趙敏 王慧琴

?

觀察骨髓間充質干細胞對大鼠心臟移植的免疫調節(jié)作用

趙敏 王慧琴

【摘要】目的 探究骨髓間充質干細胞對大鼠心臟移植的免疫調節(jié)作用。方法 選取實驗動物中心健康雄性SD大鼠與Wistar大鼠，將其分成A、B、C三組，建立大鼠心臟移植模型，貼壁法分離培養(yǎng)大鼠MSC（骨髓間充質干細胞），由受體頸外靜脈注入，觀察移植后大鼠的存活時間，HE（蘇木精-伊紅）染色觀察移植心臟淋巴細胞浸潤程度。結果 B、C兩組與A組對比，大鼠平均存活時間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），B、C兩組對比平均存活時間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。B、C兩組與A組移植心臟病理學分級評分對比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。B、C兩組移植心臟病理學分級評分差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論在體外混合淋巴細胞反應中MSC能抑制T細胞增殖，但在體內實驗中沒有觀察到移植物存活時間顯著延長及沒有減輕淋巴細胞浸潤。

【關鍵詞】骨髓間充質干細胞；心臟移植；免疫調節(jié)

研究表明人體MSC與同種異體T淋巴細胞共同培養(yǎng)不能引起T細胞增殖，并抑制混合淋巴細胞反應，且不受組織相容性復合物限制[1]。MSC在體外混合培養(yǎng)發(fā)揮免疫調節(jié)作用已被證實[2]，但其在體內試驗的有關數(shù)據(jù)不足。本次實驗目的是驗證MSC對大鼠心臟移植免疫調節(jié)作用。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取實驗動物中心健康雄性SD大鼠與Wistar大鼠，將其分成A、B、C三組，A組同種同系移植組，供受體全部為SD大鼠；B組同種異系非給藥對照組，供體Wistar大鼠，受體SD大鼠；C組同種異系給藥實驗組，供體Wistar大鼠，受體SD大鼠。每組各8例，4例觀察存活時間，4例術后第5天觀察移植心臟病理變化。

1.2 方法

建立大鼠心臟移植模型[3]，貼壁法分離培養(yǎng)大鼠MSC（骨髓間充質干細胞），由受體頸外靜脈注入。

1.3 觀察指標

觀察移植后大鼠的存活時間，HE（蘇木精-伊紅）染色觀察移植心臟淋巴細胞浸潤程度。排斥反應分為0～3級[4]（采用ISHT標準）。

1.4 統(tǒng)計學分析

采用SPSS 19.0軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)、計量資料行χ2檢驗/t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

培養(yǎng)48 h后，發(fā)現(xiàn)少量貼壁細胞，呈現(xiàn)成纖維細胞樣。7 d左右85%以上呈現(xiàn)纖維細胞樣，細胞不均，核仁清晰可見。11 d左右單層細胞形成。傳代后細胞分布均勻，呈典型成纖維細胞樣。HE染色方法[5]鑒定表明貼壁細胞（包括小圓形細胞）為MSC而非造血干細胞。A、B、C組大鼠平均生存時間分別為（20.5±4.4）d、（6.4±0.6）d、（6.7±1.0）d。B、C兩組與A組對比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），B、C兩組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。術后5 d，A組心肌細胞出現(xiàn)輕度水腫，細胞結構無變化，骨髓間質未見淋巴細胞侵潤；B、C兩組可見淋巴細胞侵潤。病理分級評分：A、B、C組評分分別為（0.21±0.25）分、評分為（2.97±0.51）分、（3.03±0.57）分。B、C兩組與A組對比差異有統(tǒng)計學意義（P ＜0.05），B、C兩組差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

