李輝英 陳彤 劉顯輝

（廣東省興寧市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科興寧 514500）

●診療經(jīng)驗(yàn)●

尿核基質(zhì)蛋白-22測(cè)定在膀胱癌中的臨床應(yīng)用*

李輝英 陳彤 劉顯輝

（廣東省興寧市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科興寧 514500）

目的：研究分析尿核基質(zhì)蛋白-22測(cè)定在膀胱癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法：隨機(jī)抽取我院2015年9月～2016年3月收治的疑似膀胱癌患者50例作為研究對(duì)象，采用酶聯(lián)免疫法對(duì)其尿樣中的核基質(zhì)蛋白-22水平進(jìn)行測(cè)定，并行尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，分別計(jì)算兩種方法檢查時(shí)患者的診斷陽(yáng)性率。以患者的最終組織病理學(xué)診斷結(jié)果為依據(jù)，對(duì)核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定與尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷膀胱癌的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度進(jìn)行計(jì)算，同時(shí)分析核基質(zhì)蛋白-22水平與膀胱癌患者病理分級(jí)之間的相關(guān)性。結(jié)果：核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定、尿脫落細(xì)胞檢查診斷膀胱癌的陽(yáng)性率分別為66.00%和16.00%，檢測(cè)靈敏度分別為86.67%、40.00%，特異性分別為42.86%、94.29%，準(zhǔn)確度分別為56.00%、78.00%，核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定在檢測(cè)陽(yáng)性率、靈敏度上均顯著高于尿脫落細(xì)胞檢查，而檢測(cè)特異性和準(zhǔn)確度低于尿脫落細(xì)胞檢查，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在組織病理學(xué)檢查確診為膀胱癌的患者中，核基質(zhì)蛋白-22檢測(cè)水平隨病理分級(jí)的升高而升高，且各級(jí)檢測(cè)結(jié)果的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：核基質(zhì)蛋白-22測(cè)定應(yīng)用于膀胱癌的篩查中，具有較高的靈敏度，且其檢測(cè)水平與膀胱癌患者的病理分級(jí)之間存在顯著相關(guān)性，可以將其作為膀胱癌的首選篩查方法，頗具臨床應(yīng)用價(jià)值。

膀胱癌；核基質(zhì)蛋白-22；尿脫落細(xì)胞學(xué)；診斷價(jià)值

膀胱癌是發(fā)生率最高的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤之一，且隨著生活工作環(huán)境的惡化，其發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)，更有數(shù)據(jù)研究顯示，膀胱癌的術(shù)后復(fù)發(fā)率高達(dá)70%～80%[1]。對(duì)于膀胱癌的早期診斷、術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)與評(píng)估都是目前研究的重點(diǎn)。臨床上篩查、診斷膀胱癌的方法較多，其中，膀胱鏡和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查一直被認(rèn)為是膀胱癌初診及隨訪探查的“金標(biāo)準(zhǔn)”[2]，但是前者因檢查有創(chuàng)無(wú)法用于合并出血傾向的急性膀胱炎患者，而后者則相對(duì)而言，敏感性略低，使其使用都受到一定程度的限制；尋找合適的、高敏感性、高特異性、可操作性強(qiáng)、重復(fù)性強(qiáng)的無(wú)創(chuàng)膀胱腫瘤標(biāo)志物成為研究的重點(diǎn)。本文就我院2015年9月～2016年3月收治的疑似膀胱癌患者50例作為研究對(duì)象，探討核基質(zhì)蛋白-22測(cè)定在膀胱癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。現(xiàn)報(bào)告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料隨機(jī)抽取我院2015年9月～2016年3月收治的疑似膀胱癌患者50例作為研究對(duì)象，患者均有肉眼血尿病史，且經(jīng)超聲檢查提示膀胱位置存在占位性病變。50例患者中男36例，女14例；年齡32～79歲，平均（57.2±2.5）歲。

