟不確定度的評(píng)定得出最后測(cè)量結(jié)果為96.00%±0.62%，測(cè)量結(jié)果真實(shí)反映了實(shí)驗(yàn)室日常檢驗(yàn)結(jié)果的水平。

Evaluation of Uncertainty Measurement in Content Determination of Berberine Hydrochloride by HPLC

CHEN Li
(Kaifeng Institute for Food and Drug Control, Henan Province, Kaifeng 475000, China)

Abstract:Objective To establish a method for the evaluation of the uncertainty in the content determination of berberine hydrochloride by HPLC. Methods Each components of uncertainty was calculated by analyzing the various variable parameters among the procedures. The combined standard uncertainty and the expanded uncertainty were then finally obtained by synthesizing the uncertainties of various component variables. Conclusion The method of the evaluation of uncertainty measurement established in this paper is reasonable and reliable.

Keywords:HPLC; uncertainty; evaluation; berberine hydrochloride; content determination

收稿日期：（本文編輯：張文娟本文校對(duì)：張文娟2016-01-08）

doi:10.3969/j.issn.1672-2779.2016.06.067

文章編號(hào)：1672-2779（2016）-06-0138-03