林珊 陳達(dá)鑫 趙錦燕 曾建偉 洪振豐#

（1福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院福州 350122；2福建省中西醫(yī)結(jié)合老年性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福州 350122）

●論著●

復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)乙醇代謝的影響*

林珊1,2陳達(dá)鑫1,2趙錦燕1,2曾建偉1,2洪振豐1,2#

（1福建中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合研究院福州 350122；2福建省中西醫(yī)結(jié)合老年性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福州 350122）

目的：探討復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)乙醇代謝的影響。方法：SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、海王金樽組（陽(yáng)性對(duì)照）和復(fù)方片仔癀肝寶高、中、低劑量組，每組8只。給藥后0.5 h除了正常對(duì)照組，其余各組灌胃白酒。采用頂空氣質(zhì)聯(lián)用法（HS-GC-MS）測(cè)定給酒后0.5、1、2、3、5 h大鼠血液中的乙醇濃度，運(yùn)用ELISA法檢測(cè)乙醇達(dá)到峰值時(shí)乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶的含量。結(jié)果：復(fù)方片仔癀肝寶組在不同時(shí)間點(diǎn)大鼠血液中的乙醇、乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶的濃度均低于模型組（P＜0.05）。結(jié)論：復(fù)方片仔癀肝寶促進(jìn)乙醇代謝，達(dá)到解酒的目的。

復(fù)方片仔癀肝寶；乙醇代謝；頂空氣質(zhì)聯(lián)用儀

醉酒是指一次飲酒過量導(dǎo)致血液中乙醇濃度過高，最易誘發(fā)肝及神經(jīng)系統(tǒng)的損傷。含有不同乙醇濃度的酒精進(jìn)入人體內(nèi)后，經(jīng)消化道吸收入血，首先經(jīng)門靜脈入肝臟，肝臟是乙醇的主要代謝場(chǎng)所，因?yàn)橹挥懈闻K才具有乙醇代謝所特有的酶類，所以乙醇代謝具有器官特異性。除肝臟外肌肉組織亦可進(jìn)行少量代謝[1]。解酒的關(guān)鍵是降低血中乙醇以及代謝產(chǎn)物的濃度，減輕其對(duì)各器官的毒性作用[2]。目前解酒主要采用利尿及對(duì)癥處理方法，缺乏特效和特異性的解酒藥，尤其降低過度飲酒引起的肝損傷。復(fù)方片仔癀肝寶是一種由多種中草藥混合而成的中成藥制劑，含有牛黃、田七、蛇膽、茵陳、龍膽、梔子、白芍等藥材，具有較好的保肝護(hù)肝作用。課題組已研究表明，復(fù)方片仔癀對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷具有保護(hù)作用[3]。本實(shí)驗(yàn)采用頂空氣相質(zhì)譜法和ELISA法觀察復(fù)方片仔癀對(duì)乙醇代謝的影響，探討復(fù)方片仔癀肝寶的保肝解酒作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，SPF級(jí)，體重（200±20）g，雄性，許可證號(hào)：SCXK(滬)2008-0016。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室溫度20～24℃，濕度40%～70%[（50±5）%]，風(fēng)速0.1～0.2 m/s，氣流≥28次/min。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及試劑復(fù)方片仔癀肝寶由福建省片仔癀藥業(yè)有限公司提供（批號(hào)：1412061）；北京紅星二鍋頭（56度，北京紅星股份有限公司）；乙醇脫氫酶試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）；乙醛脫氫酶試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）；乙醇色譜純（SIGMA）。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器頂空氣質(zhì)聯(lián)用儀5977 MSD，7890B GC system（安捷倫，美國(guó)）、微量天平（德國(guó)賽多利斯公司）、酶標(biāo)儀EXL800（寶特，美國(guó)）；低溫離心機(jī)（TDZ4A-WS，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動(dòng)物分組及給藥SD雄性大鼠48只，隨機(jī)分為6組，每組8只，分別為正常對(duì)照組、模型組、復(fù)方片仔癀肝寶高劑量組（600 mg/kg）、復(fù)方片仔癀肝寶中劑量組（300 mg/kg）、復(fù)方片仔癀肝寶低劑量組（150 mg/kg）、海王金樽組（300 mg/kg）。正常對(duì)照組和模型組給予生理鹽水，其它各實(shí)驗(yàn)組按照不同劑量灌胃給藥，5 ml/kg。0.5 h后除正常對(duì)照組以外，其余各組紅星二鍋頭5 ml/kg灌胃。在給酒后0.5、1、2、3、5 h眼球后靜脈叢取血，4℃保存，備用。