1.2 方法所有患者均行尿樣核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定和尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查。尿樣的采集：選擇在上午8～12點(diǎn)完成尿液標(biāo)本的一次性收集，將獲得的標(biāo)本避光保存，并迅速轉(zhuǎn)入含有防腐劑的尿樣收集瓶中。尿樣核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定：抽取5 ml尿樣，在室溫下進(jìn)行低速離心（離心速度為500 r/min，離心15 min），使用上海酶聯(lián)生物有限公司生產(chǎn)的雙抗體夾心ELISA試劑盒對(duì)尿樣中的核基質(zhì)蛋白-22進(jìn)行測(cè)定，具體方法：抽取9個(gè)孔條，將5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、3個(gè)參考品以及經(jīng)離心處理后的尿樣標(biāo)本依次吸入到已包被單抗的小孔板內(nèi)，在18～25℃的室溫下孵育，孵育時(shí)間為2 h，使其與含異羥基洋地黃毒甙元的單抗、酶聯(lián)羊抗異羥基洋地黃毒甙元相繼發(fā)生反應(yīng)，并以顯色劑進(jìn)行顯色處理，使用伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司生產(chǎn)的酶標(biāo)儀進(jìn)行比色（波長(zhǎng)設(shè)定為490 nm）。所有操作均嚴(yán)格遵照試劑盒及檢測(cè)儀器的操作說(shuō)明進(jìn)行。以測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)品吸光度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)參考品濃度對(duì)其線性可行性驗(yàn)證之后，通過(guò)該標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)尿樣中核基質(zhì)蛋白-22的含量進(jìn)行計(jì)算。當(dāng)核基質(zhì)蛋白-22的檢測(cè)結(jié)果在10 IU/ml以上時(shí)，可以判斷為檢測(cè)陽(yáng)性[3]。尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查：取20 ml尿樣，室溫下在1 500 r/min的離心速度下離心15 min，將獲得的尿沉渣依次進(jìn)行涂片和HE染色處理，并于顯微鏡下觀察并尋找癌細(xì)胞，所有患者均進(jìn)行為期3 d的連續(xù)檢查，只要有一次發(fā)現(xiàn)有癌細(xì)胞存在則可判斷為檢測(cè)陽(yáng)性[3]。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)分別計(jì)算核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定、尿脫落細(xì)胞檢查兩種方法診斷膀胱癌的陽(yáng)性率。以患者的最終組織病理學(xué)診斷結(jié)果為依據(jù)，對(duì)核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定與尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查診斷膀胱癌的靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度進(jìn)行計(jì)算，同時(shí)分析核基質(zhì)蛋白-22水平與膀胱癌患者病理分級(jí)之間的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定、尿脫落細(xì)胞檢查兩種方法診斷膀胱癌的結(jié)果分別對(duì)核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定、尿脫落細(xì)胞檢查診斷膀胱癌的結(jié)果進(jìn)行觀察，可見(jiàn)其檢測(cè)陽(yáng)性率分別為66.00%（33/50）和16.00%（8/50），以組織病理學(xué)診斷結(jié)果為依據(jù)，則其檢測(cè)靈敏度分別為86.67%（13/15）、40.00%（6/15），特異性分別為42.86%（15/35）、94.29%（33/35），準(zhǔn)確度分別為56.00%（28/50）、78.00%（39/50），可見(jiàn)核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定在檢測(cè)陽(yáng)性率、靈敏度上均顯著高于尿脫落細(xì)胞檢查，而檢測(cè)特異性和準(zhǔn)確度低于尿脫落細(xì)胞檢查，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1、表2。