3 討論

同種原位心臟移植被應用到末期心臟病治療中，術后排斥反應影響心臟移植成敗、患者生存期、生活治療等問題顯現(xiàn)出來。同種移植排斥反應以T淋巴細胞免疫反應為主要機制，已被證實體外培養(yǎng)MSC可抑制混合淋巴細胞反應，有效抑制T細胞增殖，其不受供體、受體或第三者MSC限制，均具有免疫調節(jié)作用[6]。MSC獨特的免疫特性使其能夠在同種異基因存活[7]，根據(jù)其這種特性理論上有理由推斷MSC在異基因移植宿主內長期存活，避免宿主免疫監(jiān)視[8]，而本次研究將MSC異基因移植到大鼠體內，未發(fā)現(xiàn)大鼠存活時間明顯延長或是降低淋巴細胞侵潤程度。

綜上，在體外混合淋巴細胞反應中MSC能抑制T細胞增殖，但在體內實驗中沒有觀察到移植物存活時間顯著延長及沒有減輕淋巴細胞浸潤。

參考文獻

[1]劉德忠，石炳毅，劉奎利，等.受者同系骨髓間充質干細胞對心臟移植大鼠的免疫調節(jié)作用[J].解放軍醫(yī)學雜志，2012，37（3）：185-189.

[2]秦靜，趙振林.骨髓間充質干細胞的免疫原性特點及其免疫調節(jié)能力[J].現(xiàn)代免疫學，2010，30（6）：515-519.

[3]陳佳，關偉軍，馬月輝.間充質干細胞在各類疾病中的臨床應用[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)（科技版），2015（9）：54-56.

[4]朱希山，臺衛(wèi)平，施薇，等.骨髓和脂肪來源間充質干細胞的免疫調節(jié)作用[J].中國組織工程研究與臨床康復，2011，15（36）：6683-6686.

[5]楊超，肖詩亮，劉成珪，等.間充質干細胞對大鼠心臟移植免疫的調節(jié)作用[J].臨床心血管病雜志，2008，24（4）：307-310.

[6]安志潔，趙麗萍，陳鵬，等.改良式外周置入中心靜脈導管術在乳腺癌化療患者中的應用效果[J].中華現(xiàn)代護理雜志，2011，17 （28）：3405-3408.

[7]黃幼程，張男.超聲引導下微插管鞘技術在乳腺癌患者PICC置管中的應用[J].福建醫(yī)藥雜志，2011，33（6）：163-164.

[8]鮑詠詠.非超聲引導下肘上塞丁格技術在乳腺癌患者中的應用體會[J].臨床醫(yī)藥文獻電子雜志，2015，2（15）：2957，2960.

·護理研究·

作者單位： 450000 鄭州澍青醫(yī)學高等?？茖W?；A醫(yī)學部

To Observe the Effect of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells on the Immune Regulation of Heart Transplantation in Rats

ZHAO Min WANG Huiqin, School of Basic Medical Sciences, Zhengzhou Shuqing Medical College, Zhengzhou 450000, China

[Abstract]Objective To explore the effect of bone marrow mesenchymal stem cells on heart transplantation in rats.Methods From the experimental animal center of healthy male SD rats and Wistar rats, divided into A, B, C three groups,to establish the model of rat heart transplantation, adherent cultured rat MSC (mesenchymal stem cells), injected by the external jugular vein of the recipient after transplantation, observe the survival time of rats, HE (hematoxylin and eosin) staining of cardiac allograft lymphocyte infiltration.Results B, C two groups compared with the A group, the average survival time difference was statistically significant (P＜0.05), B, C two groups compared with the average survival time difference was not statistically significant (P＞0.05).There was a significant difference in B, C two group and A group (P＜0.05).There was no significant difference in B and C two groups (P＞0.05).Conclusion MSC can inhibit the proliferation of T cells in vitro, but not significantly prolonged the survival time of grafts in vivo, and no significant decrease of lymphocyte infiltration.

[Key words]Bone marrow mesenchymal stem cells, Heart transplantation, Immune regulation

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.07.142

【文章編號】1674-9308（2016）07-0206-02

【中圖分類號】R654

【文獻標識碼】A