申明莉王玉華

?

SAT技術(shù)用于快速檢測(cè)肺結(jié)核的臨床意義

申明莉1王玉華2

【摘要】目的 探討RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)（SAT）快速檢測(cè)肺結(jié)核的效果。方法 對(duì)2015年9月～2016年4月在我院臨床確診100例肺結(jié)核患者和100例疑似肺結(jié)核的患者的痰液分別用SAT法，并與其他方法進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果 100例BD-960陽(yáng)性患者中TB-SAT陽(yáng)性例數(shù)為98例；100例BD-960陰性患者中TB-SAT陽(yáng)性例數(shù)為13例。結(jié)論 SAT技術(shù)用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌臨床價(jià)值較高。

【關(guān)鍵詞】SAT；PCR；肺結(jié)核；肺診斷

中國(guó)是全球結(jié)核病高發(fā)的國(guó)家之一，2010年全國(guó)第5次結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國(guó)活動(dòng)性肺結(jié)核患病率為459/100 000，其中傳染性肺結(jié)核患病率為66/100 000[1-2]。其傳染性、潛伏性、難清除性、再活動(dòng)性、致病復(fù)雜性等防治難點(diǎn)使結(jié)核病防治成為首要任務(wù)[3]。防治結(jié)核病必須要控制活動(dòng)性結(jié)核病，以達(dá)到控制傳染源，保護(hù)易感人群，切斷傳播途徑。其檢測(cè)方法成為關(guān)鍵[4]。SAT-RNA法檢測(cè)操作簡(jiǎn)便，可鑒定結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌，活菌檢測(cè)，最快2 h出結(jié)果[5]。可避免錯(cuò)檢、漏檢，為臨床對(duì)肺結(jié)核早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療、早預(yù)防提供重要依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 病例來(lái)源

選取2015年9月～2016年4月在我院住院患者200例。200例患者中100例為確診病例，男性69例，年齡17～77歲，平均（49.5±6.9）歲；女性31例，年齡17～86歲，平均（35.4±5.2）歲，臨床癥狀和影像學(xué)診斷符合結(jié)核病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。100為疑似病例，表現(xiàn)不明原因發(fā)熱、咳嗽、肺CT顯示肺部有陰影。男性59例，年齡12～85歲，平均（58.5±7.1）歲，女性41例，年齡19～84歲，平均（46.7±5.6）歲。

1.2 試劑與方法

患者的痰標(biāo)本均采用抗酸染色法染色和L-J羅氏培養(yǎng)，染色液試劑盒和培養(yǎng)試劑盒由臺(tái)灣貝索生物有限公司提供；BD-960快速培養(yǎng)由美國(guó)BD公司提供的MGIT液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；T-spot. TB由上海復(fù)興長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供；SAT-TB由上海仁度生物科技有限公司提供；PCR反向雜交法菌種鑒定試劑由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供。痰標(biāo)本留取，囑患者清晨漱口后，咳出的深部痰置于無(wú)菌痰盒內(nèi)，留取4盒3～5 ml。血樣采集抽取足量的外周靜脈血，加至含有肝素抗凝劑的采血管中。

2 結(jié)果

SAT檢測(cè)在肺結(jié)核的快速準(zhǔn)確診斷中優(yōu)于痰涂片、痰培養(yǎng)和T-spot.TB等方法，具體結(jié)果如下：

100例BD-960陽(yáng)性標(biāo)本中，SAT陽(yáng)性率為98%，涂片陽(yáng)性率為31%、羅氏培養(yǎng)陽(yáng)性率為65%、T-spot.TB陽(yáng)性率為98%。

TB-SAT報(bào)告時(shí)間最快24 h，羅氏培養(yǎng)報(bào)告時(shí)間最快為4～6周，涂片為24～48 h，TB-tspot報(bào)告時(shí)間最快為24～48 h。

100例BD960快培陰性中，TB-SAT陽(yáng)性13例，陰性87例，陽(yáng)性率為13%，羅氏培養(yǎng)陽(yáng)性率為3%，涂片陽(yáng)性率為4%，TB-tspot陽(yáng)性率為86%。

100例BD-960培養(yǎng)陽(yáng)性病例中，SAT檢測(cè)陰性2例，經(jīng)過(guò)菌種鑒定后1例為鳥(niǎo)分枝桿菌，1例為淺黃分枝桿菌。

3 討論

結(jié)核分枝桿菌是引起人類結(jié)核病的病原菌，可侵犯全身各器官，但以肺結(jié)核多見(jiàn)，我國(guó)是僅次于印度的結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家，疫情嚴(yán)重[6]。近年結(jié)核病呈明顯上升趨勢(shì)，全球所有傳染性疾病中，結(jié)核病成為成年人的首位死因。對(duì)于感染結(jié)核的患者進(jìn)行早期診斷和治療是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵，也是控制結(jié)核播散的重要環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的結(jié)核桿菌檢測(cè)方法存在諸多弊端，不能實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)核患者的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。因此，發(fā)展能用于診斷結(jié)核的快速敏感的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)十分重要。