表1 核基質(zhì)蛋白-22水平測(cè)定結(jié)果與組織病理學(xué)診斷結(jié)果的比較（例）

表2 尿脫落細(xì)胞檢查結(jié)果與組織病理學(xué)診斷結(jié)果的比較（例）

2.2 核基質(zhì)蛋白-22水平與膀胱癌患者病理分級(jí)之間的相關(guān)性按照患者的組織病理學(xué)診斷結(jié)果，15例確診為膀胱癌的患者中，病理分級(jí)為G1、G2、G3的患者分別有5例、7例、3例，其核基質(zhì)蛋白-22檢測(cè)水平隨病理分級(jí)的升高而升高，且各級(jí)檢測(cè)結(jié)果的比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 膀胱癌不同病理分級(jí)患者的核基質(zhì)蛋白-22水平比較（±s）

表3 膀胱癌不同病理分級(jí)患者的核基質(zhì)蛋白-22水平比較（±s）

3 討論

核基質(zhì)是細(xì)胞核的骨架結(jié)構(gòu)，可以在維持細(xì)胞核正常形態(tài)、大小等過(guò)程中發(fā)揮重要作用，并能參與DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、RNA合成以及基因表達(dá)的調(diào)控[4]。由于細(xì)胞大小、形態(tài)的異常改變被認(rèn)為是細(xì)胞癌變的重要病理學(xué)特征，則核基質(zhì)的改變也與癌細(xì)胞的出現(xiàn)息息相關(guān)。其中，核基質(zhì)蛋白-22是核基質(zhì)蛋白（與基質(zhì)中的RNA結(jié)合的一種蛋白質(zhì)）的一種，屬于中央核基質(zhì)[5]。正常情況下，協(xié)調(diào)核有絲分裂期間的染色體正確并使其均等地分配到子代細(xì)胞中核有絲分裂裝置蛋白的主要功能，但當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變的時(shí)候，由于惡變細(xì)胞核中的遺傳物質(zhì)無(wú)法在有絲分裂末期完成正常分配，核有絲分裂裝置蛋白的合成量急劇升高，作為核有絲分裂裝置蛋白的亞單位的核基質(zhì)蛋白-22水平也會(huì)相應(yīng)升高，并于細(xì)胞凋亡后經(jīng)細(xì)胞核釋放，以可溶性復(fù)合物或片段的形式存在于尿液中。有調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，與正常人尿路上皮細(xì)胞相比，膀胱癌患者的上皮細(xì)胞中核基質(zhì)蛋白-22的含量可高出25倍，因而通過(guò)對(duì)尿液中核基質(zhì)蛋白-22水平的測(cè)定可以對(duì)膀胱癌患者進(jìn)行早期診斷[6]。

本文分別采用了核基質(zhì)蛋白-22測(cè)定、尿脫落細(xì)胞檢查兩種方法對(duì)50例疑似膀胱癌的患者進(jìn)行了檢查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)核基質(zhì)蛋白-22測(cè)定在檢測(cè)陽(yáng)性率和靈敏度上均相對(duì)較高，且可隨癌癥患者病理分級(jí)的升高的升高，這與腫瘤細(xì)胞惡變程度升高導(dǎo)致的增殖分裂活躍度增加、組織細(xì)胞潰解數(shù)量增多有關(guān)，提示核基質(zhì)蛋白-22是檢測(cè)膀胱癌的敏感指標(biāo)[7]。但是其在檢測(cè)特異性上則比較低，僅為42.86%，這可能與尿管的留置、尿道異物的存在、泌尿系感染、腸代膀胱等有關(guān)。李盛寬等[8]的研究還對(duì)比了初發(fā)性膀胱癌和繼發(fā)性膀胱癌患者的術(shù)前術(shù)后的核基質(zhì)蛋白-22水平，可見(jiàn)，初發(fā)性膀胱癌術(shù)前的核基質(zhì)蛋白-22水平顯著更高，但經(jīng)手術(shù)治療后，則核基質(zhì)蛋白-22水平均顯著降低，提示核基質(zhì)蛋白-22測(cè)定對(duì)于患者的術(shù)后評(píng)估與預(yù)測(cè)也有一定價(jià)值?？偟膩?lái)說(shuō)，核基質(zhì)蛋白-22測(cè)定應(yīng)用于膀胱癌的篩查中，具有較高的靈敏度，且其檢測(cè)水平與膀胱癌患者的病理分級(jí)之間存在顯著相關(guān)性，可以將其作為膀胱癌的首選篩查方法，頗具臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]李輝英.尿核基質(zhì)蛋白-22和液基細(xì)胞學(xué)在血尿患者膀胱癌篩查中的應(yīng)用[J].廣東微量元素科學(xué),2016,23(7):42-44