2.2 頂空氣質(zhì)聯(lián)用儀（HS-GC-MS）檢測(cè)血液中乙醇的濃度

2.2.1 儀器條件自動(dòng)頂空條件：樣品瓶80℃加熱，平衡5 min。氣相色譜條件：Agilent DB-WAX色譜柱（30 m×250 μm，0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度250℃；載氣為He，流量1 ml/min。程序升溫條件：初始溫度40℃，以30℃/min升至130℃，保持2 min。質(zhì)譜條件：電離方式EI，電子能量70 eV；離子源溫度230℃；數(shù)據(jù)采集掃描模式為SIM掃描。掃描質(zhì)量范圍25～150 amu。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線分別吸取乙醇溶液適量置于容量瓶中，加水配成0.3、0.15、0.075、0.037 5、0.018 75 mg/ml溶液，然后各取1 ml置于頂空瓶中，待測(cè)。

2.2.3 樣品處理方法取各組血液400 μl放入20 ml的頂空瓶，80℃加熱5 min，然后自動(dòng)吸取頂空瓶中氣體300 μl進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜檢測(cè)。

2.3 ELISA檢測(cè)血液中乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶的含量按照試劑盒操作說明，檢測(cè)血液中乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶的含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理以（±s）表示，多組均數(shù)間比較采用單因素方差分析檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 建立測(cè)定乙醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線以復(fù)方片仔癀肝寶的濃度為橫坐標(biāo)，乙醇峰面積為縱坐標(biāo)，回歸方程為Y=340.42X+6 825.5，回歸系數(shù)為0.992 5，線性良好。

3.2 復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)乙醇代謝的影響模型組在乙醇灌胃后1 h，乙醇在大鼠血液中的濃度達(dá)到最高，而其余實(shí)驗(yàn)組血液中乙醇濃度有不同程度的降低，尤其復(fù)方片仔癀肝寶組的乙醇濃度顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。雖然復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)乙醇代謝的影響沒有呈明顯的劑量依賴，但高劑量組能明顯降低血液中乙醇的濃度。見表1。

表1 復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)乙醇代謝的影響（μg/ml，±s）

表1 復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)乙醇代謝的影響（μg/ml，±s）

注：與正常對(duì)照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

3.3 復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶含量的影響結(jié)果表明，在1 h血清中乙醇濃度顯著升高，乙醇脫氫酶含量升高，乙醛脫氫酶含量降低。復(fù)方片仔癀肝寶組乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶含量明顯低于模型組（P＜0.05），復(fù)方片仔癀肝寶未提高血清中乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶的含量。見表2。

表2 復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶含量的影響（mmol/L，±s）

表2 復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶含量的影響（mmol/L，±s）

注：與正常對(duì)照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

4 討論

乙醇對(duì)人體生理上有不利影響，已經(jīng)多方面被深入研究過，包括神經(jīng)功能、新陳代謝、心血管機(jī)能、溫度調(diào)節(jié)和骨骼肌疾病等[4]。過量飲酒引起的相關(guān)疾病包括口腔、食道、咽喉、乳腺和肝臟等部分的腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)性疾病、肝硬化和酒精成癮等[5]。因此，研究能夠加快乙醇在體內(nèi)代謝的藥物有十分重要的意義。乙醇在體內(nèi)代謝有三條途徑，即乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶的轉(zhuǎn)化作用、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的微粒體乙醇氧化系統(tǒng)（MEOS）-有賴于細(xì)胞色素P450參與的代謝作用和過氧化小體上觸媒的代謝作用[9]。乙醇被生物體吸收入血之后進(jìn)行代謝，在肝臟中代謝，血液中的含量隨時(shí)間推移不斷減少。通過檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)血液中乙醇及其代謝酶的濃度，可以觀察到乙醇在大鼠體內(nèi)的代謝過程，其變化過程可反映藥物對(duì)酒精代謝的影響[6]。本實(shí)驗(yàn)通過優(yōu)化周鳳枝等氣質(zhì)聯(lián)用儀方法檢測(cè)血液中乙醇濃度和ELISA法檢測(cè)血液中乙醇脫氫酶、乙醛脫氫酶的濃度[7～8]，結(jié)果表明，復(fù)方片仔癀肝寶能降低血液中乙醇的濃度，具有解酒作用。其雖然影響了血液中乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶濃度變化，但未提高血液中兩種酶的活性。因此，復(fù)方片仔癀肝寶加快乙醇在體內(nèi)代謝有可能是通過其他的代謝途徑實(shí)現(xiàn)或者是乙醇在肝臟中代謝后復(fù)方片仔癀肝寶直接影響肝臟中的乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶釋放到血液中。因此，其解酒作用的機(jī)制還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。