SAT熒光定量恒溫檢測(cè)技術(shù)是利用靶標(biāo)RNA被帶有特異性核酸序列組合的含T7啟動(dòng)子的上游引物特異性結(jié)合，在逆轉(zhuǎn)錄酶（RT酶）的作用下合成一條RNA和帶有T7啟動(dòng)子引物的DNA單鏈的雜合體雙鏈，雜合體雙鏈上的RNA單鏈被具有活性的核糖核酸酶H（RNA水解酶）水解，留下一條帶有T7啟動(dòng)子引物的DNA單鏈（cDNA），此條DNA單鏈與反轉(zhuǎn)引物結(jié)合，在RT酶的作用下形成都帶有T7啟動(dòng)子的DNA雙鏈，T7RNA聚合酶可以特異性識(shí)別此帶有T7啟動(dòng)子的雙鏈DNA，在T7酶的作用下可以此DNA雙鏈為模版，不斷復(fù)制出100 ～ 1 000條RNA拷貝（受到整體檢測(cè)時(shí)間限制），復(fù)制出的RNA和帶有特異性核酸序列的帶有熒光標(biāo)記的分子信標(biāo)結(jié)合，發(fā)出熒光，在熒光檢測(cè)儀上被實(shí)時(shí)捕獲，直觀反映擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生，同時(shí)，也有部分復(fù)制出的RNA被帶有特異性核酸序列組合的含T7啟動(dòng)子的上游引物特異性結(jié)合，再次進(jìn)入擴(kuò)增過(guò)程，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)TB-RNA的檢測(cè)。

SAT-RNA法檢測(cè)操作簡(jiǎn)便，可檢出人型、牛型、非洲型結(jié)核分枝桿菌，不能檢出非結(jié)核分枝桿菌和呼吸道病菌感染，具有很高的特異性，可用于臨床鑒別診斷，靈敏度好，陽(yáng)性檢出率高，活菌檢測(cè)，最快2 h出結(jié)果。可避免錯(cuò)檢、漏檢。其活菌檢測(cè)技術(shù)對(duì)臨床及時(shí)判愈，提高醫(yī)院診療水平，降低患者診治成本具有重要意義[7]。

以病原體RNA為擴(kuò)增靶標(biāo)的核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)（SAT）技術(shù)開(kāi)始應(yīng)用于病原體的核酸診斷[8]。這是結(jié)核病診斷技術(shù)跨時(shí)代的飛躍，也是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平的提高，更是廣大臨床患者的福音。

參考文獻(xiàn)

[1]張娟，孫炳奇，李瑩，等. 實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)在肺結(jié)核臨床診斷中的價(jià)值研究[A]. 中國(guó)防癆協(xié)會(huì)80周年紀(jì)念暨2013年全國(guó)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C]. 北京：中國(guó)防癆協(xié)會(huì)，2013：61-63.

[2]李莉. 徐州市涂陽(yáng)肺結(jié)核患者發(fā)現(xiàn)及流行病學(xué)分析[J]. 實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，22（12）：1489-1491.

[3]謝春雨，李蓬. 2011-2013年河南省肺結(jié)核流行特征分析[J]. 河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2015，26（6）：461-462.

[4]倪麗麗，羅柳林，景玲杰，等. 恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)在肺結(jié)核診斷中的臨床價(jià)值[J]. 中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，35（8）：702-705.

[5]崔振玲，沙巍，黃曉辰，等. RNA恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢測(cè)痰標(biāo)本中結(jié)核分枝桿菌的研究[J]. 中華結(jié)核和呼吸雜志，2011，34 （12）：894-897.

[6]沙巍，何婭，蔣瑞華，等. 實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫放大檢測(cè)（SAT）法對(duì)肺結(jié)核診斷價(jià)值的研究[J]. 中國(guó)防癆雜志，2012，34（6）：377-379.

[7]蔡杏珊，馬品云，張?jiān)毫?，? 實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)在結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用[J]. 中國(guó)防癆雜志，2014，36（6）：458-461.

[8]王永忠，張宏宇，劉小琴，等. 痰液標(biāo)本結(jié)核分支桿菌RNA恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)及臨床應(yīng)用[J]. 山東醫(yī)藥，2011，51（41）：83-84.

【中圖分類號(hào)】R521

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9308（2016）09-0018-03

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.09.012

作者單位：1 黑龍江省牡丹江市康安醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江 牡丹江157011；2 牡丹江市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江 牡丹江 157011

The Clinical Significance of SAT Technique for Rapid Detection of Pulmonary Tuberculosis

SHEN Mingli1WANG Yuhua2, 1 Department of clinical laboratory, Kang’an hospital of Mudanjiang, Mudanjiang Heilongjiang 157011, China, 2 Department of clinical laboratory, Second People's Hospital of Mudanjiang, Mudanjiang Heilongjiang 157011, China

[Abstract]Objective To study the RNA thermostatic expansion real-time fluorescence detection technology (SAT) rapid detection of tuberculosis.Methods 100 cases of tuberculosis patients and 100 cases of patients with suspected tuberculosis sputum in the SAT method respectively were compared from September 2015 to April 2016 in our hospital, and compared with other methods. Results 100 cases of BD-960 in patients with positive TB-SAT positive cases of 98 cases. in 100 patients with BD-960 negative TB-SAT positive cases for 13 patients. Conclusion The SAT technology used in laboratory detection of mycobacterium tuberculosis high clinical value.

[Key words]SAT, PCR, Tuberculosis, Pulmonary diagnosis