[2]梁安坡,張玉香,張金莊.尿NMP22及Cox-2蛋白含量檢測(cè)對(duì)淺表性膀胱癌電切術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)判價(jià)值研究[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2015,21(12):1716-1718

[3]吳靜,方克偉.尿液中核基質(zhì)蛋白22聯(lián)合端粒酶活性檢測(cè)診斷膀胱癌的實(shí)驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2013,21(3):595-598

[4]畢長(zhǎng)富,張克榮,董浩,等.尿核基質(zhì)蛋白22測(cè)定在膀胱癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].河北醫(yī)藥,2010,32(14):1847-1848

[5]楊青,李俊,梁朝朝,等.核基質(zhì)蛋白22聯(lián)合尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查對(duì)膀胱癌診斷的價(jià)值[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,47(2):220-222

[6]崔國(guó)興.尿端粒酶、NMP22和ImmunoCyt聯(lián)合檢測(cè)在膀胱癌診斷中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代泌尿外科雜志,2013,18(2):145-148

[7]劉民,劉勝,趙萬(wàn)里,等.尿腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)在膀胱癌早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].河北醫(yī)藥,2011,33(2):179-180

[8]李盛寬,鄧耀良,劉德云,等.尿核基質(zhì)蛋白在膀胱癌中的臨床意義[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,30(5):682-685

The Clinical Application of Urinary Nuclear Matrix Protein-22 determination in Bladder Cancer

LI Hui-ying,CHEN Tong,LIU Xian-hui
(The Department of Clinical Laboratory,Xingning Chinese Medicine Hospital,Guangdong,Xingning514500)

Objective:To study the value of urinary nuclear matrix protein-22 determination in the diagnosis of bladder cancer. Methods:From September 2015 to March 2017,50 suspected bladder cancer patients were randomly selected as the research subjects,by using the method of enzyme-linked immune,the level of nuclear matrix protein-22 in the urine samples were determined,exfoliative urine cytology was also used,the patient's diagnosis positive rates were calculated for two methods respectively.On the basis of the final histopathologic diagnosis,the sensitivity,specificity and accuracy for diagnosis of bladder cancer by the nuclear matrix protein-22 level determination and exfoliative urine cytology examination were compared,at the same time the correlation between the nuclear matrix protein-22 level and pathology classification of patients with bladder cancer was analyzed.Results:The positive rate for the diagnosis of bladder cancer was 66.00%and 16.00%,respectively by the nuclear matrix protein-22 determination and exfoliated urine cytology and the sensitivity were 86.67%,40.00%,the specificity of 42.86%,94.29%and the accuracy of 56.00%,78.00%respectively,the positive rate and the sensitivity of the nuclear matrix protein-22 determination were significantly higher than those of exfoliated urine cytology,but the specificity and the total accuracy were lower than those of exfoliated urine cytology,the differences were statistically significant(P＜0.05).In the patients diagnosed by histopathological examination the level of nuclear matrix protein-22 increased when the pathological grade rose,and the differences of test results were statistically significant among different grades(P＜0.05).Conclusion:The nuclear matrix protein-22 determination has high sensitivity in bladder cancer screening,there is a significant correlation between the test level and the pathological grading of bladder cancer.It can be as the preferred method for screening of bladder cancer,and has clinical value.

Bladder cancer;Nuclear matrix protein-22;Exfoliative urine cytology;Diagnosis value

R737.14

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2016.11.030

2016-10-11）

廣東省梅州市醫(yī)藥衛(wèi)生科研立項(xiàng)課題（編號(hào)：2015-B-81）