復(fù)方片仔癀肝寶解酒作用的發(fā)現(xiàn)對(duì)減少酒精對(duì)人體的傷害以及中成藥的創(chuàng)新應(yīng)用有重要意義。到底其何種成分起解酒作用以及解酒機(jī)制如何，值得進(jìn)一步深入研究，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

[1]韓桂玲,楊海英.酒精的代謝與飲酒對(duì)人體的影響[J].山西醫(yī)藥雜志,2012,41(22):1150-1151

[2]徐燕琴,時(shí)昭紅,馮云霞,等.單味鮮葛花汁對(duì)急性酒精中毒大鼠乙醇代謝的影響[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志,2012,22(1):38-40

[3]黃進(jìn)明,趙錦燕,萬(wàn)蕓,等.復(fù)方片仔癀肝寶對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用研究[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2015,10(9):1216-1218

[4]田禎祥.酒精的代謝及與相關(guān)疾病的特殊劑量關(guān)系[J].棗莊學(xué)院學(xué)報(bào),2014,31(2):140-144

[5]Sridhar D.Health policy:Regulate alcohol for global health[J].Nature, 2012,482(7385):302

[6]任發(fā)政,羅云波,蔣菁莉.枳椇子影響乙醇代謝機(jī)理研究[J].食品工業(yè)科技,2002,23(12):58-60

[7]周枝鳳,陳凌云,沈梅,等.自動(dòng)頂空-氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定血液中乙醇含量[J].理化檢驗(yàn)(化學(xué)分冊(cè)),2010,46(1):22-24

[8]宋莎莎,路景濤,袁平凡,等.復(fù)方枳椇子制劑對(duì)小鼠酒精中毒的解救作用[J].中國(guó)新藥雜志,2013,22(21):2524-2528

[9]張行海.乙醇的代謝及毒性機(jī)理[J].湖北省衛(wèi)生職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1998(2):50-52

Effects of Complex Prescription Pianzaihuang Ganbao on Alcohol Metabolism

LIN Shan1,2,CHEN Da-xin1,2,ZHAO Jin-yan1,2,ZENG Jian-wei1,2,HONG Zhen-feng1,2#
(1The Institute of Traditional Chinese and Western Medicine,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou350122; 2Fujian Provincial Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Fuzhou350122)

Objective:To observed the anti-alcoholism effect of complex prescription Pianzaihuang Ganbao(GB).Methods:Male SD rats were divided into six groups randomly as follows:control group,model group,GB low dose group,GB middle dose group,GB high dose group and Haiwangjinzun group(HWJZ,as positive control).After oral medication,the rats were orally administration with alcohol,except for the rats in the control group.Blood was collected after 0.5,1,2,3,5 hours drinking alcohol separately.The content of alcohol in blood were determined by HS-GC-MS,the content of ethanol dehydrogenase and acetaldehyde dehydrogenase were determined by ELISA.Results:The content of alcohol,ethanol dehydrogenase and acetaldehyde dehydrogenase in blood of the GB groups were decreased(P＜0.05).Concusion:The GB can promote the metabolism of alcohol to accelerate the climination of ethanol.

Complex prescription Pianzaihuang Ganbao;Alcohol metabolism;Headspace gas chromatography-mass spectrometry

R285.5

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2016.11.001

2016-10-13）

2013年度陳可冀中西醫(yī)結(jié)合發(fā)展基金（編號(hào)：CJK2013015）；福建省教育廳A類科技項(xiàng)目（編號(hào)：JA14163）#通訊作者：洪振豐，E-mail：zfhong1953@163.com